利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法

本发明涉及生物，特别涉及红果参的组织培养领域。

背景技术：

1、红果参（campanumoea lancifolia ）又名长叶轮种草、蜘蛛果，为桔梗科金钱豹属多年生草本植物，根以及茎叶可入药，具补虚益气、祛痰止痛的功效，同时其果实为浆果，味鲜美甘甜，富含维生素、花青素、果胶、黄酮等多种对人体有益物质。

2、随着红果参产业的发展，通过其果实口感、果实大小、药用部位有效成分含量等进行了不同品种（品系）的筛选或育种研究，并获得了更多的新品种（品系）。而目前红果参主要繁殖方式为种子繁殖，但种子繁殖存在杂交，可能导致筛选出的母本优良性状不能很好保持。

3、近年来有些关于红果参组织培养方面的研究报道，中国专利《一种红果参离体外繁方法》（cn201811004746）主要是通过利用茎段诱导愈伤组织，再通过愈伤组织分化出芽的途径进行红果参组培苗的繁育，就一般而言，愈伤组织为植物的非器官组织，一方面易受外界因子的影响而产生变异，另一方面其不是具体的植物或器官，需要通过分化培养而获得丛生芽，再通过生根最终获得生根苗，生产步骤较为繁琐。

技术实现思路

1、本发明提出一种直接利用茎段诱导丛生芽，再通过生根获得完整植株的组培快繁方法。

2、利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

3、步骤1，获取外植体；

4、步骤2，外植体去叶，剪成具芽小段；

5、步骤3，清洁外植体；

6、步骤4，对外植体进行消毒；

7、步骤5，外植体进行丛生芽诱导；

8、步骤6，诱导出的丛生芽进行增殖培养；

9、步骤7，增殖的丛生芽进行生根培养；

10、所述步骤4采用的消毒方法是先用75%酒精消毒20-30s，然后用无菌水涮洗3-4次，再用饱和漂白粉溶液消毒20-25min，然后用无菌水涮洗3-4次，最后用0.05%升汞溶液消毒5-6min，然后无菌水涮洗6-8次；

11、所述步骤5采用的丛生芽诱导培养基由改良ms+iba 0.05-0.08mg/l+iaa 0.01-0.02mg/l+cppu 0.2-0.3mg/l组成；

12、所述步骤6采用的丛生芽增殖培养基由改良ms+iba 0.03-0.05mg/l+cppu 0.3-0.5mg/l+ch 30-40mg/l组成；

13、所述步骤7采用的生根培养基由1/2改良wpm +iba 0.2-0.5mg/l+iaa 0.5-1.0mg/l+ac 0.5g/l组成；

14、所述改良ms指ms成分不变，ph调整为5.2的ms；

15、所述1/2改良wpm指 wpm成分不变，ph调整为5.2的wpm。

16、本发明相对于现有技术，生产周期短，生产成本低，种苗质量更佳，具体体现在：

17、1、本发明在外植体消毒时，升汞由0.1%浓度降低了一半，同时搭配75%酒精以及漂白粉溶液，一方面可使消毒污染率控制在20%以内，另一方面消毒剂几乎不损伤外植体。

18、2、本发明在初代诱导时采用iba、iaa和cppu的适宜浓度组合，可直接诱导出丛生芽，未采用组培过程中常规的愈伤诱导、愈伤分化成芽途径，减少了愈伤分化成芽的环节，一定程度的缩短了生产周期、简便了生产环节、降低了生产成本，同时还能有效避免愈伤受外界因子影响带来的变异风险。

19、3、本发明在增殖过程中采用iba和cppu的组合，同时创造性的添加了ch，一方面可使增殖系数稳定到6.0以上，另一方面ch的添加可防止玻璃化的发生，苗更加健壮。

20、4、一般组培苗进行生根培养时，均需25-40天的培养时间，更有甚者需更长时间或者进行二次生根培养。本发明在增殖过程中添加了ch，可使苗更加健壮，同时在一定程度上促进了基部根原基的形成，再结合1/2改良wpm与iaa和iba的适宜浓度组合的生根培养基，可在12-15天即可形成合格的生根苗。

技术特征：

1.利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

技术总结
利用红果参茎段诱导丛生芽的组培快繁方法，涉及生物技术领域。本发明的方法，包括外植体获取、清洁、消毒、丛生芽诱导、增殖培养和生根培养步骤。其中，消毒是用75%酒精消毒20‑30s，然后用无菌水涮洗3‑4次，再用饱和漂白粉溶液消毒20‑25min，然后用无菌水涮洗3‑4次，最后用0.05%升汞溶液消毒5‑6min，然后无菌水涮洗6‑8次；丛生芽诱导培养基由改良MS+IBA 0.05‑0.08mg/L+IAA 0.01‑0.02mg/L+CPPU 0.2‑0.3mg/L组成；增殖培养基由改良MS+IBA 0.03‑0.05mg/L+CPPU 0.3‑0.5mg/L+CH 30‑40mg/L组成；生根培养基由1/2改良WPM+IBA 0.2‑0.5mg/L+IAA 0.5‑1.0mg/L+AC 0.5g/L组成。本发明的方法生产周期短，生产成本低，种苗质量更佳，同时还能有效避免愈伤受外界因子影响带来的变异风险。

技术研发人员：杨维泽,张金渝,赵露琴,杨美权,曾祥飞,起明菊
受保护的技术使用者：云南省农业科学院药用植物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13