改进的人源化模型小鼠的构建方法与流程

本申请涉及人源化模型，特别涉及为一种改进的人源化模型小鼠的构建方法。

背景技术：

1、近交系小鼠由于其具有遗传背景一致、繁殖周期短并且基因修饰操作手段成熟等优势，已成为免疫学研究的重要动物模型；但是，毕竟啮齿动物和人类之间存在巨大的种属差异，人类病原体或针对人类细胞开发的药物也具有种属特异性，在免疫健全的小鼠模型中无法很好的模拟疾病的发生发展；野生型小鼠的免疫系统对于来源于人的异种细胞和组织具有很强的排斥作用；而依赖于免疫缺陷小鼠的人肿瘤移植模型虽然已被广泛使用在肿瘤免疫及新疗法研发中，但由于缺乏人类免疫系统及肿瘤免疫微环境，很大程度上限制了免疫机制及免疫治疗的转化研究；因此，如何利用动物模型模拟人体肿瘤细胞与免疫系统之间的相互作用，也成为肿瘤免疫研究中至关重要的一环。

2、免疫系统人源化小鼠模型具有人类免疫系统、能够模仿人体免疫机能和病理表现的人源化小鼠模型对于研究人类疾病和新型疗法的开发具有重要意义。

技术实现思路

1、本申请旨在解决如何利用动物模型模拟人体肿瘤细胞与免疫系统之间的相互作用的技术问题，提供一种改进的人源化模型小鼠的构建方法。

2、本申请为解决技术问题采用如下技术手段：一种改进的人源化模型小鼠的构建方法，

3、一种改进的人源化模型小鼠的构建方法，所述方法包括：

4、s1、获取雄性小鼠；

5、s2、获取成年健康人体外周血3ml，在无菌抗凝管内待用；

6、s3、使用ficoll-paque分离外周血单个核细胞，加入平衡盐溶液进行离心，去除上清液，得到台盼蓝染色对细胞进行计数和活力检测，细胞活力大于90％可以正常使用；

7、s4、将多个成年健康人体的pbmc进行等量混合，并通过小鼠的尾静脉注射至其体内，并在后续以天数为单位进行记录小鼠体重；

8、s5、小鼠接种pbmc的第7日及第14日，通过眼眶取血，按照s3中方法分离小鼠的pbmc细胞进行流式细胞术检测，鉴定小鼠pbmc中hucd45+细胞和该细胞群中cd3+细胞群的比例变化情况，再列一组阴性对照组和阳性对照组进行3组对照；

9、s6、流式染色各组的pbmc细胞群进行标定，分析hucd45+细胞和该细胞群中cd3+细胞群的比例。

10、进一步地，在所述获取雄性小鼠的步骤之中，

11、所述获取的雄性小鼠必须为4～6周岁nod.cg-prkdcscidil-2rgtm/wjl/sz(nod/scid/il-2rgnull；nsg)小鼠。

12、进一步地，在所述获取成年健康人体外周血3ml，在无菌抗凝管内待用的步骤之前，

13、所述成年健康人体为年纪20-40岁，性别不限，体检各项指标正常，无免疫相关疾病。

14、进一步地，在所述使用ficoll-paque分离外周血单个核细胞，加入平衡盐溶液进行离心，去除上清液，得到台盼蓝染色对细胞进行计数和活力检测，细胞活力大于90％可以正常使用的步骤之中，

15、加入至少3倍体积的平衡盐溶液至离心管中的单核细胞中，通过轻轻上下吹打将细胞进行悬浮；18℃至20℃条件下400～500g离心10～15分钟。

16、进一步地，在所述使用ficoll-paque分离外周血单个核细胞，加入平衡盐溶液进行离心，去除上清液，得到台盼蓝染色对细胞进行计数和活力检测，细胞活力大于90％可以正常使用的步骤之中，

17、在3倍的平衡盐溶液重悬单核细胞；18℃至20℃条件下400～500g(或60～100g以去除血小板)离心10分钟。

18、进一步地，在所述将多个成年健康人体的pbmc进行等量混合，并通过小鼠的尾静脉注射至其体内，并在后续以天数为单位进行记录小鼠体重的步骤之中，

19、对每只小鼠接种3*10^5个细胞，接种后每隔一天记录一次小鼠体重。

20、进一步地，在所述小鼠接种pbmc的第7日及第14日，通过眼眶取血，按照s3中方法分离小鼠的pbmc细胞进行流式细胞术检测，鉴定小鼠pbmc中hucd45+细胞和该细胞群中cd3+细胞群的比例变化情况，再列一组阴性对照组和阳性对照组进行3组对照的步骤之中，

