一种利用培养器的植物组培方法与流程

本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种利用培养器的植物组培方法。

背景技术：

在传统的植物组培工作中，使用较多的是培养瓶和培养皿，苗子放在培养瓶里，空间小，不利于苗子长高长壮。叶片放在培养皿里，皿里水气重，影响愈伤的长势。该传统组培的过程过于繁琐，次数多，造成人工浪费多；生根培养基为琼脂，移栽时需要洗掉琼脂，容易伤其根系，而且还不好运输，成活率低。

技术实现要素：

本发明为了解决上述问题提供一种利用培养器组培植物的方法。

本发明方法在无菌组织培养过程中采用一种培养器，从外植体诱导愈伤，到成苗、炼苗都可以利用该培养器。该培养器，包括封闭盒体，盒体的前面有前盖，通过密封圈和盒体结合，盒体的顶部有两个透气孔，其中一个透气孔装入无菌膜和镂空的压盖，另一个透气孔有半圆形隔板，装入无菌膜和可调压盖，所述可调压盖有半圆形的可转隔板，所述盒体的顶部还有二氧化碳导气孔；所述盒体的侧面靠近底部有漏液孔。

本发明的培养方法，分为五个阶段，每个阶段都可以单独操作。

第一阶段是无菌处理和培养液进入盒体阶段，培养器的所有配件先进行灭菌，在盒体内倒入培养液，再在支撑托盘上倒入吸水基质，所述支撑托盘的底部和四壁有孔洞；通过吸水基质吸入培养液；

第二阶段是无菌组培阶段，将植物材料放到吸水基质上，通过吸水基质吸入培养液，最后将前盖密封。

第三阶段是更换培养液阶段，待培养液中营养消耗后，更换培养液。先将培养器的漏液孔打开，待培养液排完后，关闭漏液孔，打开前盖，把新的培养液倒进去，合盖密封。操作时无需把托盘拿出，简单方便。

第四阶段为成苗生根阶段，将长成株系的苗子切出，换成生根培养液，将之前的支撑托盘替换成固定托盘，如图2所示，所述固定托盘和固定套一起使用，所述固定套里装有吸水基质，再把成株的苗子放到各个固定套里；

第五阶段为炼苗阶段，将压盖和可调压盖打开，苗子适用了外界坏境，就可以移栽或者运输。

本发明方法成活率高，操作简单。本发明方法培育的植物比传统的组培方法的周期要短，苗子要健壮，成活率高。

本发明方法的优点有：

1、组培周期短，组培效率高；

2、换培养液方便，操作简单，不易染菌；

3、继代少，人工浪费少；

4、无凝水问题，可通过调节压盖来控制；

5、炼苗方便，固定套可降解，可与苗子一起种到土里，成活率高；

6、运输方便，不易折断。

附图说明

图1为含有带孔托盘的培养盒结构示意图。

图2为固定托盘示意图。

其中，1前盖，2密封圈，3支撑托盘，4吸水基质，5漏液孔，6二氧化碳导气孔，7隔菌膜，8压盖，9培养液，10盒体，11可调压盖，12固定托盘，13固定套，14透气孔。

图3为6天后分化图。

图4为15天后生根图。

具体实施方式

本发明所使用的培养器，包括盒体，盒体的前面有前盖，通过密封圈和盒体结合，盒体的顶部有两个透气孔，其中一个透气孔装入无菌膜和镂空的压盖，另一个透气孔有半圆形隔板，装入无菌膜和可调压盖，所述可调压盖有半圆形的可转隔板，所述盒体的顶部还有二氧化碳导气孔；所述盒体的侧面靠近底部有漏液孔。

本发明的培养器的配件可以使用化学药剂灭菌、物理灭菌。植物通过吸满培养液的吸水基质4提供所需的营养。可通过调节可调压盖11来控制好培养盒内的凝水以及湿度。定期对盒内充二氧化碳，以备植物所需。

在实施过程中需要更换培养液9时，只需将漏液孔5打开，培养液9便会自动排出，无需拿出托盘，待排完后，将漏液孔5堵上，再将前盖1打开倒入新的培养液,最后将前盖1合盖密封。

本发明的培养方法，分为五个阶段：

第一阶段是种子发芽阶段，在盒体内倒入ms培养液，再在带孔托盘上倒入吸水基质珍珠岩，所述带孔托盘的底部和四壁有孔洞；把种子放在吸水基质上，通过吸水基质吸入ms培养液，供种子所需，最后将前盖密封；

