一种光叶菝葜组织培养的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种光叶菝葜组织培养的快速繁殖方法，包括光叶菝葜无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导、炼苗移栽等步骤，本发明采用组织培养的方法可以大批量的获得光叶菝葜幼苗，生产可控，品质优良，为光叶菝葜的开发和利用提供基础。
【专利说明】 一种光叶菝葜组织培养的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及光叶菝葜组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]光叶菝葜,corbularia Kunth,百合科,攀援灌木,产甘肃(南部)和长江流域以南各省区，直到台湾、海南岛和云南，越南、泰国和印度也有分布，生于海拔1800米以下的林中、灌丛下、河岸或山谷中，也见于林缘与疏林中。根茎中含落新妇甙，黄杞甙，3 -O-咖啡酰莽草酸，莽草酸，阿魏酸，谷留醇，葡萄糖。叶中含槲皮素，山奈酚，味微甘，性平，功效清热利湿，消肿散结，壮筋骨，治疗腹泻、月经不调、风湿痹痛、淋症、白浊、白带、瘰疬，目前对其利用主要是野外采集，开发利用率低。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种光叶菝葜植株再生的快速繁殖方法，本发明采用组织培养的方法可以大批量的获得光叶菝葜幼苗，生产可控，品质优良，为光叶菝葜的开发和利用提供基础。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
取光叶菝葜幼嫩的叶片，流水冲洗15min，超净工作台上次氯酸钠消毒处理9min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的光叶菝葜幼嫩叶片先放入-1°C的冰箱中进行低温预处理再接入 ER+IBA0.8mg/L+ZT3mg/L+S-33070.3-0.5mg/L+0.7% 琼脂 +30g/L 蔗糖的培养基中进行愈伤组织的诱导，PH5.85，暗光照培养，温度26±2°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基ER+IBA0.5mg/L+ZT0.8mg/L+0.02mg/LTDZ进行愈伤组织分化培养，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.85，光照 27001x，温度 26±2°C，分化出来的芽苗接入 1/4MS+ S-33070.7-0.9mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，pH5.85，光强ΙΟΟΟΟΙχ，光照时间16h/d，温度26±2°C，待试管苗长约5cm，根长约2cm时，放入高压灭菌过的沙壤土铺设的基质中，用双层黑色遮荫网覆盖，定时浇水除草，每隔10天喷施3000倍的水合霉素，温度控制在28 0C，湿度90%，一个月后统计成活率。
[0005]采用本发明制备的光叶菝葜成活率高，周期短，产量大，能耗少，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
取光叶菝葜幼嫩的叶片，流水冲洗15min，超净工作台上次氯酸钠消毒处理9min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的光叶菝葜幼嫩叶片先放入-1°C的冰箱中进行低温预处理再接入 ER+IBA0.8mg/L+ZT3mg/L+S-33070.3mg/L+0.7% 琼脂 +30g/L 蔗糖的培养基中进行愈伤组织的诱导，PH5.85，暗光照培养，温度26±2°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基ER+IBA0.5mg/L+ZT0.8mg/L+0.02mg/LTDZ进行愈伤组织分化培养，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.85，光照27001x，温度26±2°C，分化出来的芽苗接入1/4MS+S-33070.7mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，pH5.85，光强ΙΟΟΟΟΙχ，光照时间16h/d，温度26±2°C，待试管苗长约5cm，根长约2cm时，放入高压灭菌过的沙壤土铺设的基质中，用双层黑色遮荫网覆盖，定时浇水除草，每隔10天喷施3000倍的水合霉素，温度控制在28°C，湿度90%，一个月后统计成活率，成活率85%。
[0008]实施例2
