一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法
【专利摘要】一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法，属于植物组织培养【技术领域】。本发明解决养心菜常规繁殖方法系数低，生长缓慢，难以形成规模化生产的问题。所述方法是按下述步骤进行的：步骤一、消毒灭菌；步骤二、一步成苗培养；步骤三、试管苗的驯化与移栽：将生根苗取出，放到光照充足的炼苗室内，3至5天后将瓶口打开继续炼苗2至3天；然后取出试管苗，洗净根部培养基，移栽基质中，基质由泥炭土与蛭石构成，其中泥炭土与蛭石的重量份数比为1:1，起初7天保证每天给小苗喷雾2-3次。本发明用于养心菜的组织培养。
【专利说明】一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法，属于植物组织培养技 术领域。
【背景技术】
[0002] 目前养心菜的生产繁殖以分株繁殖和扦插繁殖为主。具体如下：1、扦插繁殖选取 当年生长健壮枝条，切成10-15cm长的茎段，去掉基部叶片，每茎段留3. 4叶，打顶，插人畦 内，人土 3 - 5cm，浇一次透水，一般7-10天生根成活，枝条最好随剪随种，20天后即可移栽 定植。也可在大田直接扦插，定植密度为行距25cm，穴距15cm，每穴2-3株。2、分株繁殖 将要分株的养心菜连根挖起，按每一段带有2个以上根芽的标准进行分株，然后按株行距 15cm x25cm进行分植。挖苗时谨慎操作，尽量不破坏母株，切下的每一段根尽量多带根芽， 以缩短缓苗时间。定植后铺好滴灌带，并滴适量的压根水。
[0003] 上述养心菜常规繁殖方法系数低，生长缓慢，难以形成规模化生产。用组织培养技 术，既可保持它的优良特性，又能在短期内获得大量的试管苗，且移栽成活率高，生长迅速， 可克服常规繁殖方法的不足，对缓解人们对费菜的需求可能有一定的参考价值。
[0004] 常规的植物组织培养再生途径主要为外植体完全脱分化形成愈伤组织，然后将愈 伤组织转移到分化培养基上分化出芽，再将其转移到生根培养基上诱导生根。但该途径较 烦琐，种质易产生变异，再生频率不高。
【发明内容】
[0005] 本发明为了解决问题，进而提供了一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方 法。
[0006] 本发明为解决上述技术问题采取的技术方案是：所述方法是按下述步骤进行的：
[0007] 步骤一、取无病虫害、生长健壮的养心菜叶片作外植体，然后消毒灭菌；
[0008] 步骤二、一步成苗培养：将消毒灭完菌的叶片切成面积为0. 4-0. 6cm2块状后接种 到培养基上，接种后培养基置于温度为25 士 2°C条件下，全黑暗培养，7至10天后进行光照 培养至生根；
[0009] 步骤三、试管苗的驯化与移栽：将生根苗取出，放到光照充足的炼苗室内，3至5天 后将瓶口打开继续炼苗2至3天；然后取出试管苗，洗净根部培养基，移栽基质中，基质由 泥炭土与蛭石构成，其中泥炭土与蛭石的重量份数比为1:1，起初7天保证每天给小苗喷雾 2-3 次。
[0010] 进一步的，步骤一外植体的消毒灭菌方法如下：在洗洁精水中清洗IOmin后，除去 叶片表面污物，流水中冲洗30min ;在无菌条件下，用70%酒精浸泡45s，无菌水冲洗3次， 再在0. 1 %升汞溶液浸泡4min，然后用无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干表面水分。
[0011] 进一步的，步骤二的光强为20001x，14h/d的光照。
[0012] 进一步的，步骤二中以MS培养基为基础的培养基，在ILMS培养基中，添加不同浓 度的6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、2, 4-二氯苯氧乙酸、糖和琼脂组合，糖为蔗糖或者葡萄糖，其 中6-苄基腺嘌呤浓度为I. 0mg/L、2. Omg/L或3. Omg/L，萘乙酸浓度为0? lmg/L、0. 2mg/L或 0? 4mg/L，2, 4-二氯苯氧乙酸浓度为 0? 0mg/L、0. lmg/L 或 0? 2mg/L。