21、将小鼠以接种等体积的生理盐水组作为阴性对照组，将健康成年人的pbmc作为阳性对照组。

22、本申请提供了改进的人源化模型小鼠的构建方法，具有以下有益效果：通过获取雄性小鼠；获取成年健康人体外周血3ml，在无菌抗凝管内待用；使用ficoll-paque分离外周血单个核细胞，加入平衡盐溶液进行离心，去除上清液，得到台盼蓝染色对细胞进行计数和活力检测，细胞活力大于90％可以正常使用；将多个成年健康人体的pbmc进行等量混合，并通过小鼠的尾静脉注射至其体内，并在后续以天数为单位进行记录小鼠体重；小鼠接种pbmc的第7日及第14日，通过眼眶取血，按照s3中方法分离小鼠的pbmc细胞进行流式细胞术检测，鉴定小鼠pbmc中hucd45+细胞和该细胞群中cd3+细胞群的比例变化情况，再列一组阴性对照组和阳性对照组进行3组对照；流式染色各组的pbmc细胞群进行标定，分析hucd45+细胞和该细胞群中cd3+细胞群的比例；具备解决如何利用动物模型模拟人体肿瘤细胞与免疫系统之间的相互作用的技术问题，使用这种方法可以100％成功率构建hu-pbmc动物模型；同时降低了gvhd，为临床研究和科研院所提供更优的免疫人源化小鼠模型。

技术特征：

1.一种改进的人源化模型小鼠的构建方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的改进的人源化模型小鼠的构建方法，其特征在于，在所述获取雄性小鼠的步骤之中，

3.根据权利要求1所述的改进的人源化模型小鼠的构建方法，其特征在于，在所述获取成年健康人体外周血3ml，在无菌抗凝管内待用的步骤之前，

4.根据权利要求1所述的改进的人源化模型小鼠的构建方法，其特征在于，在所述使用ficoll-paque分离外周血单个核细胞，加入平衡盐溶液进行离心，去除上清液，得到台盼蓝染色对细胞进行计数和活力检测，细胞活力大于90％可以正常使用的步骤之中，

5.根据权利要求4所述的改进的人源化模型小鼠的构建方法，其特征在于，在所述使用ficoll-paque分离外周血单个核细胞，加入平衡盐溶液进行离心，去除上清液，得到台盼蓝染色对细胞进行计数和活力检测，细胞活力大于90％可以正常使用的步骤之中，

6.根据权利要求1所述的改进的人源化模型小鼠的构建方法，其特征在于，在所述将多个成年健康人体的pbmc进行等量混合，并通过小鼠的尾静脉注射至其体内，并在后续以天数为单位进行记录小鼠体重的步骤之中，

7.根据权利要求1所述的改进的人源化模型小鼠的构建方法，其特征在于，在所述小鼠接种pbmc的第7日及第14日，通过眼眶取血，按照s3中方法分离小鼠的pbmc细胞进行流式细胞术检测，鉴定小鼠pbmc中hucd45+细胞和该细胞群中cd3+细胞群的比例变化情况，再列一组阴性对照组和阳性对照组进行3组对照的步骤之中，

技术总结
本申请提供了一种改进的人源化模型小鼠的构建方法，运用于人源化模型技术领域，通过获取雄性小鼠；获取成年健康人体外周血3ml，在无菌抗凝管内待用；使用Ficoll‑Paque分离外周血单个核细胞，加入平衡盐溶液进行离心，去除上清液，通过台盼蓝染色对细胞进行计数和活力检测，细胞活力大于90％可以正常使用；将多个成年健康人体的PBMC进行等量混合，并通过小鼠的尾静脉注射至其体内，并在后续以天数为单位进行记录小鼠体重；小鼠接种PBMC的第7日及第14日，通过眼眶取血；具备解决如何利用动物模型模拟人体肿瘤细胞与免疫系统之间的相互作用的技术问题，使用这种方法可以100％成功率构建hu‑PBMC动物模型；同时降低了GVHD，为临床研究和科研院所提供更优的免疫人源化小鼠模型。

技术研发人员：邹畅,张彬,赵盼
受保护的技术使用者：深圳市勃新生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12