一种啮齿动物饲养与行为学实验装置及建立慢性社会比较应激模型的方法

1.本发明涉及实验器材技术领域，具体涉及一种啮齿动物饲养与行为学实验装置及建立慢性社会比较应激模型的方法。


背景技术：

2.社会比较是指个体将自己的环境、观点、能力等与他人进行比较的过程。在缺少客观的判断标准时，个体会将自身的情况与他人进行比较，从而获得自我评价。消极的自我评价使得社会比较与抑郁相关，有研究表明社会比较可能诱发抑郁。目前关于社会比较的大脑神经机制研究多基于人类，非人类灵长类动物的社会比较行为较少，没有关于啮齿类动物的社会比较研究。迄今为止，国内外也尚无针对啮齿类动物社会比较应激的实验造模装置及实验范式。
3.动物行为模型建立和检测是现代神经科学和心理学研究的重要技术之一，通过观察动物的社交、决策、学习等行为，可以进行学习记忆、情感和认知等方面的研究。通过动物饲养箱建立的慢性社会比较应激模型可以用于探究啮齿类动物的社会比较行为研究，拓宽对啮齿动物的社会行为的认识。同时，经过慢性社会比较的动物表现出焦虑和/或抑郁样的行为，为进一步探究焦虑和抑郁机制提供了一个新的方式和手段。


技术实现要素：

4.为了建立啮齿类动物慢性社会比较应激模型，得到不同比较环境下动物所具有的行为学特征，为探究焦虑和抑郁提供新的手段，为此，本发明提供了一种啮齿动物饲养与行为学实验装置及建立慢性社会比较应激模型的方法。
5.本发明采用如下技术方案：
6.一方面，本发明提供了一种啮齿动物饲养与行为学实验装置，包括由底板和侧板拼装而成的箱体，所述箱体的顶部设有可以开启的网状箱盖，所述箱体内还设有活动隔板，用于将箱体内部空间隔成若干个活动空间，所述隔板为透明隔板、不透明隔板和带有通孔的透明隔板或不透明隔板中的一种或几种，且所述活动空间的大小可依据所述活动隔板的数量及隔置位置进行调节，用于控制啮齿动物的活动区域及交流程度。
7.进一步地，所述侧板上还设有用于外挂食物的食物槽开孔和水瓶口开孔，且所述箱体内的每个活动空间所对应的所述侧板上成型有至少一个所述食物槽开口和至少一个所述水瓶口开孔。
8.优选地，所述隔板上的通孔为规则图形孔和/或不规则图形孔中的一种或几种的组合；或者所述隔板上还设有用于控制所述通孔启闭的控制门。
9.进一步优选地，所述箱体两侧的所述侧板两相对位置处还设有用于固定隔板的固定孔，通过连接紧定件将所述隔板的两端与对应的所述侧板固定在一起。
10.优选地，所述箱体内部设有两个所述隔板，将所述箱体形成三箱式社会比较实验
箱。
11.优选地，所述箱体中部活动空间的两侧分别向外延伸形成一个箱体活动空间，所述箱体内的各活动空间之间通过所述隔板隔成具有十字形的五箱式社会比较实验箱。
12.另一方面，本发明还提供了一种建立慢性社会比较应激模型的方法，其特征在于，
13.步骤1，将啮齿动物随机匹配后成对或成组置于未分隔的饲养实验装置中进行适应性饲养，形成实验组；
14.步骤2，对适应饲养环境的动物进行动物社会地位支配实验测试，按测试结果确定社会等级较高的动物为社会比较施压动物，社会等级较低的动物为社会比较应激动物；
15.步骤3，将匹配后的成对或成组动物分别放入带有通孔的透明隔板所形成的两个或多个独立空间的实验装置中，且给予社会比较施压动物相比社会比较应激动物较好的饲养刺激条件，开始正式实验；
16.步骤4，对社会比较施压动物和社会比较应激动物分别给予24小时持续刺激，当给予的饲养刺激条件达到设定刺激时间后，分别给予社会比较施压动物和社会比较应激动物匹配与上一饲养刺激条件不同的饲养刺激条件；
