一种大叶紫株组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种大叶紫株组织培养的快速繁殖方法，包括大叶紫株无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导等步骤，本发明方法所制备的大叶紫株分化成活率高，生长周期短，为大叶紫株资源的开发利用提供基础。
【专利说明】一种大叶紫株组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及大叶紫珠组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 大叶紫珠，又名羊耳朵、止血草、赶风紫、贼子叶，马鞭草科， 灌木，稀为小乔木，高3-5m，小枝近方形，密生灰白色粗糠状分枝鸾毛。单叶 对生；叶柄粗壮，产广东、广西、贵州、云南。生于海拔100-2000米的疏林下和灌丛中。尼泊 尔、锡金、不丹、马斯克林群岛、留尼汪岛、印度、孟加拉、缅甸、泰国、越南、马来西亚和印度 尼西亚也有分布。以水分充足、土地肥沃、阳光充足的地方，生长为好。种植主要用扦插繁 殖。叶含谷留醇，木犀草素，芹菜素，木犀草素-7-0-葡萄糖醛酸甙，芹菜素-7-0-葡萄糖醛 酸式，β -谷留醇-β -D-葡萄糖式，熊果酸，2 α -羟基熊果酸，山楂酸，二十二烷酸，二十三 烷酸，二十四烷酸，二十三烷酸乙酯及3,7,3'-三甲氧基5,4'-二羟基黄酮。根、地上部 位及叶中均含有两种四环双萜：大叶紫珠萜酮和大叶紫珠萜酮单乙酸酯，叶或根可作内外 伤止血药，治跌打肿痛、创伤出血、肠道出血，咳血、鼻紐，种植技术主要采用自然繁殖，利用 组培技术可以缩短其培养周期，且操作简单可控。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种大叶紫株的快速繁殖方法，由该方法所制 备的大叶紫株分化成活率高，生长周期短，为大叶紫株资源的开发利用提供基础。
[0004] 本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的： 取大叶紫株的叶片，用0. 1%的氯化汞浸泡15min，无菌水冲洗4次，在1%的柠檬酸溶液 中进行切割成〇. 5cmX0. 5cm的小块，消毒处理过的大叶紫株的叶片，接入MS+6-BA2. Omg/ L+IBAO. 15mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基中进行愈伤组织的诱导，pH5.9,暗光 照，温度23°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基MS+6-BA0. 1-0. 2mg/L+NAA0. 03-0. 05mg/ L+2, 4-D1. 5-2. 0mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂进行愈伤组织的分化培养，ρΗ5· 9,光照 30001χ，温度25°C，光期14h/d，分化后的芽苗接入改良1/2MS (大量、微量元素含量减半） 培养基中进行生根诱导，PH5. 9,光照120001X，温度25°C，光期14h/d，试管苗长约4cm时取 出，洗去基部培养基，栽植于高温消毒过的森林腐殖土 ：珍珠岩=2 :1铺设的基质中，一周后 喷施35%乙烯利，每周喷一次，共喷3次，覆盖60%的遮荫网，定时浇水除草，每隔两周喷施 6000倍的乐果，温度控制在25°C，湿度90%，三个月后观察生长情况。
[0005] 采用本发明制备的大叶紫株生根率高，周期短，产量大，利于大规模种植。
[0006] 下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不 局限于下列实施方式。
【具体实施方式】 [0007] 实施例1 取大叶紫株的叶片，用0. 1%的氯化汞浸泡15min，无菌水冲洗4次，在1%的柠檬酸溶液 中进行切割成〇. 5cmX0. 5cm的小块，消毒处理过的大叶紫株的叶片，接入MS+6-BA2. Omg/ L+IBAO. 15mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基中进行愈伤组织的诱导，pH5. 9,暗光照， 温度23°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基MS+6-BA0. lmg/L+NAAO. 03mg/L+2, 4-DL 5mg/ L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂进行愈伤组织的分化培养，pH5. 9,光照30001x，温度25°C，光期 14h/d，分化后的芽苗接入改良1/2MS (大量、微量元素含量减半）培养基中进行生根诱导， PH5. 9,光照120001X，温度25°C，光期14h/d，试管苗长约4cm时取出，洗去基部培养基，栽植 于高温消毒过的森林腐殖土 ：珍珠岩=2 :1铺设的基质中，一周后喷施35%乙烯利，每周喷 一次，共喷3次，覆盖60%的遮荫网，定时浇水除草，每隔两周喷施6000倍的乐果，温度控制 在25°C，湿度90%，三个月后观察生长情况，成活率88%。
