一种适于美国红枫组织快繁方法
【专利摘要】本发明公开了一种美国红枫组织快繁的方法，包括以下步骤：（1）以美国红枫的幼嫩茎段为外植体，进行表面消毒；（2）在初代培养基上进行培养，培养时间为25-30天；（3）在增殖培养基上进行培养，培养时间20-40天；（4）在生根培养基进行上生根培养，培养至长合适的根为止。通过本发明方法可快速、持续获得优良美国红枫无菌苗，且幼苗成活率高，为美国红枫工厂化育苗生产提供技术保证和奠定坚实基础，有助于我国美国红枫栽培的产业化发展。
【专利说明】-种适于美国红枫组织快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种适于美国红枫组织快繁方法。
【背景技术】
[0002] 美国红枫为槭树科槭树属，红鸡爪槭的栽培变种，原产美国东海岸，适应范围广， 在酸性土、中性土和石灰质土均能适应；抗性强，耐寒、耐旱、耐湿，耐薄瘠，但是喜湿润温暖 的气候，在土壤肥沃、排水良好的环境中生长良好。美国红枫属于落叶大乔木，叶掌状3? 5裂，叶长5?10cm，春季嫩叶呈鲜红色或紫红色，夏季略转青，整株姿形优美，秋季树叶 常出现鲜红的色彩，风姿极佳，为城市绿化和营造景林的著名观赏树种，目前广泛应用于公 园、庭院、小区绿化。美国红枫枝叶可药用，具有清热解毒、行气止痛的作用，可治疗关节酸 痛、腹胀等症。美国红枫木材还可作细木加工。因此，美国红枫是一种值得大力推广的珍贵 苗木。
[0003] 美国红枫既可以进行有性繁殖，也可以进行无性繁殖。有性繁殖虽然方法简单， 繁殖系数大，但是美国红枫的色彩性状是由于基因变异引起的，而非正常的生理表现，其色 彩性状通过有性繁殖很难稳定遗传。无性繁殖包括扦插、嫁接和组织培养。扦插生根成活 率低，嫁接繁殖速度太慢，这些缺陷严重影响了美国红枫的规模发展与推广。植物组织培养 技术具有效率高、生长快、周期短、重复性强、可周年生产等优点，在现代农业生产和园林育 种中得到了广泛的应用。因此，繁殖美国红枫园艺品种的最佳方式是组织培养。到目前为 止，已有研究者对红枫的组织培养技术进行了初步研究，但是尚未建立美国红枫组织快繁 体系。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种适宜于美国红枫组织快繁的方法，通过该 方法可快速、持续获得优良美国红枫无菌苗，且幼苗成活率高，为美国红枫工厂化育苗生产 提供技术保证和奠定坚实基础，有助于我国美国红枫栽培的产业化发展。
[0005] 本发明提供的技术方案是：一种美国红枫组织快繁的方法，包括以下步骤：
[0006] (1)以美国红枫的幼嫩茎段为外植体，进行表面消毒；
[0007] (2)在初代培养基上进行培养，培养时间为25-30天，其中初代培养基为 WPM+1. 0 ?I. 5mg/L BA+1. 0-2. Omg/L ZT+3-3. 5% 白糖；
[0008] (3)在增殖培养基上进行培养，培养时间20-40天，其中增殖培养基为WPM+1. 0? I. 5mg/L BA+2-3mg/L ΖΤ+0. 5-lmg/L GA3+3-3. 5% 白糖；
[0009] (4)在生根培养基上进行生根培养，培养至长合适的根为止，其中生根培养基为 1/2WPM+0. 5-lmg/L ΙΒΑ+0. 3 ?0· 5mg/L NAA+3 ?3. 5% 白糖。
[0010] 所述的方法，所述美国红枫是美国红点红枫。
[0011] 所述的方法,进一步包括炼苗培养，以体积比草炭：蛭石=1 : 1为炼苗基质。
[0012] 上述的方法，所述表面消毒是先用75%酒精消毒50s后，再用0. 1%升汞进行两次 处理，处理时间共12min。
[0013] 所述的方法，优选地，所述初代培养基为WPM+1. 5mg/L BA+2. Omg/L ZT+3%白糖。
[0014] 所述的方法，优选地，所述增殖培养基为WPM+1.5mg/L BA+2.0mg/L ZT+0.5mg/ LGA3+3% 白糖。
[0015] 所述的方法，优选地，所述生根培养基为1/2WPM+0. 5mg/L IBA+0. 3mg/LNAA+3. 5% 白糖。
[0016] 所述的方法，优选地，所述初代培养时间为28天。
[0017] 所述的方法，优选地，所述增殖培养时间为30天。
[0018] 所述的方法，优选地，所述生根培养时间为50-70天，更为优选地，所述生根培养 时间为60天。
[0019] 本发明具有以下有益效果：
[0020] 本发明以美国红点红枫的幼嫩茎段为外植体，对外植体的表面消毒、初代培 养基、增殖培养基、生根培养基、炼苗基质等无菌苗生产的几个关键因素进行了优化， 建立一种适宜于美国红枫组织快繁的方法。结果表明，外植体表面先用75%酒精消毒 50s后，再用0. 1 %升汞进行两次处理，处理时间共12min，成活率高达84% ;以WPM为 基本培养基，适宜的初代培养基为1.0?1.5mg/L BA+1.0-2.0mg/L ZT+3%白糖，外植 体茎段的叶腋芽萌发率达85%以上；适宜的增殖培养基为I. 0?I. 5mg/L BA+2-3mg/L ZT+0. 5-lmg/L GA3+3-3. 5%白糖，增殖系数高达4. 7以上，苗长势好；适宜于生根的培养基 为1/2耶]?+0.5-1.011^/118六+0.3?0.511^/1隱六+3?3.5%白糖，生根率达90%以上，主 根粗壮且长，侧根细密；以体积比草炭：蛭石=1 : 1为炼苗基质，幼苗成活率高达100%。 本发明建立了可快速、持续获得优良美国红枫无菌苗的关键技术方法，有助于我国美国红 枫栽培的产业化发展。