17.步骤5，经过设定时间的应激刺激干预后，对箱体中的啮齿动物进行建模效果检验，得到检测啮齿动物的焦虑或抑郁样行为指标，经统计学分析后对啮齿动物的慢性社会比较作出评价。
18.进一步地，所述步骤1中还设有与步骤2中的两动物社会等级相匹配的两啮齿动物作为对照组，且对照组中的两啮齿动物接受无差异化的饲养刺激条件。
19.进一步地，所述步骤2中，对适应饲养实验装置环境的两啮齿动物采用动物社会地位支配实验确定社会等级，其具体方法是：采用设定长度的可以使一只啮齿动物通过的透明管道，并在透明管道的正中位置作出标记；将两只啮齿动物分别从管道两端同时放入后计时；在设定时间内，若一只啮齿动物被另一只啮齿动物推出管道外，则设定推出的啮齿动物作为社会比较施压动物，另一只被推出的啮齿动物设定为社会比较应激动物；若设定时间内两只啮齿动物都没有出管道时，则设定距离同侧管道出口较近的啮齿动物为社会比较应激动物，另一只啮齿动物则为社会比较施压动物。
20.进一步地，所述步骤3中，将匹配后的成对或成组啮齿动物放入两箱式社会比较实验箱、三箱式社会比较实验箱或五箱式社会比较实验箱中的一种，并为社会比较施压动物和社会比较应激动物提供差异化的饲养刺激条件。
21.进一步地，所述步骤4中，为实验组中的社会等级较高的动物每天提供至少一种良好饲养刺激条件，设为社会比较施压动物，为实验组中的社会等级较低的动物提供正常饲养条件或每天提供至少一种恶劣环境刺激条件，设为社会比较应激动物；不论对照组中动物的社会等级高低，都为对照组中的动物提供正常饲养条件或每天提供至少一种良好刺激条件或每天提供至少一种恶劣刺激条件。
22.进一步地，所述步骤5中，在执行应激刺激干预的周期内，每周对啮齿动物收集一次粪便，测量一次为期24小时的糖水偏好，且在干预后检测所有动物三箱社交、旷场、旷场社交、高架十字迷宫、12小时的糖水偏好测试和强迫游泳测试，得到其行为数据，用于对其进行抑郁或焦虑行为的评估。
23.进一步地，所述方法还包括取材进行生化检测的步骤6，用于检测社会比较应激动
物脑核团内相关蛋白含量，评估啮齿动物在慢性社会比较应激后出现抑郁相关蛋白水平的变化。
24.本发明技术方案具有如下优点：
25.a.本发明通过建立底板、侧板和箱盖所形成的拼接箱体，并在箱体中可以形成多种交流程度和活动空间的隔板，将根据实验目的将箱体内部隔成多个独立活动空间，拼接形成的两箱或三箱实验箱可以进行差异化的稳定建立社会比较大鼠等啮齿动物的慢性社会应激模型，在若干天的慢性处理后，经不同慢性环境处理的大鼠呈现焦虑或抑郁行为学指标的差异，对于啮齿动物进行行为学饲养实验具有重要的意义。
26.b.本发明所建立的实验箱模型可以通过一对一或一对多的形式建立应激模型，节省了实验鼠的用量，增强了不同实验组间所受应激的均一性，扩大了单位时间或单位批次实验的样本数，降低饲养和实验成本。
27.c.本发明所提供的实验装置可以根据活动隔板的放置位置灵活改变活动空间大小，且可以形成各活动空间上的差异化，不仅实现在动物饲养条件的环境变化，还可以提供因活动区域大小变化而给动物带来的舒适度变化，多角度探究啮齿动物饲养与行为学特征，建立不同饲养环境下的不同等级啮齿动物的慢性社会比较应激模型。
附图说明
28.为了更清楚地说明本发明具体实施方式，下面将对具体实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
29.图1为本发明所提供的两箱式社会比较实验箱主视图；
