本发明涉及干细胞冻存保护剂，具体为一种新型脐带间充质干 细胞冻存保护剂。
背景技术：
1、间充质干细胞是来源于发育早期的中胚层和外胚层的成体干细胞，具有高度自我更新和多向分化潜能，存在于骨髓、脂肪等多种结缔组织和器官间质中。间充质干细胞因其组织工程、造血干细胞移植以及基因治疗领域的巨大潜力成为干细胞领域的研究热点。脐带来源的间充质干细胞具有非常高的分化潜能，可以定向诱导分化为骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经等多个组织，并且免疫原性低，取材方便，伦理学争议小，相比于骨髓等其他来源的间充质干细胞，具有更加广泛的应用前景。间充质干细胞具有可以大量扩增的特点，人脐带间充质干细胞过度传代会出现明显的衰老和凋亡，长期体外培养会导致多分化潜能降低，黏附能力下降，细胞凋亡率增加，而且克罗恩病会导致人员发成肠萎等现象，而间充质干细胞的研究和开发使用可以提供了治疗肠萎的新疗法，因此，脐带间充质干细胞也越来越多地被用于治疗克罗恩病等，而对脐带间充质干细胞冷冻保存使其保持良好的分化潜能是脐带间充质干细胞研究和临床应用的重要环节，因此，针对上述问题提出一种用于脐带间充质干细胞的冻存保护液制备工艺。
2、现有技术中的干细胞冻存保护剂对细胞的冻存保护效果较差，现发明一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂解决了上述问题。
技术实现思路
1、（一）解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，具备上述的优点，解决了上述的问题。
3、（二）技术方案
4、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
5、优选的，所述20%血清(fbs) 和10%dmso在培养皿中优先混合，防止细胞内冰晶形成，之后将20%血清(fbs) 和10%dmso的混合液加入到70% 1640培养液内得到细胞冻存保护剂。
6、优选的，所述将干细胞上的旧的细胞培养液除去时，通过外部多余的20%血清(fbs)进行多次清洗，方便干细胞上旧的细胞培养液除去，同时将20%血清(fbs)去除，方便得到干细胞。
7、优选的，所述在干细胞的培养皿上添加蛋白酶时，蛋白酶起到催化的作用，加快对干细胞的消化吸收。
8、优选的，所述细胞离心机离心时应确保其转动速度，保证其在1000rpm的转速下，离心转动5min，避免影响离心效果。
9、优选的，所述将干细胞放置到配置好的细胞冻存保护剂的培养皿的内部，并确定干细胞的最后相对密度。
10、优选的，所述通过将干细胞分开存放，且存放一定的量，方便进行记录存放，方便进行样本标记。
11、优选的，所述通过两种存放方式均可达到冻存效果，同时确保其在相应的冻存方式下的时间及冻存温度，方便对冻存管内的干细胞进行冻存，得到干细胞冻存保护剂。
12、本发明要解决的另一技术问题是提供一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，所述干细胞冻存保护剂的组分为20%血清(fbs) 、10%dmso和 70% 1640培养液；
13、新型脐带间充质干细胞冻存保护剂的配比过程包括以下步骤：
14、1）无菌环境下，在培养皿中配置含10%dmso、10～20%小牛血清和70% 1640培养液，通过搅拌杆进行搅拌使其混合形成细胞冻存保护剂；
15、2）无菌环境下，取对数成长期的干细胞，将取得的干细胞放置到另一个培养皿的内部，将干细胞上的旧的细胞培养液除去,去除时用20%血清(fbs)反复清理，清洗之后将20%血清(fbs)去除，得到干细胞；
16、3）在干细胞的培养皿内添加适量蛋白酶，且使适量蛋白酶遮盖在细胞培养皿表层，把单面生长发育的干细胞消化吸收出来；
17、4）将干细胞液放置到细胞离心机的内部进行离心抽滤，细胞离心速度1000rpm，离心时间为5min；
18、5）将蛋白酶除去，添加适量配置好的细胞冻存保护剂，用塑料吸管轻轻地吹打，使干细胞匀称,并记录干细胞的数量，调整冻存液中干细胞的最后相对密度为5牙周106/ml——1牙周107/ml;
19、6）将干细胞分装进多个冻存管中，每个冻存管内干细胞的存量为1——1.5 m|，同时在多个冻存管上标记处干细胞的名字、干细胞冻存的时间以及操作者姓名，便于后续存放；
20、7）冻存时，标准的冻存程序流程为开始减温速度-1 —— -2°c/min;当温度达-25°c时，可加快减温速度至-5°c —— -10°c/min，到-100°c时，则可快速渗入液态氮中；也可将配有干细胞的冻存管放进20°c电冰箱2h，随后放进- 70°c电冰箱中冻存10h，取下冻存管,移进液氮容器内，得到干细胞冻存保护剂。
21、（三）有益效果
22、与现有技术相比，本发明提供了一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，具备以下有益效果：
23、1、该新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，通过20%血清(fbs) 和10%dmso的优先混合，避免细胞内冰晶形成，再将混合溶液添加到70% 1640培养液的混合，得到干细胞冻存保护剂，通过离心机的离心抽滤，方便得到干细胞，通过在一定温度下的冻存，方便得到良好的干细胞冻存保护剂，提高对细胞的冻存保护效果。
1.一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，其特征在于：所述干细胞冻存保护剂的组分为20%血清(fbs) 、10%dmso和 70% 1640培养液；
2.根据权利要求1所述的一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，其特征在于：所述20%血清(fbs) 和10%dmso在培养皿中优先混合，防止细胞内冰晶形成，之后将20%血清(fbs) 和10%dmso的混合液加入到70% 1640培养液内得到细胞冻存保护剂。
3.根据权利要求1所述的一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，其特征在于：所述将干细胞上的旧的细胞培养液除去时，通过外部多余的20%血清(fbs)进行多次清洗，方便干细胞上旧的细胞培养液除去，同时将20%血清(fbs)去除，方便得到干细胞。
4.根据权利要求1所述的一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，其特征在于：所述在干细胞的培养皿上添加蛋白酶时，蛋白酶起到催化的作用，加快对干细胞的消化吸收。
5.根据权利要求1所述的一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，其特征在于：所述细胞离心机离心时应确保其转动速度，保证其在1000rpm的转速下，离心转动5min，避免影响离心效果。
6.根据权利要求1所述的一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，其特征在于：所述将干细胞放置到配置好的细胞冻存保护剂的培养皿的内部，并确定干细胞的最后相对密度。
7.根据权利要求1所述的一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，其特征在于：所述通过将干细胞分开存放，且存放一定的量，方便进行记录存放，方便进行样本标记。
8.根据权利要求1所述的一种新型脐带间充质干细胞冻存保护剂，其特征在于：所述通过两种存放方式均可达到冻存效果，同时确保其在相应的冻存方式下的时间及冻存温度，方便对冻存管内的干细胞进行冻存，得到干细胞冻存保护剂。