一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法与流程

本发明涉及花卉组织培养，具体涉及一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法。

背景技术：

1、蕙兰，属兰科兰属植物，其气色高雅，具有很高的观赏价值。蕙兰的繁殖一般采用种子繁殖和无性繁殖。由于蕙兰的种子十分细小，种子内的胚通常发育不完全，几乎无胚乳，因此，蕙兰的种子在自然条件下很难发芽。而在生产上蕙兰一般会采用分株扩繁，这种扩繁方式所需的时间较长，且其分株能力较弱，繁殖系数较低，不足以满足商品化生产的需求。野生的蕙兰资源已濒临灭绝，因此，利用组织培养的方式对蕙兰进行扩繁，不仅有利于蕙兰的商品化需求，且对于保护蕙兰野生种质资源具有重要意义。

2、在对蕙兰进行组织培养过程中发现，兰苗经常携带各种病原，由于不当的分株方式容易使分株繁殖过程造成病原的积累，而这类内生的病原很难通过表面消毒的方式进行消除，且往往随着继代培养次数的增加，使病原逐渐累积，有研究尝试采用连续添加青霉素的方式来防止外植体的污染，然而这样的培养方式往往会出现幼苗的黄化现象。

3、目前，蕙兰的组织培养主要是由母株上取8cm左右的新芽，在用水冲洗后，经70％酒精处理-10％次氯酸钠处理-5％次氯酸钠处理-1％次氯酸钠处理，然后经无菌水冲洗数次，以此达到消毒的目的。以新芽的茎尖为外植体，接入培养基中培养。增殖培养基的配方是：改良kc+kt 0.05mg/l+naa0.5mg/l+蔗糖2％+琼脂条0.6％～0.85％，ph5.2～5.6；生根壮苗培养基的配方是：改良kc+naa 0.2mg/l+蔗糖2％+琼脂条0.6％～0.85％，ph5.2～5.6。培养条件是：温度22～25℃，光照强度2000lx，光照时间12小时/天，以固体培养为佳。在研究过程中还发现，在培养基中添加香蕉泥可以促进蕙兰的增殖和分化，这主要与香蕉泥中的有机质和天然激素有关。

4、但是，上述培养基仍然存在以下问题：

5、第一，以新芽的茎尖为外植体还存在内生菌在组培苗中传播的情况；

6、第二，外植体在培养基中仍然存在褐变的问题；

7、第三，外植体的增殖率为4.1，存在增殖效率低。

技术实现思路

1、为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法。

2、为实现上述目的，本发明的技术方案如下。

3、一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，包括以下步骤：

4、s1、将蕙兰的根状茎转接至增殖培养基上进行增殖培养；

5、所述增殖培养基的配方为：基础培养基、蔗糖20～22g/l、琼脂4～5g/l、naa 0.5～1.0mg/l、椰子粉0.1～0.2g/l、抗坏血酸0.08～0.1g/l、活性炭0.8～1.0g/l，ph为5.4；

6、s2、将s1增殖培养后的根状茎转接至分化培养基上进行分化培养；

7、所述分化培养基的配方为：基础培养基、蔗糖20～22g/l、琼脂4～5g/l、naa 0.1～0.3mg/l、6-ba 5～7mg/l、椰子粉0.1～0.2g/l、抗坏血酸0.08～0.1g/l、活性炭0.8～1.0g/l，ph为5.4。

8、进一步，s1和s2中，所述基础培养基是由1/2ms、芦荟汁和荷叶水提物以质量比1：0.01～0.1：0.002～0.006配置而成。

9、更进一步，所述芦荟汁是将芦荟鲜叶去皮后粉碎匀浆，过滤，即得。

10、更进一步，所述荷叶水提物是将荷叶与水按照质量比1：8～15混合，然后在80～90℃下回流提取1～2h，过滤，即得。

11、进一步，s1中，增殖培养的条件为：

12、温度23±0.2℃，光照强度2000lux，光照时间12小时/天。

13、进一步，s2中，分化培养的条件为：

14、温度23±0.2℃，光照强度2000lux，光照时间12小时/天。

15、进一步，s1中，蕙兰的根状茎是由蕙兰种子经无菌播种，萌发后形成的无菌、且生长良好的根状茎。

16、本发明中，播种前已对种子进行了消毒，种子相比茎尖等外植体更易消毒，萌发出的根状茎一般不存在内生菌污染。

17、更进一步，所述根状茎的长度为0.5±0.1cm。

18、本发明的有益效果：

19、1、本发明主要以蕙兰的根状茎为外植体，且在增殖和分化过程中添加了芦荟汁、荷叶水提物、椰子粉、抗坏血酸等组分，不仅能够抑制内生菌的污染，使培植体能够健康生长，还能够解决褐变问题。

20、2、本发明的方法利用无菌播种萌发的根状茎进行增殖和分化成苗培养，可以缩短扩繁时间，且可以提高扩繁系数，解决生产上蕙兰扩繁难题。

21、3、本发明的方法可以增加蕙兰繁殖系数，同时降低病原积累，且对蕙兰野生种质资源保存具有重要意义。

技术特征：

1.一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于，s1和s2中，所述基础培养基是由1/2ms、芦荟汁和荷叶水提物以质量比1：0.01～0.1：0.002～0.006配置而成。

3.根据权利要求2所述的蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于所述芦荟汁是将芦荟鲜叶去皮后粉碎匀浆，过滤，即得。

4.根据权利要求2所述的蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于所述荷叶水提物是将荷叶与水按照质量比1：8～15混合，然后在80～90℃下回流提取1～2h，过滤，即得。

5.根据权利要求1所述的蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于s1中，增殖培养的条件为：

6.根据权利要求1所述的蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于s2中，分化培养的条件为：

7.根据权利要求1所述的蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于s1中，蕙兰的根状茎是由蕙兰种子经无菌播种，萌发后形成的无菌、且生长良好的根状茎。

8.根据权利要求7所述的蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于所述根状茎的长度为0.5±0.1cm。

技术总结
本发明提供一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，包括以下步骤：S1、将蕙兰的根状茎转接至增殖培养基上进行增殖培养；增殖培养基的配方为：基础培养基、蔗糖、琼脂、NAA、椰子粉、抗坏血酸、活性炭，pH5.4；S2、将根状茎转接至分化培养基上进行分化培养；分化培养基的配方为：基础培养基、蔗糖、琼脂、NAA、6‑BA、椰子粉、抗坏血酸、活性炭，pH5.4。本发明利用各组分的配合，不仅抑制内生菌的污染，还能够解决褐变问题，且可以增加蕙兰繁殖系数，同时降低病原积累，且对蕙兰野生种质资源保存具有重要意义。

技术研发人员：刘涛,王亚静,王天舒,苏晨,田野,侯倩茹,张文波
受保护的技术使用者：西安市农业技术推广中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12