万寿菊花朵提取物的制备方法与流程

本发明涉及农药，具体涉及一种杀线虫的万寿菊花朵提取物的制备方法。

背景技术：

1、万寿菊(tageteserecta l.)为菊科万寿菊属一年生草本植物，除可以观赏，还能食用和药用，也可以作为植物杀虫剂。作为药用或杀虫剂时，使用万寿菊花的提取物效果较好。

2、针对不同的使用目的，可以对万寿菊花用不同溶剂和方式提取，得到所需要的成分。

3、线虫是世界性的病原生物，每年会给农作物造成上千亿美元的损失。在常见的植物病原线虫中，根结线虫对植物的危害位列首位。从万寿菊花中提取能够防治线虫的有效成分，是目前亟须解决的技术问题。

技术实现思路

1、本发明提供了一种万寿菊花提取物的制备方法。

2、(1)以万寿菊花的粗提物为原料，将所述粗提物分散于水中，充分搅拌后过滤，收集滤液；

3、(2)用乙酸乙酯萃取上述滤液，分出水相，浓缩乙酸乙酯层，获得乙酸乙酯浸膏；

4、(3)将步骤(2)所得乙酸乙酯浸膏，经硅胶柱层析法分离纯化，获得万寿菊花提取物。

5、其中，步骤(1)中，所述的万寿菊花的醇粗提物可用如下方式获得：

6、取万寿菊花干燥、粉碎后，用甲醇浸泡后过滤，将滤液浓缩，得到粗提物浸膏。所述粗提物浸膏的相对密度密度为0.93～1.23g/ml；本发明人发现，用该密度的粗提物浸膏为原料，万寿菊花的功效成分在后续的萃取过程中，能够在水相和有机相之间充分分配，实现目的成分的充分富集以及去除不具有杀线虫功效的成分。

7、步骤(1)中，粗提物与水的体积比例为1：1～3，

8、步骤(2)中，分出的水相可以用乙酸乙酯进行再次萃取；萃取次数为4～6次

9、步骤(2)中，乙酸乙酯和所述滤液的体积比为4～6：1；，每次萃取的混合时间为8～10分钟，静置时间为1～3小时。有利于乙酸乙酯充分萃取万寿菊花中杀线虫的有效成分。

10、步骤(2)所得到的乙酸乙酯浸膏，相对密度为0.98～1.16g/ml；

11、步骤(3)中，所述硅胶柱层析的分离条件如下：

12、层析柱径高比为3:8，填料为200～300目硅胶；硅胶填料量与乙酸乙酯浸膏的质量比6～16:1；

13、洗脱溶剂为石油醚-丙酮溶剂系统，流速为5～10ml/min；

14、洗脱方式为梯度洗脱，石油醚与丙酮的比例依次为50：1、30：1、20：1、10：1、8：2，每个梯度洗脱6-10个柱体积，收集石油醚与丙酮比例为10：1和8：2两个梯度的洗脱液合并浓缩干燥后，即得万寿菊花提取物。

15、本发明实验意外发现用浓度为50mg/ml的本发明万寿菊花提取物处理烟草南方根结线虫72小时后，线虫的死亡率达到63.27％。说明本发明万寿菊花提取物具有很强的杀南方根据线虫的作用，可以直接作为单方制剂或是与其他组分复配用于南方根据线虫的防治。

16、本发明的有益效果：

17、1、本方法制备的万寿菊花提取物效果好

18、本发明探索得到的制备方法，能够获得具有很强杀烟草南方根结线虫的万寿菊花提取物。实施例1-3可证实。

19、2、改变本方法制备条件的不同方法，均达不到本发明效果

20、对比实验1-4证明，提取溶剂，萃取方式，柱层析纯化方式等对万寿菊花提取物的杀虫活性均有影响。

21、3、变废为宝，实现了万寿菊花资源的综合利用

22、本发明可用花朵小、颜色不好通常丢弃的万寿菊花作为原料提取，具有重要经济和社会意义。

技术特征：

1.一种万寿菊花提取物的制备方法,步骤如下：

2.权利要求1所述的制备方法，步骤(1)中，粗提物与水的体积比为1：1～3。

3.权利要求1所述的制备方法，步骤(2)中，乙酸乙酯和所述滤液的体积比为4～6：1。

4.权利要求1所述的制备方法，步骤(2)中，分出的水相可以用乙酸乙酯进行再次萃取；萃取次数为4～6次；每次萃取的混合时间为8～10分钟，静置时间为1～3小时。

5.权利要求1所述的制备方法，步骤(2)所得到的乙酸乙酯浸膏的相对密度为0.98～1.16g/ml。

6.权利要求1所述的制备方法，步骤(3)中，所述硅胶柱层析的分离条件如下：

7.权利要求6所述的制备方法，洗脱方式为梯度洗脱，石油醚与丙酮的比例依次为50：1、30：1、20：1、10：1、8：2，每个梯度洗脱6-10个柱体积，收集石油醚与丙酮比例为10：1和8：2两个梯度的洗脱液合并浓缩干燥后，即得万寿菊花提取物。

8.权利要求1-7所述的制备方法，其中，步骤(1)中，所述的万寿菊花的醇粗提物用如下方式获得：

9.权利要求8所述的制备方法，所述粗提物浸膏的相对密度密度为0.93～1.23g/ml。

10.按权利要求1方法制备的万寿菊花提取物在制备防治线虫的农药中的应用。

技术总结
本发明提供了一种万寿菊花朵提取物的制备方法。万寿菊花经提取、水分散、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析等步骤制备了万寿菊花提取物。实验证实，本发明探索得到的制备方法所获得的提取物具有很强的杀烟草南方根结线虫的活性。对比实验证明，改变本方法制备条件的不同方法，均达不到本发明效果。本发明可用因花朵小、颜色不好等通常被遗弃的万寿菊花朵作为原料，废物利用。

技术研发人员：杨凌宇,蒙刚,吕芬,梁大洲,冯圭如,陈波,张春凤,徐俊驹,刘书武,农加元,桑应华
受保护的技术使用者：云南省烟草公司文山州公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23