[0008] 实施例2 取大叶紫株的叶片，用〇. 1%的氯化汞浸泡15min，无菌水冲洗4次，在1%的柠檬酸溶液 中进行切割成〇. 5cmX0. 5cm的小块，消毒处理过的大叶紫株的叶片，接入MS+6-BA2. Omg/ L+IBAO. 15mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基中进行愈伤组织的诱导，pH5. 9,暗光照， 温度23°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基MS+6-BA0. 2mg/L+NAA0. 05mg/L+2, 4-D2. Omg/ L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂进行愈伤组织的分化培养，pH5. 9,光照30001x，温度25°C，光期 14h/d，分化后的芽苗接入改良1/2MS (大量、微量元素含量减半）培养基中进行生根诱导， PH5. 9,光照120001X，温度25°C，光期14h/d，试管苗长约4cm时取出，洗去基部培养基，栽植 于高温消毒过的森林腐殖土 ：珍珠岩=2 :1铺设的基质中，一周后喷施35%乙烯利，每周喷 一次，共喷3次，覆盖60%的遮荫网，定时浇水除草，每隔两周喷施6000倍的乐果，温度控制 在25°C，湿度90%，三个月后观察生长情况，成活率89%。
[0009] 实施例3 取大叶紫株的叶片，用〇. 1%的氯化汞浸泡15min，无菌水冲洗4次，在1%的柠檬酸溶液 中进行切割成〇. 5cmX0. 5cm的小块，消毒处理过的大叶紫株的叶片，接入MS+6-BA2. Omg/ L+IBAO. 15mg/L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基中进行愈伤组织的诱导，pH5. 9,暗光照， 温度23°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基MS+6-BA0. 2mg/L+NAA0. 04mg/L+2, 4-D2. Omg/ L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂进行愈伤组织的分化培养，pH5. 9,光照30001x，温度25°C，光期 14h/d，分化后的芽苗接入改良1/2MS (大量、微量元素含量减半）培养基中进行生根诱导， PH5. 9,光照120001X，温度25°C，光期14h/d，试管苗长约4cm时取出，洗去基部培养基，栽植 于高温消毒过的森林腐殖土 ：珍珠岩=2 :1铺设的基质中，一周后喷施35%乙烯利，每周喷 一次，共喷3次，覆盖60%的遮荫网，定时浇水除草，每隔两周喷施6000倍的乐果，温度控制 在25°C，湿度90%，三个月后观察生长情况，成活率90%。
【权利要求】
1. 一种大叶紫株组织培养的快速繁殖方法，包括大叶紫株无菌叶片的获得、愈伤组织 的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导、炼苗移栽，其主要步骤如下： (1)取大叶紫株的叶片，对其进行消毒处理； (2 )取步骤（1)消毒处理过的大叶紫株的叶片，接入MS+6-BA2. Omg/L+IBAO. 15mg/ L+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的培养基中进行愈伤组织的诱导，pH5. 9,暗光照，温度23°C ; (3) 取步骤（2)诱导出来的愈伤组织放入培养基MS+6-BA0. 1-0. 2mg/ L+NAA0. 03-0. 05mg/L+2, 4-D1. 5-2. 0mg/L+30g/L 蔗糖 +7g/L 琼脂进行愈伤组织的分化培 养，ρΗ5· 9,光照 30001x，温度 25°C，光期 14h/d ; (4) 取步骤（3)分化后的芽苗接入改良1/2MS (大量、微量元素含量减半）培养基中进 行生根诱导，PH5. 9,光照120001x，温度25°C，光期14h/d ; (5) 取步骤（4)生根诱导后的试管苗进行野外炼苗移栽。
2. 按照权利要求1所述的一种大叶紫株组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤 (1)中所述大叶紫株无菌叶片的获得为，取大叶紫株的叶片，用〇. 1%的氯化汞浸泡15min， 无菌水冲洗4次，在1%的柠檬酸溶液中进行切割成0. 5cmX 0. 5cm的小块。
3. 按照权利要求1所述的一种大叶紫株组织培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤 (5)中大叶紫株炼苗的方法为试管苗长约4cm时取出，洗去基部培养基，栽植于高温消毒过 的森林腐殖土 ：珍珠岩=2 :1铺设的基质中，一周后喷施35%乙烯利，每周喷一次，共喷3次， 覆盖60%的遮荫网，定时浇水除草，每隔两周喷施6000倍的乐果，温度控制在25 °C，湿度 90%，三个月后观察生长情况。
【文档编号】A01H4/00GK104186327SQ201410462955
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月12日 优先权日:2014年9月12日
【发明者】杨存 申请人:南京通泽农业科技有限公司