30.图2为图1所示俯视图；
31.图3为本发明所提供的三箱式社会比较实验箱俯视图；
32.图4为图3中的侧板结构示意图；
33.图5为隔板结构示意图；
34.图6为箱盖结构示意图；
35.图7为本发明所提供的五箱式社会比较实验箱俯视图；
36.图8为实施例1所提供的实验流程图示；
37.图9中的a-f为实施例1所提供的检验效果数据图示。
38.图中所示标识如下：
39.a-箱体；1-底板；2-侧板，21-食物槽开孔，22-水瓶口开孔，23-固定孔，24-挂孔；3-箱盖，31-合页，32-挂钩；4-隔板，41-通孔；5-连接紧定件。
具体实施方式
40.下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
41.如图1、图2和图3所示，本发明提供了一种啮齿动物饲养与行为学实验装置，包括由底板1和侧板2拼装而成的箱体a，箱体a的顶部设有可以开启的网状箱盖3，箱体a内还设
有活动隔板4，用于将箱体a内部空间隔成若干个独立活动空间，隔板4为透明隔板、不透明隔板和带有通孔41的透明隔板或不透明隔板中的一种或几种，且活动空间的大小可依据活动隔板4的数量及隔置位置进行调节，用于控制啮齿动物的活动区域及交流程度。
42.在侧板2上还设有用于外挂食物的食物槽开孔21和水瓶口开孔22，且箱体a内的每个活动空间所对应的侧板2上成型有至少一个食物槽开口21和至少一个水瓶口开孔22，这些食物槽开口21和水瓶口开孔22用于给啮齿动物提供食物和水。如图5所示，隔板4上的通孔41为圆形、方形、长圆形、长条形中的一种或几种的组合，当然可以设置具有小尺寸的通孔41，还可以在隔板上设置具有大尺寸的通孔41，当然，还可以在同一隔板4上分别设置大小尺寸混合的通孔41，当然，不限于图5中所提供的隔板4通孔41结构形式。具有较大尺寸的通孔相比较小尺寸的通孔更能提高相邻两活动空间动物间的交流。
43.如图1和图4所示，在箱体a两侧的侧板2两相对位置处还设有用于固定隔板4的固定孔23，通过连接紧定件5将隔板4的两端与对应的侧板2固定在一起；结合图1和图2所示，在两侧板2的上部分别设置了两个螺孔，两螺孔所形成的间隙大于隔板4的厚度，当将紧定连接件5安装在两侧螺孔上时，两紧定连接件5所形成的间隙略大于隔板的厚度，方便对隔板4进行拆装处理。
44.如图2所示，在箱体内部设置了1块隔板，通过隔板将箱体内部空间分成两个，形成了两箱式社会比较实验箱。即将长方形的侧板与两块端部的侧板用气枪装订形成四面闭合的箱体侧壁，注意将短边侧板压覆在长边侧板的外侧立面。再将该箱体侧壁与底板装订固定。箱盖3是两块金属铁丝网，箱盖3的一侧用合页31固定在一侧侧板2的上边缘位置，另一侧通过挂钩32固定在对侧的侧板2上边挂孔24上。该箱体a可用于饲养成对组别的动物，通过更换中间隔板4可以控制两组别动物不同的社交交流程度：如果插入无孔不透明隔板，可以满足动物单独饲养的要求；若插入带孔的透明隔板能保证动物的视觉和嗅觉交流，在此基础上根据实验设计隔板两侧单元内不同的生活环境，以建立成对的慢性社会比较应激动物模型。
45.如图3和图4所示，在箱体a内部设有两块隔板4，将箱体a形成三箱式社会比较实验箱，这里的两侧板2中的一侧板可以为图4所示结构，而与其相对侧侧板及另一方向上的两相对侧板均为不透明板结构。该箱体a为三箱式社会比较实验箱，该箱体可用于饲养三只/组不同环境处理的动物，通过更换中间隔板可以控制三组别动物不同的社交交流程度，抽出隔板可以使饲养笼的内部空间合二为一，增加动物饲养空间。
