一种银耳液体菌种的制备方法及应用与流程

本发明涉及食用菌生产技术领域，尤其涉及一种银耳液体菌种的制备方法及应用。

背景技术：

银耳又称作白木耳、雪耳、银耳子等，属于真菌类银耳科银耳属，是门担子菌门真菌银耳的子实体，有“菌中之冠”的美称。银耳味甘、淡、性平、无毒，既有补脾开胃的功效，又有益气清肠、滋阴润肺的作用。既能增强人体免疫力，又可增强肿瘤患者对放、化疗的耐受力。银耳富有天然植物性胶质，外加其具有滋阴的作用，是可以长期服用的良好润肤食品。

我国是银耳生产大国，近年来，响应市场需求，银耳的种植面积大幅提高，为了提高生产效率，银耳栽培种的质量受到了越来越多的关注。

目前用于银耳生产的菌种主要使用银耳固体培养基菌种，固体菌种主要表现为生长缓慢、生长时间长；二级种生长需30d，三级种生长需9～12d，总时间为39～42d。并且银耳固体菌种在使用前需要提前1d搅拌，1min搅拌2～4瓶，菌种菌龄上下不一致，接种效率低，原料质量控制难度大。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种银耳液体菌种的制备方法及应用，利用该方法制备得到的银耳液体菌种能够缩短银耳栽培的时间，且制备得到的菌种菌龄高度一致，出菇整齐性好。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种银耳液体菌种的制备方法，包括以下步骤：将银耳菌丝接种到液体培养基，培养7～10d，得到银耳液体菌种；

所述液体培养基包括以下原料：黄豆粉18～22g/l、葡萄糖38～42g/l、维生素b120mg和余量的水。

优选的，所述培养的温度为20～26℃。

本发明还提供了所述制备方法制备得到的银耳液体菌种。

本发明还提供了所述的银耳液体菌种在银耳栽培中的应用，包括以下步骤：

1)将香灰菌接种至上述方案所述液体培养基，培养3～5d，得到香灰菌液体菌种；

2)将步骤1)所述香灰菌液体菌种和银耳液体菌种结合接种于基质，进行培养，获得银耳菌丝后，上架出菇，收获银耳。

优选的，步骤2)中所述香灰菌液体菌种中香灰菌丝的浓度为50～100g/l；所述银耳液体菌种中银耳菌丝的浓度为100～190g/l。

优选的，步骤2)中所述香灰菌液体菌种和银耳液体菌种的接种量的比例为5～10ml:10～20ml。

优选的，步骤1)所述培养的温度为20～26℃。

优选的，步骤2)所述培养的温度为20～26℃；步骤2)所述培养的时间为14～20d。

优选的，步骤2)所述出菇的周期为15～20d。

本发明的有益效果：本发明提供了一种银耳液体菌种的制备方法，相对于银耳固体菌种，银耳液体菌种具有流动性好、易分散、萌发快、发菌点多的优点，较好的解决了接种过程中萌发慢、易污染的问题，能够缩短银耳栽培的时间，利于工业化生产。并且，银耳液体菌种不分级别，可以用来做母种生产原种，还可以作为栽培种直接用于栽培生产。

附图说明：

图1为实施例1中银耳菌丝球生长情况；

图2为实施例1中第5d银耳出菇情况；

图3为实施例1中第10d银耳出菇情况；

图4为实施例1中第15d银耳出菇情况。

具体实施方式

本发明提供了一种银耳液体菌种的制备方法，包括以下步骤：将银耳菌丝接种到液体培养基，培养7～10d，得到银耳液体菌种；

所述液体培养基包括以下原料：黄豆粉18～22g/l、葡萄糖38～42g/l、维生素b120mg和余量的水。

本发明中，所述液体培养基优选的包括以下原料：黄豆粉20g/l、葡萄糖40g/l、维生素b120mg和余量的水；所述液体培养基优选的经过灭菌处理；所述灭菌的温度优选为121℃；所述灭菌的时间优选为30～60min。

本发明中，所述培养的温度优选为20～26℃，更优选为22～25℃；所述培养的方式优选为摇床培养；所述摇床培养的转速优选为150r/min；本发明对所述银耳菌丝的接种量没有特殊限制。

本发明在培养7～10d后，优选的还包括将培养后的银耳菌液转接到液体培养基，进行扩大培养，得到银耳液体菌种；所述扩大培养的设备优选为发酵罐；所述发酵罐中二氧化碳的浓度优选为1000～2500ppm，更优选为1500～2000ppm；所述扩大培养的时间优选为7～10d，更优选为8～9d；所述扩大培养的温度优选为20～26℃，更优选为22～25℃。

本发明还提供了所述制备方法制备得到的银耳液体菌种。

本发明还提供了所述的银耳液体菌种在银耳栽培中的应用，包括以下步骤：

1)将香灰菌接种至上述方案所述液体培养基，培养3～5d，得到香灰菌液体菌种；

2)将步骤1)所述香灰菌液体菌种和银耳液体菌种结合接种于基质，进行培养，获得银耳菌丝后，上架出菇，收获银耳。

本发明首先将香灰菌接种至上述方案所述液体培养基，培养3～5d，得到香灰菌液体菌种；所述培养的温度优选为20～26℃，更优选为22～25℃。

本发明在培养3～5d后，优选的还包括将培养后的香灰菌菌液转接到液体培养基，进行扩大培养，得到香灰菌液体菌种；所述扩大培养的设备优选为发酵罐；所述发酵罐中二氧化碳的浓度优选为1000～2500ppm，更优选为1500～2000ppm；所述扩大培养的时间优选为3～5d，更优选为4d；所述扩大培养的温度优选为20～26℃，更优选为22～25℃。

