一种大蒜气生鳞茎诱导方法与流程

本发明涉及大蒜组织培养与快繁的方法，属于农业生物工程技术领域，具体为一种大蒜气生鳞茎诱导方法。

背景技术：

大蒜（alliumsativuml.）为无性繁殖作物，由于长期使用鳞茎繁殖，病毒逐代积累，再加上不良环境条件、不良栽培措施的影响，导致大蒜“退化”现象严重，给生产造成极大损失。为避免此种现象的持续，出现大蒜气生鳞茎（天蒜）繁殖，气生鳞茎（天蒜）繁殖时，天蒜采自蒜薹（花薹）顶端的花苞（生长点），而大蒜生长点部位一般不带病毒，因而可自然脱毒。大蒜气生鳞茎在生产实践上主要被用来提纯及复壮，但由于只有成熟的气生鳞茎才能做“种子”，而培养成熟的气生鳞茎会争夺地蒜的营养，影响地蒜的产量，降低种蒜的收益。

技术实现要素：

本发明针对现有技术的不足，提供一种大蒜气生鳞茎诱导方法，利用新鲜的蒜薹作为外植体诱导气生鳞茎，不影响地蒜的正常生长，并实现了大蒜的脱毒和快繁。

本发明是通过如下技术方案实现的，提供一种大蒜气生鳞茎诱导方法，该诱导方法按照如下步骤进行：

（1）蒜薹采摘及处理：使用无菌工具剪取蒜薹花苞段，并用酒精消毒后备用；

（2）制备培养基：培养基为液体ms培养基，每升培养基中加入蔗糖30g，并将ph调为5.8，然后经高温高压灭菌20min，备用；

（3）蒜薹花苞段的消毒处理：将剪取的蒜薹花苞段依次进行流水冲洗1~2h、酒精消毒30s、无菌水冲洗2~3次、次氯酸钠消毒35min，最后用无菌水冲洗3~5次；

（4）培养：将消毒处理的蒜薹花苞段的最下端切除，并将剩余部分放入步骤（2）中制备的培养基中进行培养，培养时光照条件为2600lx，16h·d-1，室温为（25±2）℃，培养时间为三周。

作为优选，步骤（2）中ms培养基配方为：每1l基本培养基中含有

kno31900mg，nh4no31650mg，

mgso4·7h20370mg，kh2po4170mg，

cacl2·2h20440mg，mnso4·4h2022.3mg，

znso4·7h208.6mg，h3bo36.2mg，

ki0.83mg，na2mo3·2h200.25mg，

cuso4·5h200.025mg，cocl2·6h200.025mg，

na2-edta37.3mg，feso4·7h2027.8mg，

甘氨酸2.0mg，盐酸硫胺素0.1mg，

盐酸吡哆醇0.5mg，烟酸0.5mg，

肌醇100mg。

作为优选，在蒜薹采摘的前一天用清水冲洗所要剪取的蒜薹花苞段。通过冲洗去除花苞段的灰尘和病虫，保证采摘时的顺利进行。

作为优选，蒜薹采摘选择在晴天的上午进行。可以避免采摘时周围环境污染工具及花苞，以保证采摘花苞无菌。

本发明的有益效果为：通过使用液体ms培养基培养大蒜幼嫩花苞诱导气生鳞茎，每个花苞均可以诱导出气生鳞茎，使得利用该方法气生鳞茎的诱导率可达到100%，因而实现了利用大蒜气生鳞茎进行快繁工厂化育苗。

附图说明

图1为未诱导前的气生鳞茎图；

图2为诱导后膨大的气生鳞茎图。

具体实施方式

为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。

一种大蒜气生鳞茎诱导方法，按照如下步骤进行：

一、大蒜蒜薹田间采摘及处理

田间种植的大蒜抽薹后，当蒜薹尚嫩，气生鳞茎初步形成但没有成熟时采摘蒜薹，既不影响气生鳞茎的形成率，也不会争夺地蒜的营养而影响地蒜的收益。采摘前一天用水冲洗所要采摘的花苞段，以去除灰尘和病虫等，采摘时选择晴好天气的上午，用消毒后的工具采摘蒜薹花苞段，每个花苞带15-20cm的假茎，用酒精消毒后带回实验室备用。

二、制备培养基

本实施例所用培养基为液体ms培养基，1l培养基中加蔗糖30g，定容至1000ml，ph值调为5.8，然后分装到大试管中，每管约30ml培养基，把口封好，在121℃高温高压环境下灭菌20min，冷却备用。

本实施例的ms培养基配方为：每1l基本培养基中含有

kno31900mg，nh4no31650mg，

mgso4·7h20370mg，kh2po4170mg，

cacl2·2h20440mg，mnso4·4h2022.3mg，

znso4·7h208.6mg，h3bo36.2mg，

ki0.83mg，na2mo3·2h200.25mg，

cuso4·5h200.025mg，cocl2·6h200.025mg，

na2-edta37.3mg，feso4·7h2027.8mg，

甘氨酸2.0mg，盐酸硫胺素0.1mg，

盐酸吡哆醇0.5mg，烟酸0.5mg，

肌醇100mg

三、蒜薹花苞段的消毒处理

将剪取的蒜薹花苞段带回实验室，在流水下冲洗1~2h后，转移至超净工作台内，并依次用酒精消毒30s、无菌水冲洗2~3次、次氯酸钠消毒35min，最后用无菌水冲洗3~5次，最后用吸水纸将表面水吸干，备用。

四、试管鳞茎的诱导培养

将消毒处理的蒜薹花苞段的最下端切除，并将剩余部分放入制备好的ms培养基中进行培养，培养时光照条件为2600lx，16h·d-1，室温为（25±2）℃，培养时间为三周，花苞在培养基提供的营养下，生长、熟化，气生鳞茎成熟膨大，原来幼嫩的花苞里面挤满了饱满的气生鳞茎。

经实际统计，本发明诱导大蒜花苞100个，每一个花苞均有气生鳞茎诱导出来，诱导率为100%。

当然，上述说明也并不仅限于上述举例，本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述；以上实施例及附图仅用于说明本发明的技术方案并非是对本发明的限制，参照优选的实施方式对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内所做出的变化、改型、添加或替换都不脱离本发明的宗旨，也应属于本发明的权利要求保护范围。

技术特征：

技术总结
本发明涉及一种大蒜气生鳞茎诱导方法，该方法按照如下步骤进行：（1）蒜薹采摘及处理：使用无菌工具剪取蒜薹花苞段，并用酒精消毒后备用；（2）制备培养基：培养基为液体MS培养基，每升培养基中加入蔗糖30g，并将PH调为5.8，然后经高温高压灭菌20min，备用；（3）蒜薹花苞段的消毒处理：将剪取的蒜薹花苞段依次进行流水冲洗1~2h、酒精消毒30s、无菌水冲洗2~3次、次氯酸钠消毒35min，最后用无菌水冲洗3~5次；（4）培养：将消毒处理的蒜薹花苞段的最下端切除，并将剩余部分放入步骤（2）中制备的培养基中进行培养，培养时光照条件为2600 lx，16 h·d‑1，室温为（25±2）℃，培养时间为三周。

技术研发人员：董玉惠;刘世琦;董飞;孙秀东;张现征
受保护的技术使用者：山东农业大学
技术研发日：2017.07.25
技术公布日：2017.12.05