46.如图7所示，还可以将箱体中部活动空间的两侧分别向外延伸形成一个箱体活动空间，箱体内的各活动空间之间通过隔板隔成具有十字形的五箱式社会比较实验箱，可用于啮齿类一对多的进行社会比较造模实验，其利用中央区域的社会比较应激源动物，配合多个可拼插外接组装的外周实验活动空间，使应激源动物得以成多倍的高效利用，降低实验动物成本，并能保证各实验动物所受应激强度一致。
47.该箱体可在位于中央的箱体内饲养社会比较应激施压动物，其他箱中饲养社会比较应激动物，也可以在位于中央的箱体内饲养社会比较应激动物，其他箱中饲养社会比较应激施压动物以增加应激强度。通过更换中间隔板可以控制三组别动物不同的社交交流程度。
48.本发明在箱体内穿插隔板的设计令空间使用灵活方便，可拆卸设计更是大大提高
实验空间和饲养空间的利用率，拆卸后可扁平化收纳与运输，减少实验设备空间浪费。
49.本发明还提供了一种建立慢性社会比较应激模型的方法，包括如下步骤：
50.【s001】将啮齿动物随机匹配后成对或成组置于未分隔的饲养实验装置中进行适应性饲养，形成实验组。当然还可以形成对照组。
51.【s002】对适应饲养环境的动物进行动物社会地位支配实验测试，按测试结果确定社会比较施压动物和社会比较应激动物。
52.本发明对适应饲养实验装置环境的两啮齿动物优选采用动物社会地位支配实验确定社会等级，且将等级测试后的社会等级较高的啮齿动物作为社会比较施压动物，而将另一啮齿动物作为社会比较应激动物，且给予社会比较施压动物相比社会比较应激动物较好的饲养刺激条件。同样对于对照组中的动物，同样采用上述的动物社会地位支配实验方法确定社会等级高低的两动物，并将社会等级较高的啮齿动物作为社会比较施压动物，而将另一只动物作为社会比较应激动物，但是对照组中的两动物接受的是无差异化的饲养刺激条件，即采用相同的饲养条件，通常采用正常饲养方式。
53.【s003】将匹配后的成对或成组动物分别放入带有通孔的透明隔板所形成两个或多个独立空间的实验装置中，且给予社会比较施压动物相比社会比较应激动物较好的饲养刺激条件，开始正式实验。根据实验目的，将匹配后的啮齿动物放入两箱式社会比较实验箱、三箱式社会比较实验箱或五箱式社会比较实验箱中的一种，并为社会比较施压动物和社会比较应激动物提供差异化的饲养刺激条件。
54.【s004】对社会比较施压动物和社会比较应激动物分别给予24小时持续刺激，当给予的饲养刺激条件达到设定刺激时间后，分别给予社会比较施压动物和社会比较应激动物匹配与上一饲养刺激条件不同的饲养刺激条件。
55.为实验组中的社会比较施压动物每天提供至少一种良好饲养刺激条件，为实验组中的社会比较应激动物提供正常饲养条件或每天提供至少一种恶劣环境刺激条件；为对照组中的社会比较施压动物和社会比较应激动物提供正常饲养条件或每天提供至少一种良好刺激条件或恶劣刺激条件。
56.主要包括三种环境条件，一般环境即普通饲养环境条件，仅包括饲养垫料、普通饲料和水。良好刺激条件即丰富的饲养环境条件，丰富饲养环境条件可包括高蛋白食物、巢盒、玩具、钻桶、迷宫、跑轮、支撑层板、斜梯、雌性伙伴等；恶劣饲养刺激条件可包括剥夺饮水、剥夺食物、潮湿垫料、频闪灯、持续光照、42℃烘箱热应激、空瓶刺激(将饮水倒掉)、狭小拥挤空间、倾斜底板等。根据以上环境刺激需要，准备如面包虫干、炼乳、雌性动物、限制活动的隔板和拥挤的其他雄性动物同伴等刺激。
57.【s005】经过设定时间的应激刺激干预后，对箱体中的啮齿动物进行建模效果检验，得到检测啮齿动物的焦虑或抑郁样行为指标，经统计学分析后对啮齿动物的慢性社会比较作出评价。