本发明在得到香灰菌液体菌种后，将香灰菌液体菌种和银耳液体菌种结合接种于基质，进行培养，获得银耳菌丝后，上架出菇，收获银耳。

本发明中，所述香灰菌液体菌种中香灰菌丝的浓度优选为50～100g/l，更优选为60～80g/l；所述银耳液体菌种中银耳菌丝的浓度优选为100～190g/l，更优选为120～150g/l；步骤2)中所述香灰菌液体菌种和银耳液体菌种的接种量的比例为5～10ml:10～20ml。

本发明具体实施过程中，所述接种的方式为先接种香灰菌液体菌种，再接银耳液体菌种；或者将香灰菌液体菌种和银耳液体菌种按1:2的体积比混合均匀后再接种；所述接种的装置优选为生产袋或生产瓶；当接种的装置为生产袋时，所述香灰菌液体菌种的接种量优选为5～10ml/穴，更优选为6～8ml/穴，所述银耳液体菌种的接种量优选为10～20ml/穴，更优选为12～16ml/穴。

本发明对所述基质没有特殊限制，采用本领域常规基质即可；所述培养的温度优选为20～26℃，更优选为22～25℃；所述培养的时间优选为14～20d，更优选为15～18d；所述出菇的周期优选为15～20d，更优选为18d。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1一种银耳的栽培方法

1.液体培养基原料：黄豆粉20g、葡萄糖40g、vb120mg和水1000ml。

2.栽培方法

1)灭菌接种

把液体培养基原料混合后分装到三角瓶，在121℃灭菌30min，冷却到25℃后，把纯银耳菌丝或纯香灰菌丝琼脂培养基菌种捣碎分别接入三角瓶内。银耳菌丝与香灰菌丝在三角瓶分开接种。

2)培育

在25℃环境下，银耳菌丝液体放在转速150r/min摇床培育7d，菌丝含量达到100g/l(参见图1)；香灰菌丝液体放在转速150r/min摇床培养3d，菌丝含量50g/l。

3)检验

银耳菌丝培育5d后，无菌操作取出一定量用于镜检和微生物平板检测。检测是否感染杂菌。

4)扩大

银耳菌丝培养第7d后扩大到大发酵罐培养。香灰菌丝生长3d后扩大到大发酵罐培养。

5)大罐培育

25℃，大罐通气由最初的0.12mpa逐渐增加至0.15mpa(依据co2浓度调整)。二氧化碳浓度控制在1000ppm。银耳菌丝培育7d使用。接种前空桶检测、培养第5d、第7d检测；香灰菌丝培育3d使用，第三天检测；(检测分镜检、平皿和液体试管检测三种)。

6)使用

先接香灰菌液体菌种5ml/穴，再接银耳液体菌种10ml/穴，接到生产袋。每穴总接种量15ml，接种好的菌袋在25℃培育14d菌丝上架出菇。

上架时接种口开始吐生理水珠或小部份已长出小碎芽，出菇第5d长出小耳(参见图2)，第10d小耳直径4～6cm(参见图3)，第15d银耳直径8～10厘米(参见图4)，出菇周期15d。

整个菌种生长周期55天，比固体菌种(生长周期86天)生长周期缩短31天。

实施例2一种银耳的栽培方法

1.液体培养基原料：黄豆粉20g、葡萄糖40g、vb120mg和水1000ml。

2.栽培方法

1)灭菌接种

把液体培养基原料混合后分装到三角瓶，在121℃灭菌60min，冷却到20℃后，把纯银耳菌丝或纯香灰菌丝琼脂培养基菌种捣碎分别接入三角瓶内。银耳菌丝与香灰菌丝在三角瓶分开接种。

2)培育

在26℃环境下，银耳菌丝液体放在转速150r/min摇床培育10d，菌丝含量达到190g/l；香灰菌丝液体放在转速150r/min摇床培养5d，菌丝含量100g/l。

3)检验

银耳菌丝培育5d后，无菌操作取出一定量用于镜检和微生物平板检测。检测是否感染杂菌。

4)扩大

银耳菌丝培养第10d后扩大到大发酵罐培养。香灰菌丝生长3d后扩大到大发酵罐培养。

5)大罐培育

25℃，大罐通气由最初的0.12mpa逐渐增加至0.15mpa(依据co2浓度调整)。二氧化碳浓度控制在2500ppm。银耳菌丝培育10d使用。接种前空桶检测、培养第5d、第7d检测；香灰菌丝培育5d使用，第三天检测；(检测分镜检、平皿和液体试管检测三种)。

6)使用

将香灰菌液体菌种和银耳液体菌种按照1:2的体积比混合后接种到生长瓶，每瓶总接种量15ml，接种好的菌瓶在25℃培育14d菌丝上架出菇。

上架时接种口开始吐生理水珠或小部份已长出小碎芽，出菇第5d长出小耳，第10d小耳直径4～6cm，第15d银耳直径8～10厘米，出菇周期15d。整个菌种生长周期40天，比固体菌种(生长周期46天)生长周期缩短6天。

由以上实施例可知，本发明提供的银耳栽培方法能够缩短银耳栽培的时间。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。