取光叶菝葜幼嫩的叶片，流水冲洗15min，超净工作台上次氯酸钠消毒处理9min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的光叶菝葜幼嫩叶片先放入-1°C的冰箱中进行低温预处理再接入 ER+IBA0.8mg/L+ZT3mg/L+S-33070.5mg/L+0.7% 琼脂 +30g/L 蔗糖的培养基中进行愈伤组织的诱导，PH5.85，暗光照培养，温度26±2°C，诱导出来的愈伤组织放入培养基ER+IBA0.5mg/L+ZT0.8mg/L+0.02mg/LTDZ进行愈伤组织分化培养，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.85，光照27001x，温度26±2°C，分化出来的芽苗接入1/4MS+S-33070.9mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，pH5.85，光强ΙΟΟΟΟΙχ，光照时间16h/d，温度26±2°C，待试管苗长约5cm，根长约2cm时，放入高压灭菌过的沙壤土铺设的基质中，用双层黑色遮荫网覆盖，定时浇水除草，每隔10天喷施3000倍的水合霉素，温度控制在28°C，湿度90%，一个月后统计成活率，成活率87%。
[0009]实施例3
取光叶菝葜幼嫩的叶片，流水冲洗15min，超净工作台上次氯酸钠消毒处理9min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的光叶菝葜幼嫩叶片先放入-1°C的冰箱中进行低温预处理再接入 ER+IBA0.8mg/L+ZT3mg/L+S-33070.4mg/L+0.7% 琼脂 +30g/L 蔗糖的培养基中进行愈伤组织的诱导，P H 5.8 5，暗光照培养，温度2 6 ± 2 °C，诱导出来的愈伤组织放入培养基ER+IBA0.5mg/L+ZT0.8mg/L+0.02mg/LTDZ进行愈伤组织分化培养，附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.85，光照27001x，温度26±2°C，分化出来的芽苗接入1/4MS+S-33070.8mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，pH5.85，光强ΙΟΟΟΟΙχ，光照时间16h/d，温度26±2°C，待试管苗长约5cm，根长约2cm时，放入高压灭菌过的沙壤土铺设的基质中，用双层黑色遮荫网覆盖，定时浇水除草，每隔10天喷施3000倍的水合霉素，温度控制在28°C，湿度90%，一个月后统计成活率，成活率91%。
【权利要求】
1.一种光叶菝葜组织培养的快速繁殖方法，包括光叶菝葜无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化、生根诱导、炼苗移栽，其主要步骤如下: (1)取光叶菝葜幼嫩的叶片，对其进行消毒处理； (2)取步骤(I)消毒处理过的光叶菝葜幼嫩叶片接入ER+IBA0.8mg/L+ZT3mg/L+S-33070.3-0.5mg/L+0.7%琼脂+30g/L蔗糖的培养基中进行愈伤组织的诱导，pH5.85，暗光照培养，温度26±2°C ； (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织放入培养基ER+IBA0.5mg/L+ZT0.8mg/L+0.02mg/LTDZ进行愈伤组织分化培养，附加蔗糖30g/L,琼脂7g/L，ρΗ5.85，光照27001χ,温度26±2°C ； (4)取步骤(3)分化出来的芽苗接入1/4MS+S-33070.7-0.9mg/L培养基中进行生根诱导，附加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，ρΗ5.85，光强ΙΟΟΟΟΙχ，光照时间16h/d，温度26±2°C ； (5)取步骤(4)的试管苗进行炼苗移栽。
2.按照权利要求1所述的一种光叶菝葜组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述光叶菝葜无菌叶片的获得为，取光叶菝葜幼嫩的叶片，流水冲洗15min，超净工作台上次氯酸钠消毒处理9min，无菌水冲洗5次。
3.按照权利要求1所述的一种光叶菝葜组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(I)中所述消毒处理过的光叶菝葜幼嫩叶片先放入-1 V的冰箱中进行低温预处理，可以提高出愈率。
4.按照权利要求1所述的一种光叶菝葜组织培养的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(5)中光叶菝葜炼苗移栽的方法为待试管苗长约5cm，根长约2cm时，放入高压灭菌过的沙壤土铺设的基质中，用双层黑色遮荫网覆盖，定时浇水除草，每隔10天喷施3000倍的水合霉素，温度控制在28°C，湿度90%，一个月后统计成活率。
【文档编号】A01H4/00GK104221881SQ201410540656
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年10月14日 优先权日:2014年10月14日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司