58.【s006】取材并进行生化检测，用于检测社会比较应激动物脑核团内相关蛋白含量，评估啮齿动物在慢性社会比较应激后出现抑郁相关蛋白水平的变化。
59.以大鼠为例进行社会比较动物模型的建立，具体实验方法是：
60.准备250g左右成年雄性sd大鼠，在普通饲养箱中两两一笼配对饲养。饲养箱体设置为昼夜与外界颠倒，温度23-25度，适应饲养环境至少7天。适应期间，实验人员需至少持
握大鼠3天，每天至少10分钟，让其适应实验人员。待大鼠体重约为300g，采用动物社会地位支配实验进行大鼠社会等级测试。社会等级测试前2天，需要让每只大鼠适应等级测试管道两次。适应等级测试管道的做法为准备长1.5m*内径60cm的透明亚克力管，将大鼠从管道的一端放入，待其顺利从另一端出来，则算为成功适应一次。
61.将普通饲养箱中成对饲养的大鼠称重后进行动物社会地位支配实验测试。具体做法为：在管道的正中位置做标记，将两只大鼠从管道两端同时放入后计时，若两分钟内一只大鼠将另一只大鼠推出管道外，则判定推出的大鼠等级较高，被推出的大鼠等级较低；若2分钟未能结束，则判断距离同侧管道出口较近的大鼠等级较低。
62.在正式进行慢性社会比较应激干预前，还应提前准备相应数量的实验装置(即实验箱)以及相应的环境刺激。慢性社会比较应激干预主要是通过不同规格带孔隔板的实验箱，将之前长期生活在一起的两只不同社会等级的大鼠隔开饲养，但两者可以通过带孔透明的隔板进行交流，互相可以听到、见到和嗅到，实验人员通过人为制造不同生存环境来促使大鼠进行社会比较，从而产生一种社会比较性质的心理应激。慢性社会比较应激为期至少14天，每天至少一种良好/恶劣环境刺激，刺激持续时间为24小时。
63.以每天一种刺激，早上十点进行干预为例。如下表格，一共七种刺激，循环进行处理。
[0064][0065]
经过动物社会地位支配实验测试后，将成对的大鼠转移至两箱式慢性社会比较实验箱内饲养，其中社会等级高的大鼠置于环境条件较好的一侧，等级低大鼠的置于环境条
件较差的一侧。例如丰富饲养环境和一般饲养环境的两箱设置中，将等级高的大鼠置于丰富环境的空间内；一般饲养环境和恶劣饲养环境的两箱设置实验箱，则将等级高的大鼠置于一般饲养环境的空间内，以此类推。每天将丰富饲养环境和恶劣饲养环境中更换一种或几种环境饲养刺激条件进行刺激，并保持该环境刺激24小时。
[0066]
完成应激刺激干预后需要进行检验建模效果。在应激干预若干天后，在大鼠每天的按周期进行一个行为测试，检测大鼠的焦虑或抑郁样行为指标。实验方法包括：三箱社交测试、旷场测试、旷场社交测试、运动活动性测试、高架十字迷宫、强迫游泳测试和糖水偏好测试等行为实验结果，并取材检测脑核团内相关蛋白含量。
[0067]
三箱社交测试：将慢性社会比较应激用实验箱及其中大鼠运到测试房间适应至少一个小时，之后将大鼠放在三箱式社会比较实验箱中适应环境10分钟。间隔5分钟后进行第一阶段测试，将装有陌生同伴1的笼子和一个空笼子(或装有玩具大鼠的笼子)放在两侧箱子，打开中间的门，让测试大鼠自由穿梭，记录10分钟，统计大鼠与陌生同伴1的交流时间占比，正常情况下大鼠应该与同伴闻嗅时间远多于空笼子，否则代表社交兴趣降低。间隔5分钟后进行第二阶段测试，将空笼子换成一个装有另一只陌生同伴2(更陌生的同伴)的笼子，放在另一侧，打开中间的门，让测试大鼠自由穿梭，记录10分钟，统计大鼠对已经熟悉的陌生同伴1和更陌生的同伴2的闻嗅时间占比，正常情况下大鼠应该喜欢和更陌生的同伴2进行交流，否则可能代表大鼠社交新颖性指标异常，即社交识别记忆或社交能力异常。测试间隔期间均对三箱装置用75％的酒精进行清理。测试完将大鼠送回饲养室。
