一种指叶毛兰植株再生的快速繁殖方法
【专利摘要】本发明研究了一种指叶毛兰植株再生的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，生根诱导等步骤。本发明利用组织培养技术是快速繁殖指叶毛兰的一种新途径，在短期内可生产出大量具有优良遗传性状的种苗，满足市场的各种需求，对指叶毛兰的产业化发展具有积极意义。
【专利说明】一种指叶毛兰植株再生的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组织培养的快繁方法，属于植物【技术领域】。
【背景技术】
[0002]指叶毛兰，Eria pa/wea,兰科,多年生附生草本,高约20厘米,根莖横走,有节，节下具丛生的黄褐色细须根，叶密集基出，扁圆线形，肥厚，肉质，中空，多汁，深绿色，先端钝尖，叶长15-20厘米，宽0.5-0.8厘米，厚0.3厘米，叶基部有鞘抱茎，总状花序长约5厘米，顶生或生于叶腋之间，有1-4朵花，花小，长12毫米，橙黄色，蒴果小，具棱，内有多数种子，花期夏季。常附生于岩石上和树干上，生于海拔800-2200米的林中树上或林下岩石上,产海南东南部、广西、贵州西南部、云南西南部和西藏东南部。全草主治跌扑损伤，骨折，痈疮市毒，解乌头毒和磷化锌中毒。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供指叶毛兰植株再生的快速繁殖方法，本发明利用组织培养技术是快速繁殖指叶毛兰的一种新途径，在短期内可生产出大量具有优良遗传性状的种苗，满足市场的各种需求，对指叶毛兰的产业化发展具有积极意义。
[0004]本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的:
挑选指叶毛兰饱满成熟种子剥壳后，用自来水冲洗种子，并用洗洁精清洗，再次用自来水冲洗干净，在超净工作台上用70%乙醇浸泡30s, 0.1%的升萊消毒8min,无菌水冲洗5次，在无菌条件下，吸干种仁表面的水，用刀片沿纵轴小心的切开种仁，剔除种皮、胚及子叶，将胚乳切成约5mm的小块，消毒处理过的指叶毛兰胚乳接入培养基为CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度28±1°C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基CC+KT3.0-4.0mg/L+卡拉胶10-15g/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，温度28±1°C，分化培养出来的指叶毛兰芽苗放入生根培养基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉胶10_15g/L，附加蔗糖20g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，温度 28± 1°C。
[0005]采用本发明制备的指叶毛兰成活率高，周期短，利于大规模种植。
[0006]下面将结合【具体实施方式】对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0007]实施例1
挑选指叶毛兰饱满成熟种子剥壳后，用自来水冲洗种子，并用洗洁精清洗，再次用自来水冲洗干净，在超净工作台上用70%乙醇浸泡30s, 0.1%的升萊消毒8min,无菌水冲洗5次，在无菌条件下，吸干种仁表面的水，用刀片沿纵轴小心的切开种仁，剔除种皮、胚及子叶，将胚乳切成约5mm的小块，消毒处理过的指叶毛兰胚乳接入培养基为CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度28±1°C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基CC+KT3.0mg/L+卡拉胶10g/L，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，温度28± 1°C，分化培养出来的指叶毛兰芽苗放入生根培养基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉胶10g/L，附加蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，温度 28±1°C，生根率 93%。
[0008]实施例2
挑选指叶毛兰饱满成熟种子剥壳后，用自来水冲洗种子，并用洗洁精清洗，再次用自来水冲洗干净，在超净工作台上用70%乙醇浸泡30s, 0.1%的升萊消毒8min,无菌水冲洗5次，在无菌条件下，吸干种仁表面的水，用刀片沿纵轴小心的切开种仁，剔除种皮、胚及子叶，将胚乳切成约5mm的小块，消毒处理过的指叶毛兰胚乳接入培养基为CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度28 ± I °C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基CC+KT4.0mg/L+卡拉胶15g/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，温度28 ± I °C，分化培养出来的指叶毛兰芽苗放入生根培养基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉胶15g/L，附加蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，温度 28± 1°C，生根率 95%。
[0009]实施例3
挑选指叶毛兰饱满成熟种子剥壳后，用自来水冲洗种子，并用洗洁精清洗，再次用自来水冲洗干净，在超净工作台上用70%乙醇浸泡30s, 0.1%的升萊消毒8min,无菌水冲洗5次，在无菌条件下，吸干种仁表面的水，用刀片沿纵轴小心的切开种仁，剔除种皮、胚及子叶，将胚乳切成约5mm的小块，消毒处理过的指叶毛兰胚乳接入培养基为CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度28 ± I °C，诱导出来的愈伤组织放入分化培养基CC+KT3.0mg/L+卡拉胶15g/L,附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照20001x，温度28 ± I °C，分化培养出来的指叶毛兰芽苗放入生根培养基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉胶15g/L，附加蔗糖20g/L，琼脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，温度 28 ± I °C，生根率 94%。
【权利要求】
1.一种指叶毛兰植株再生的快速繁殖方法，包括无菌外植体的获得，愈伤组织的诱导，愈伤组织的分化，生根诱导，其主要步骤如下: (1)取指叶毛兰的幼嫩胚乳，对其进行消毒处理； (2)将步骤(1)消毒处理过的指叶毛兰胚乳接入培养基为CC+NAA0.5mg/L+6-BA6.0mg/1+半胱氨酸0.lg/L进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度 28±1°C ； (3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织放入分化培养基CC+KT3.0-4.0mg/L+卡拉胶10-15g/L，附加蔗糖 30g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 20001χ，温度 28±1°C ; (4)取步骤(3)分化培养出来的指叶毛兰芽苗放入生根培养基l/2CC+NAA2mg/L+卡拉胶 10-15g/L,附加蔗糖 20g/L，琼脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 65001χ，温度 28±1°C。
2.按照权利要求1所述的一种指叶毛兰植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步骤(1)中所述指叶毛兰无菌外植体的获得为，挑选指叶毛兰饱满成熟种子剥壳后，用自来水冲洗种子，并用洗洁精清洗，再次用自来水冲洗干净，在超净工作台上用70%乙醇浸泡30s，0.1%的升汞消毒8min，无菌水冲洗5次，在无菌条件下，吸干种仁表面的水，用刀片沿纵轴小心的切开种仁，剔除种皮、胚及子叶，将胚乳切成约5mm的小块。
【文档编号】A01H4/00GK104255528SQ201410550608
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月17日 优先权日:2014年10月17日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京帝道农业科技有限公司