一种药用植物组培快繁方法

本发明属于组织培养，具体涉及一种药用植物组培快繁方法。

背景技术：

1、我国药用植物的组织培养，开始于20世纪50年代，近年来，利用植物基因工程技术，通过农杆菌介导转化获得基因药用植物的研究也取得了很大的进展并逐渐应用到医学领域中。组织培养得到的药用植物其药效成分与自然植株是否相同决定了离体培养的意义。如果组培苗的药用成分等于或高于对照植株的药用成分，则组培养具有很大的价值；反之，如果组培苗的药用成分低于自然植株的药效成分甚至药性改变，则离体培养得到的组培苗没有价值。

2、虽然药用植物的组织培养已发展成一门成熟的技术，但是依然存在一些限制其大规模推广应用的问题，这些问题主要包括材料污染现象、褐化现象以及试管苗玻璃化等。无菌材料的获得是组织培养成功的关键一步。取材时的季节和取材的部位与无菌材料建立有很大的关系，一般而言，在干燥和天气好的时候以及选取幼嫩的植株部位做为外植体可以减少材料的污染，反之，如果在霉雨天气或较老部位取材则材料容易感染细菌，难以获得无菌植株。

3、经现有文献检索发现，中国专利公开号cn103651120a，公开日2014年03月26日的专利申请公开了束花石斛组培快繁生产方法，虽然能够进行快速繁殖，但是所需的空间比较大，成活率低。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种空间小、成活率高的药用植物组培快繁方法。

2、为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、一种药用植物组培快繁方法，包括如下步骤：

4、1)选株培养：选择具有良性生长状态和药用活性的优良母株，将母株的茎段、叶片组织取出，将其接种在诱导分化培养基上进行组织培养；

5、2)间歇浸没：称量培养基所需试剂的固体或液体成分，备用，将药物植物组培苗转入培养基中，营养液间歇浸没频率为每天5～7次，然后向灌装机中加入去离子水，搅拌均匀；

6、3)移栽和扩繁：当培养物生长到一定大小时，需要进行移栽和扩繁，移栽时需要注意保持无菌状态，将其转移到新的培养基中进行培养和繁殖。

7、进一步地，所述步骤2)中营养液浸没时间为每次8～10min，温度为26～28℃，培养时间为25～27天。

8、进一步地，所述营养液由如下重量份的原料组成：硝酸铵1.5～2.5份、琼脂5～6份、大豆低聚糖10～12份、氯化钠4～6份、吲哚丁酸1～2份、l-丝氨酸0.1～0.3份，水20～30份。

9、作为优选，所述步骤2)中灌装机的转速为300～330r/min，搅拌时间为20～25min，所述离子水的体积为40％～45％。

10、根据以上特征，所述在灌装机中间歇浸没培养时，加入1l液体培养基，ph为6～7，灭菌后在每个反应器中接种药用植物组培苗。

11、在一些示例中，所述液体培养基为：ms+1.0mg/l 6-ba+0.02mg/lnaa+30g/l蔗糖。

12、在一些示例中，所述药用植物选择黄芪、桔梗或半夏中的一种。

13、根据以上特征，所述培养基由如下重量份的原料组成：去皮香蕉6～10份、活性炭1～3份、琼脂0.6～0.8份、吐温80 2～3份、芸苔素内酯1～2份、氯化钙0.8～1份、大豆低聚糖0.4～0.8份。

14、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

15、1)本发明中黄芪、桔梗和半夏的生根率都大于98％以上，平均成活率分别为96.1％、97.2％和97.9％，可以明显缩短生根时间，移栽于土壤中成活率高。

16、2)本发明采用间歇浸没与灌装机相结合的方式，其叶绿素含量、多糖含量和总蛋白含量均高于固体培养，间歇浸没培养模式结合了固体培养气体交换最大化和液体培养营养吸收充分的特点，在多种植物的培养中具有优势。

17、3)本发明的组培快繁方法可以节约种植面积和资源，通过组培快繁，可以在较小的空间内大量繁殖药用植物苗木，节约了大量的种植面积和资源。

18、4)本发明的组培快繁方法可以提高药用植物的产量和品质。组培快繁可以控制药用植物的生长环境和生长速度，使其生长更加健康和快速，提高了药用植物的产量和品质。

技术特征：

1.一种药用植物组培快繁方法，其特征在于包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种药用植物组培快繁方法，其特征在于所述步骤2)中营养液浸没时间为每次8～10min，温度为26～28℃，培养时间为25～27天。

3.根据权利要求1或2所述的一种药用植物组培快繁方法，其特征在于所述营养液由如下重量份的原料组成：硝酸铵1.5～2.5份、琼脂5～6份、大豆低聚糖10～12份、氯化钠4～6份、吲哚丁酸1～2份、l-丝氨酸0.1～0.3份，水20～30份。

4.根据权利要求1所述的一种药用植物组培快繁方法，其特征在于所述步骤2)中灌装机的转速为300～330r/min，搅拌时间为20～25min，所述离子水的体积为40％～45％。

5.根据权利要求1所述的一种药用植物组培快繁方法，其特征在于所述在灌装机中间歇浸没培养时，加入1l液体培养基，ph为6～7，灭菌后在每个反应器中接种药用植物组培苗。

6.根据权利要求5所述的一种药用植物组培快繁方法，其特征在于所述液体培养基为：ms+1.0mg/l 6-ba+0.02mg/l naa+30g/l蔗糖。

7.根据权利要求1所述的一种药用植物组培快繁方法，其特征在于所述药用植物选择黄芪、桔梗或半夏中的一种。

8.根据权利要求1所述的一种药用植物组培快繁方法，其特征在于所述培养基由如下重量份的原料组成：去皮香蕉6～10份、活性炭1～3份、琼脂0.6～0.8份、吐温80 2～3份、芸苔素内酯1～2份、氯化钙0.8～1份、大豆低聚糖0.4～0.8份。

技术总结
本发明公开了一种药用植物组培快繁方法，属于组织培养技术领域。本发明通过选株培养、间歇浸没、移栽和扩繁这三个步骤予以实现。本发明采用间歇浸没与灌装机相结合的方式，其叶绿素含量、多糖含量和总蛋白含量均高于固体培养，间歇浸没培养模式结合了固体培养气体交换最大化和液体培养营养吸收充分的特点，在多种植物的培养中具有优势。本发明的组培快繁方法可以节约种植面积和资源，通过组培快繁，可以在较小的空间内大量繁殖药用植物苗木，节约了大量的种植面积和资源。本发明的组培快繁方法可以提高药用植物的产量和品质。组培快繁可以控制药用植物的生长环境和生长速度，使其生长更加健康和快速，提高了药用植物的产量和品质。

技术研发人员：高素芳,张延红,曾翠云
受保护的技术使用者：甘肃中医药大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13