[0068]
旷场测试：将慢性社会比较应激用实验箱及其中大鼠运到测试房间适应至少一个小时，然后将测试大鼠放置在1米
×
1米的旷场装置中心，让其自由活动，记录行为10分钟，统计大鼠在旷场中心区域运动时间占比。如果中心区域运动时间较对照组减少，代表大鼠具有焦虑样行为。测试完毕对旷场箱用75％的酒精进行清理，之后将测试大鼠送回饲养室。
[0069]
旷场社交测试，测试前一天将饲养在慢性社会比较应激用实验箱的大鼠以及与其进行社交匹配的同龄陌生大鼠(体重差
±
10克)运到测试房间适应至少一个小时。之后将每只大鼠放置在1m
×
1m的旷场装置中心，让其自由活动10分钟。每只大鼠适应完毕后均对旷场箱用75％的酒精进行清理，之后将动物送回饲养室。测试当天，同样将以上大鼠运到测试房间适应至少一个小时，提前将匹配社交的大鼠身上做标记，测试时，同时将实验大鼠和匹配社交的大鼠一起放置在旷场装置中心，记录行为10分钟，统计大鼠的社交行为(比如闻嗅、接近、跟随、舔舐和接触陌生大鼠)和非社交的焦虑行为(比如与同伴无关的在旷场中走、跑、直立等)占比，代表社交互动能力指标。测试完毕均对旷场箱用75％的酒精进行清理，之后将动物送回饲养室。
[0070]
运动活动性测试：将慢性社会比较应激用实验箱及其中大鼠运到测试房间适应至少一个小时，然后将测试大鼠放置在50厘米
×
50厘米的行为箱中心，让其自由活动，记录行为30分钟，统计大鼠运动距离。测试完毕均对行为箱用75％的酒精进行清理，之后将测试大鼠送回饲养室。
[0071]
高架十字迷宫测试：将慢性社会比较应激用实验箱及其中大鼠运到测试房间适应至少一个小时，然后将测试大鼠放置在高架十字迷宫的中心区域，头部统一朝向开放臂，让其自由活动，记录行为5分钟，统计大鼠进入开放臂的时间和次数，如比对照组降低，代表焦虑水平升高，闭合臂相关指标统计意义相反。测试完毕均对行为箱用75％的酒精进行清理，
之后将测试大鼠送回饲养室。
[0072]
糖水偏好测试：在运动活动性测试当天早上十点，每只大鼠适应两瓶1％的糖水，适应24小时。在高架十字迷宫测试当天早上十点，将其中一瓶1％的糖水换成普通的水，适应24小时，在12小时的时候换一下糖水和水的位置。在高架十字迷宫测试当天过后第一天早上十点，去掉所有大鼠的糖水、水和食物，断水断食24小时。在高架十字迷宫测试当天过后第二天上午十点，每只大鼠进行糖水偏好测试，将一瓶1％糖水和水分别称重，放置在饮水口处，不放置食物。6小时的时候将水和糖水互换位置，测试12小时之后称重。统计糖水消耗量占总消耗水量的百分比，如糖水消耗量占比降低代表大鼠具有抑郁样情绪。
[0073]
强迫游泳测试：在糖水偏好测试第二天，进行强迫游泳适应。将慢性社会比较应激实验箱及其中大鼠运到测试房间适应至少一个小时，然后将测试大鼠放置在装置50厘米高，直径20厘米，水面30cm高的强迫游泳桶中适应15分钟，水温度23-25度。适应后第二天同一时间进行强迫游泳测试，将慢性社会比较应激实验箱及其中大鼠运到测试房间适应至少一个小时，然后按照上述同样条件将大鼠放入强迫游泳桶，测试6分钟并视频记录。统计视频后5分钟内大鼠静止时间及其占比，静止时间或百分比增加，表示绝望行为增加；也可以统计积极游泳指标，即向上游泳或四周游泳时间，如积极游泳时间比对照组降低可作为抑郁样行为指标，表现为抑郁样行为。