【专利附图】
【附图说明】
[0021] 图1为外源生长调节剂对增殖生长的影响，其中，A在添加 I. Omg/L ZT的增殖培养 基中培养IOd后的茎段，增殖系数较低；B在添加2. Omg/L ZT的增殖培养基中培养IOd后 的茎段，增殖系数高；C在1/2WPM的生根培养基中培养50d后的小苗，根系发达呈乳白色， 小苗健壮，叶色碧绿。
[0022] 图2为不同基质配比对移栽成活率的影响。
【具体实施方式】
[0023] 下面通过【具体实施方式】的详细描述来进一步阐明本发明，但并不是对本发明的限 制，仅仅作示例说明。
[0024] 植物材料来自湖南农业大学校园内的美国红枫品种红点红枫，外植体选用生长健 壮无病害的当年生的幼嫩枝条。
[0025] 实施例1 :初代培养
[0026] 1.不同灭菌时间组合对外植体生长的影响
[0027] 初始外植体选取当年生幼嫩枝条，摘除叶片，将枝条切成1?2cm长的单对芽茎 段，用饱和洗衣粉水溶液浸泡约20min后流水下冲洗约30min,转入超净工作台上。先用 75 %酒精分别消毒35、50、65s，然后用0. I %升汞分别消毒8、10、12min (分1?2次消毒）， 接着用无菌水冲洗4次，2min/次，最后用无菌滤纸吸干外植体表面水分，各处理消毒的具 体时间和次数见表1。在无菌条件下接种于培养基上，每个处理接种10个外植体，1个外植 体/瓶，重复3次，培养IOd后，统计外植体污染率、褐化死亡率、存活率。
[0028] 污染率（％ )=污染个数/接种个数X 100
[0029] 褐化死亡率（％)=褐化死亡个数/接种个数X 100
[0030] 存活率（％)=存活个数/接种个数X 100
[0031] 对外植体茎段以75%酒精和0.1%升汞不同时间组合双重灭菌的影响见表1。从 表1可以看出，75%的酒精用于表面灭菌的时间过短，茎段易污染，时间超过60s，茎段易 褐化，因此，75%的酒精的最佳灭菌时间为50s。升汞的渗透力相对酒精较弱，前者用于表 面灭菌的时间较长，随着升汞处理的时间延长，茎段染菌率相对降低，而茎段褐化率相对升 高。另外，在相同灭菌时间条件下，将升汞分两次进行灭菌的茎段染菌率均比一次灭菌的染 菌率有所下降。因此，75%的酒精50s和0. 1 %汞灭菌12min分两次进行组合灭菌的效果最 佳，其染菌率和褐化率均为8 %，存活率高达84 %，显著优于其它的组合。
[0032] 表1不同消毒时间组合对外植体茎段生长的影响
[0033]
【权利要求】
1. 一种美国红枫组织快繁的方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 以美国红枫的幼嫩茎段为外植体，进行表面消毒； (2) 在初代培养基上进行培养，培养时间为25-30天，其中初代培养基为WPM+ 1. 0 ~1. 5mg/LBA+ 1. 0-2. 0mg/LZT+3-3. 5 % 白糖； (3)在增殖培养基上进行培养，培养时间20-40天，其中增殖培养基为WPM+1. 0~1. 5 mg/L BA+2-3 mg/L ZT+0? 5-1 mg/L GA3+2-4%白糖； (4)在生根培养基进行上生根培养，培养至长合适的根为止，其中生根培养基为1/2 WPM+0? 25-1 mg/L IBA+0? 3?0? 5 mg/L NAA+3?3. 5%白糖。
2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述美国红枫是美国红点红枫。
3. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：进一步包括炼苗培养，以体积比草炭：蛭石 =1 : 1为炼苗基质。
4. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述表面消毒是先用75%酒精消毒50s后， 再用0. 1 %升汞进行两次处理，处理时间共12min。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述初代培养基WPM+1. 5 mg/L BA+2. 0 mg/ L ZT+3%白糖。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述增殖培养基WPM+1. 5 mg/L BA+2. 0 mg/ L ZT+0. 5 mg/L GA3+3%白糖。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述生根培养基1/2WPM+0. 5 mg/L IBA+0. 3 mg/LNAA+3. 5%白糖。
8. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述初代时间为28天。
9. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述增殖时间为培养30天。
10. 如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述生根时间为60天。
【文档编号】A01H4/00GK104509439SQ201410798807
【公开日】2015年4月15日 申请日期:2014年12月19日 优先权日:2014年12月19日
【发明者】邱义兰, 刘如石, 廖旻晶 申请人:湖南师范大学