[0013] 进一步的，步骤二的培养基配方为 MS+6-BA 2. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/ L、蔗糖25g/L和琼脂7. Og/L，培养基的pH值为5. 8。
[0014] 进一步的，步骤二中培养基为 MS+6-BA I. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/L、葡 萄糖25g/L和琼脂7. Og/L，培养基的pH值为5. 8。
[0015] 本发明的有益效果是：养心菜以叶片作为外植体一步成苗法是外植体在形成愈伤 组织后，不需要转移到分化培养基上，而是直接在原培养基上分化，分化的顺序通常是先根 后芽，直止形成健壮的全苗。再生周期短，繁殖系数和再生频率高，易操作，培养程序简单， 不影响增殖率，能保持原种特性，便于大规模生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0016] 图1是养心菜叶片接种后，愈伤组织分化出的小芽照片；图2是一步培养成的组培 苗照片；图3是驯化移栽成功的组培苗。
【具体实施方式】
【具体实施方式】 [0017] 一：本实施方式以下结合具体实施例对本发明做进一步描述和说 明。所述方法是按下述步骤进行的：
[0018] 步骤一、取无病虫害、生长健壮的养心菜叶片作外植体，然后消毒灭菌；
[0019] 步骤二、叶片愈伤组织的诱导：将消毒灭完菌的叶片切成面积为0. 4-0. 6cm2块状 后接种到培养基上，接种后培养基置于温度为25 士 2°C条件下，全黑暗培养，7至10天后进 行光照培养至生根；
[0020] 步骤三、试管苗的驯化与移栽：将生根苗取出，放到光照充足的炼苗室内，3至5天 后将瓶口打开继续炼苗2至3天；然后取出试管苗，洗净根部培养基，移栽基质中，基质由 泥炭土与蛭石构成，其中泥炭土与蛭石的重量份数比为1:1，起初7天保证每天给小苗喷雾 2-3 次。
[0021] 作为优选，步骤一外植体的消毒灭菌方法如下：在洗洁精水中清洗IOmin后，除去 叶片表面污物，流水中冲洗30min ;在无菌条件下，用70%酒精浸泡45s，无菌水冲洗3次， 再在0. 1 %升汞溶液浸泡4min，然后用无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干表面水分。
[0022] 作为优选，步骤二的光强为20001x，14h/d的光照。
[0023] 作为优选，步骤二中以MS培养基为基础的培养基，在ILMS培养基中，添加不同浓 度的6-苄基腺嘌呤、萘乙酸、2, 4-二氯苯氧乙酸、糖和琼脂组合，糖为蔗糖或者葡萄糖，其 中6-苄基腺嘌呤浓度为I. 0mg/L、2. Omg/L或3. Omg/L，萘乙酸浓度为0? lmg/L、0. 2mg/L或 0? 4mg/L，2, 4-二氯苯氧乙酸浓度为 0? 0mg/L、0. lmg/L 或 0? 2mg/L。
[0024] 作为优选，步骤二的培养基配方为 MS+6-BA 2. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/ L、蔗糖25g/L和琼脂7. 0g/L，培养基的pH值为5. 8。
[0025] 作为优选，步骤二中培养基为 MS+6-BA I. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/L、葡 萄糖25g/L和琼脂7. 0g/L，培养基的pH值为5. 8。其中6-苄基腺嘌呤、萘乙酸和2, 4-二 氯苯氧乙酸均为市售分析纯化学试剂。所需激素的配制方法：6-苄基腺嘌呤出-BA):配 制浓度为lmg/ml，称取0. Ig6-苄基腺嘌呤用少许0. lmol/L HCl溶解后用蒸馏水定容至 IOOml容量瓶中待用；萘乙酸（NAA):配制浓度为0. 5mg/ml，称取0. 05g萘乙酸用少许无水 乙醇溶解后用蒸馏水定容至IOOml容量瓶中待用；2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D):配制浓度 为0. 5mg/ml，称取0.05g萘乙酸用少许0. lmol/L HCl乙醇溶解后用蒸馏水定容至IOOml容 量瓶中待用；