[0074]
取材检测：将测试大鼠用水合氯醛进行麻醉，开胸暴露心尖，用真空一次性采血管采集大鼠血液，之后立即断头取脑，包埋放入-80度冰箱冷冻。也可对大鼠进行麻醉之后，进行生理盐水和4％组织固定液灌流。以上行为测试根据所需指标进行视频分析和数据统计，取材可根据需求进行生化检测，进一步评估啮齿动物在慢性社会比较应激后出现抑郁相关蛋白水平的变化。
[0075]
实施例1
[0076]
本实施例为依照本发明提供的建立焦虑抑郁样大鼠动物模型的方法，建立由社会比较应激诱发焦虑抑郁样大鼠动物模型。流程图如图8所示。首先，将大鼠两两随机匹配于一箱组合式动物饲养笼中饲养，使其适应组合式饲养笼的环境。适应期后将成对大鼠进行动物社会地位支配实验确定社会等级，依照社会等级测试结果确定大鼠饲养环境。两只大鼠分别饲养于两箱式社会比较实验箱的两侧，中间用透明带孔亚克力板隔开。实验组设置为社会等级高的大鼠每天接受一种良好条件刺激的处理，设为社会比较施压动物组，每天早上十点更换刺激，共持续31天，与其匹配的社会等级较低的大鼠除正常饲养条件之外无额外处理，设为社会比较应激动物组(应激组)。对照组设置为社会等级高的大鼠及与之匹配的社会等级低的大鼠均只接受正常饲养条件。造模周期内每周对大鼠收集一次粪便，测量一次为期24小时的糖水偏好。造模第23天检测所有动物三箱社交、旷场、旷场社交、高架十字迷宫、12小时的糖水偏好测试和强迫游泳测试。
[0077]
所有行为学测试结果中均采用非成对t检验进行统计学分析，*代表p小于0.05；**代表p小于0.01。对照组和社会比较应激组(应激组)大鼠样本量分别为12只和10只。三箱社交结果(图9-a)发现，两组在社交兴趣(图9-a左)和社交新颖性识别(图9-a右)两指标上均无显著统计学意义(分别为p＝0.854和p＝0.910)。在强迫游泳测试中(图9-b)，相比于对照组，社会比较应激组不动时间显著升高(p＝0.047)，表明经过慢性社会比较应激后，社会比较应激组大鼠出现抑郁样行为。旷场社交结果(图9-c)发现，相比于对照组，社会比较应激
组社交时间百分比降低，非社交时间百分比升高，两指标的显著性水平分别为p＝0.055和p＝0.092。在糖水偏好测试中(图9-d)，两组在糖水消耗量指标上边缘显著(p＝0.099)，表明在经过慢性社会比较应激后，应激组大鼠倾向于表现出抑郁样行为。在高架十字迷宫测试中(图9-e)，两组在进入开放臂时间百分比(图9-e左)上无显著统计学差异(p＝0.499)，但闭合臂进入次数(图9-e右)结果显示，相比于对照组，社会比较应激组进入闭合臂次数显著增加(p＝0.005)，表明社会比较应激组大鼠出现焦虑样行为。在旷场测试中(图9-f)，相比于对照组，社会比较应激组中央区域滞留时间显著降低(p＝0.009)，表明社会比较应激组大鼠出现焦虑样行为。
[0078]
实施例2
[0079]
本实施例为依照本发明提供的建立焦虑抑郁样大鼠动物模型的方法，可以增强社会比较应激的施压水平，诱发焦虑抑郁样大鼠动物模型。实验设备采用三箱式社会比较实验箱。首先，将大鼠三只一组随机匹配进行饲养。动物适应饲养环境后随机分组，按照动物社会地位支配实验检测大鼠社会等级，依照社会等级测试结果确定大鼠饲养位置和饲养环境。例如，将社会等级最低的大鼠设定为社会比较应激组，饲养在三箱式社会比较实验箱的中间箱内，匹配普通的饲养环境；其他两只社会等级更高的大鼠分别饲养在三箱式社会比较箱两侧的两个独立空间中，匹配较好的饲养环境，各独立空间用透明带孔亚克力板隔开。