运用本发明方法的种子只需4天左右就可以发芽，周期短，发芽率高。第二阶段是叶片组培阶段，种子发芽后，先将漏液孔打开将ms培养液排出，打开前盖，将诱导培养液倒进去，再将叶片切好(如需转化，需将叶片浸染暗培三天)，无需换托盘，可以在托盘上多加些吸水基质，然后再把切好的叶片放到吸水基质上，叶片通过吸水基质吸收所需营养。待10天左右后，有明显的分化迹象，分化快。第三阶段是更换培养液阶段，此阶段待叶片长出成株的苗子期间，需更换一次培养液，只需打开漏液孔，再倒入新的培养液，操作简单，减少继代。

第四阶段为成苗生根阶段，需要将长成株系的苗子切出，换成生根培养液，将之前的托盘替换成固定托盘，如图2所示，此托盘上装有多个固定套，固定套里装入吸水基质，再把成株的苗子放到各个固定套里，此固定套为纤维材料，可在土里降解，移栽时无需取出，操作非常简便。

第五阶段炼苗阶段，本发明方法炼苗时只需将两个压盖打开，待3天左右就可以移栽了，成活率高，操作简单。本发明方法培育的植物比传统的组培方法的周期要短，苗子要健壮，成活率高。

下面结合具体的实施案例来阐述本发明。

烟草k326组培试验：

第一阶段种子的发芽试验，选择烟草k326种子约200粒，放入5ml已灭菌离心管中，在超净工作台内，先用70％酒精清洗2min，无菌水洗2遍，然后用2.5％次氯酸钠浸泡8min，水洗4遍后，待用。将培养盒及其配件用物理或化学消毒，ms培养液和无菌膜高温灭菌，然后将培养液倒入培养盒内，再将装有吸水基质的托盘放入盒内，将消毒好的种子均匀地铺在吸水基质上，合盖密封。25℃，16h光照/8h暗的光照培养。4天左右就会发芽，再过1个月左右就可成苗，进入第二阶段叶片组培阶段，将培养盒的漏液孔打开，将ms培养液排出，倒入烟草诱导培养液到培养盒内，再切叶片，约0.5cm×0.5cm的大小片，将切好的叶片放到吸水基质上，如需转化，还需将叶片浸染暗培三天，待6天就有分化迹象，如图3所示。第三阶段更换培养液阶段，再过一个月左右就可长成株系的苗子，在这一个月中有换一次培养液，只需将漏液孔打开，待培养液排完，再倒入新的培养液，操作简单方便，不易染菌。之后可进入第四阶段生根阶段，能看到有茎伸长的烟草小植株，切下这些小植株待用，在无菌培养盒中加有烟草生根培养液。将支撑托盘换成固定托盘组合，在固定套中加入吸水基质，再将切下的小植株插到吸水基质里，合盖密封。可通过调节培养盒上的压盖来控制盒内的凝水。观察盒内植物生长状态，有需要时可对盒内补充二氧化碳气。如图4，15天左右苗子长高，根系发达。再过25天左右，根系会穿透固定套，这时可进行第五阶段炼苗阶段，将培养盒的两个压盖打开，3天后就可以拿到土里移栽了，直接将固定套与苗子一起种到土里，固定套可降解，操作方便，成活率高。

技术特征：

技术总结
本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种利用培养器的植物组培方法。分为五个阶段：第一阶段是无菌处理和培养液进入盒体阶段，在带孔托盘上倒入吸水基质；第二阶段是无菌培养阶段，打开前盖，将植物组织材料放在吸水基质上培养；第三阶段是更换培养液阶段，先将培养器的漏液孔打开排完培养液，关闭漏液孔，打开前盖，把新的培养液倒入，合盖；第四阶段为成苗生根阶段，将长成株系的苗子切出，换成生根培养液，将之前的带孔托盘替换成固定托盘，把成株的苗子放到固定套里；第五阶段为炼苗阶段，将压盖和可调压盖打开，待3天左右就可以移栽或运输。本发明方法培育的植物比传统的组培方法的周期要短，苗子要健壮，成活率高。

技术研发人员：陈道甫;林心灵;岳存红;杨辉艳;马星
受保护的技术使用者：武汉叶动力生物科技有限公司
技术研发日：2017.09.16
技术公布日：2017.12.19