一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的培养基及方法与流程

文档序号:21622367发布日期:2020-07-29 02:28阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的培养基,其特征在于,包括ms基本培养基、fpx、cuso4。

2.如权利要求1所述的一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的培养基,其特征在于,所述fpx的浓度为45-100um。

3.如权利要求1所述的一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的培养基,其特征在于,所述cuso4的浓度为0.6mg/l。

4.如权利要求1所述的一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的培养基,其特征在于,所述45-100umfpx的配制方法为:388.84mg溶于5mldmso溶液,搅拌溶解后,用蒸馏水补至10ml,得到100mmfpx母液,取450ul-1ml的100mmfpx母液加到1l培养基中得到45-100um的fpx。

5.如权利要求1所述的一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的培养基,其特征在于,所述0.6mg/mlcuso4的配制方法为:将50mgcuso4·5h2o溶解到50ml的蒸馏水中,得到1mg/mlcuso4,4℃黑暗保存,取600ul1mg/mlcuso4到1l的培养基中配制成终浓度为0.6mg/l的cuso4。

6.如权利要求1所述的一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的培养基,其特征在于,所述培养基的配制方法:4.43gms粉末和30g蔗糖溶于1l去离子水,添加3gphytagel,搅拌均匀,用1mkoh调整ph为5.8;121℃高压灭菌15min;灭菌完成后,取出培养基,待培养基冷却后,添加45-100umfpx,摇匀后,无菌条件下分装培养基至培养皿中,每个培养皿25ml培养基,培养基凝固后,封口膜包裹培养皿,4℃黑暗保存。

7.一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的方法,其特征在于,包括如下步骤:

(1)超净工作台中,用镊子去除二穗短柄草种子上的外稃,置于50ml离心管中,用20ml75%乙醇将种子表面灭菌30s,无菌去离子水冲洗三次,再加入20ml的6.25%次氯酸钠溶液,上下颠倒混匀,消毒15分钟,用无菌去离子水冲洗3-6次,得到灭菌后的种子;

(2)将灭菌后的种子用外科手术刀切割,切除部分胚乳,保留切割后含胚的部分,将切割后的种子置于无菌滤纸上吸去表面水分;

(3)将吸干表面水分的种子放置到培养基上,胚朝上,培养皿置于黑暗条件下培养,培养三天后即出现愈伤组织。

8.如权利要求1所述的一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的方法,其特征在于,步骤(3)中,所述培养条件为温度26-30℃,湿度50%-70%。


技术总结
本发明公开了一种快速诱导二穗短柄草种子产生愈伤组织的培养基及方法,本发明培养基是在MS基本培养基中添加Fipexide(FPX)和CuSO4,本发明利用外科手术刀对二穗短柄草种子进行切割处理,打破种子的休眠,并在FPX的协同作用得到二穗短柄草种子快速愈伤组织,诱导率高达98.3%,本发明可直接用于二穗短柄草种子愈伤组织诱导,缩短植物组织培养的时间,也为加速植物转基因育种奠定基础。

技术研发人员:王凯;余光润;王建勇;苗丽
受保护的技术使用者:福建农林大学
技术研发日:2020.06.10
技术公布日:2020.07.28
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