又例如，将社会等级最高的大鼠设定为社会比较施压组，饲养在三箱式社会比较实验箱的中间箱内，匹配良好的饲养环境；其他两只社会等级较低的大鼠分别饲养在三箱式社会比较箱两侧的两个独立空间中，匹配普通的饲养环境，各独立空间用透明带孔亚克力板隔开。实验组设置为社会等级高的大鼠接受每天两种良好刺激条件的处理(社会比较施压动物组)，每天早上十点更换刺激，共持续若干天，与其匹配的社会等级较低的大鼠(社会比较应激动物组)除正常饲养条件之外无额外处理。对照组设置为社会等级高的大鼠和等级低的大鼠均只接受正常饲养条件。应激结束后，检测所有动物三箱社交、旷场、旷场社交、运动活动性、高架十字迷宫、糖水偏好测试和强迫游泳测试，得到相关行为指标数据，并进行后续抑郁或焦虑水平的分析。当然本发明还可以设置更多种对照组，比如，使对照组中的社会等级高的大鼠和等级低的大鼠均接受每天两种良好刺激的饲养条件，具体不再赘述。
[0080]
进一步地，为增强社会比较应激施压水平还可以扩展为五箱式社会比较实验箱。将大鼠五只一组随机匹配进行饲养。动物适应饲养环境后随机分组，按照动物社会地位支配实验检测大鼠社会等级，依照社会等级测试结果确定大鼠饲养位置和饲养环境。例如，将社会等级最低的大鼠设定为社会比较应激组，饲养在五箱式社会比较实验箱的中央箱内，匹配普通的饲养环境；其他四只社会等级更高的大鼠分别饲养在五箱式社会比较箱外围的四个独立空间中，匹配良好的饲养环境，各独立空间用透明带孔亚克力板隔开。又例如，将社会等级最高的大鼠设定为社会比较施压组，饲养在五箱式社会比较实验箱的中间箱内，匹配良好的饲养环境；其他四只社会等级较低的大鼠分别饲养在五箱式社会比较箱外围的四个独立空间中，匹配普通的饲养环境，各独立空间用透明带孔亚克力板隔开。
[0081]
实施例3
[0082]
本实施例为依照本发明提供的多箱式社会比较应激箱，可以灵活应用于多种社会比较应激实验条件下的慢性社会比较应激动物模型制备。例如采用三箱式社会比较实验箱建立不同承压水平的社会比较应激大鼠。首先，将大鼠三只一组随机匹配进行饲养；动物适
应饲养环境后随机分组，按照动物社会地位支配实验检测大鼠社会等级，依照社会等级测试结果确定大鼠饲养位置和饲养环境；将社会等级居中的大鼠设定为社会比较普通组，饲养在三箱式社会比较实验箱的中间箱内，匹配普通的饲养环境；社会等级最高的大鼠和最低的大鼠分别饲养在三箱式社会比较箱两侧的两个独立空间中，匹配最好的饲养环境和最差低饲养环境，各独立空间用透明带孔亚克力板隔开。实验组设置为社会等级高的大鼠接受每天两种良好刺激条件的处理，每天早上十点更换刺激，共持续若干天，设为社会比较施压动物组；社会等级居中的大鼠除正常饲养条件之外无额外处理，设为社会比较普通动物组；社会等级最低的大鼠接受每天两种恶劣刺激条件的处理，每天早上十点更换刺激，共持续若干天，设为社会比较应激动物组。对照组设置为不论社会等级高低，大鼠均只接受正常饲养条件。应激结束后，检测所有动物三箱社交、旷场、旷场社交、运动活动性、高架十字迷宫、糖水偏好测试和强迫游泳测试。
[0083]
本发明所建立的实验箱模型可以通过一对一或一对多的形式建立应激模型，节省了实验鼠的用量，增强了不同实验组间所受应激的均一性，扩大了单位时间或单位批次实验的样本数，降低饲养和实验成本。
[0084]
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。