[0026] 采用下述试验验证本实施方式的效果：
[0027] 以MS培养基为基础培养基，并在ILMS培养基中，添加不同浓度的6-苄基腺嘌 呤、萘乙酸和2,4_二氯苯氧乙酸的不同组合，采用三因素三水平L 9(34)正交试验设计设 计，配制成养心菜组织培养一步成苗培养基，其中6-苄基腺嘌呤浓度为I. 0mg/L、2. Omg/L、 3. Omg/L，萘乙酸浓度为 0? lmg/L、0. 2mg/L、0. 4mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸浓度为 0? Omg/L、 0? lmg/L、0. 2mg/L，见表一。
[0028] 表一
【权利要求】
1. 一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法，其特征在于：所述方法是按下述步 骤进行的： 步骤一、取无病虫害、生长健壮的养心菜叶片作外植体，然后消毒灭菌； 步骤二、一步成苗培养：将消毒灭完菌的叶片切成面积为0. 4-0. 6cm2块状后接种到培 养基上，接种后培养基置于温度为25 士 2°C条件下，全黑暗培养，7至10天后进行光照培养 至生根； 步骤三、试管苗的驯化与移栽：将生根苗取出，放到光照充足的炼苗室内，3至5天后将 瓶口打开继续炼苗2至3天；然后取出试管苗，洗净根部培养基，移栽基质中，基质由泥炭土 与蛭石构成，其中泥炭土与蛭石的重量份数比为1: 1，起初7天保证每天给小苗喷雾2-3次。
2. 根据权利要求1所述一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 骤一外植体的消毒灭菌方法如下：在洗洁精水中清洗lOmin后，除去叶片表面污物，流水中 冲洗30min ;在无菌条件下，用70%酒精浸泡45s，无菌水冲洗3次，再在0. 1 %升汞溶液浸 泡4min，然后用无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干表面水分。
3. 根据权利要求1所述一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 骤二的光强为20001x，14h/d的光照。
4. 根据权利要求1所述一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 骤二中以MS培养基为基础的培养基，在1LMS培养基中，添加不同浓度的6-苄基腺嘌呤、萘 乙酸、2, 4-二氯苯氧乙酸、糖和琼脂组合，糖为蔗糖或者葡萄糖，其中6-苄基腺嘌呤浓度为 1. 0mg/L、2. Omg/L 或 3. Omg/L，萘乙酸浓度为 0· lmg/L、0. 2mg/L 或 0· 4mg/L，2, 4-二氯苯氧 乙酸浓度为 〇. 〇mg/L、0. lmg/L 或 0. 2mg/L。
5. 根据权利要求1所述一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 骤二的培养基配方为 MS+6-BA 2. 0mg/L、2, 4-D 0· 2mg/L、NAA 0· 2mg/L、蔗糖 25g/L 和琼脂 7. Og/L，培养基的pH值为5.8。
6. 根据权利要求1所述一种养心菜的组织培养一步成苗快速繁殖方法，其特征在于： 步骤二中培养基为 MS+6-BA L 0mg/L、2, 4-D 0· 2mg/L、NAA 0· 2mg/L、葡萄糖 25g/L 和琼脂 7. Og/L，培养基的pH值为5.8。
【文档编号】A01H4/00GK104255532SQ201410570569
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月22日 优先权日:2014年10月22日
【发明者】李媛, 侯可雷 申请人:李媛, 侯可雷