一种促进紫花苜蓿结瘤和生长的方法

本发明涉及生物繁育领域，尤其涉及一种促进紫花苜蓿结瘤和生长的方法。

背景技术：

1、紫花苜蓿(medicago sativa l.)是一种优质豆科苜蓿，其具有高产、营养丰富、适应性强以及良好生态效益等特点，被誉为“牧草之王”，近年来，在政策和市场需求的拉动下，苜蓿现已成为植物性蛋白饲料的主要作物，其相关草捆、草粉等产品，已成为农业市场的常见苜蓿产品，且产品数量供不应求，因此，如何提高紫花苜蓿等牧草的产量已成为研究热点之一。

2、微生物胞外多糖(exopoly saccharides，eps)是一些特殊微生物细胞相关或细胞外分泌的高分子量聚合物，通常在恶劣环境或营养条件下产生，且与非生物胁迫之间存在正相关关系，其作为一种生理应激反应和应对环境的保护策略，对细菌的生长、定殖和抗逆等均有重要意义，eps产量大、生产周期短、提取率高，具有广阔的开发应用前景，因其出色的抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用而被广泛研究，近年来，大量学者开始探究eps促进植物生长方面的影响，龚健等研究发现，蓝藻胞外多糖对沙漠草本植物种子的萌发有不同程度的促进作用，黄诗宸等通过乳酸菌胞外多糖浸种发现，土壤中添加乳酸菌胞外多糖对水稻幼苗生长有显著的促进作用，能够显著促进光合色素的合成，马晓颖等通过研究不同微生物多糖对植物生长的影响，发现真菌发酵液多糖和菌丝多糖对玉米的生长，尤其是对根部的生长有显著的促进作用，目前，关于eps在植物促生方面的研究较少，其作用机理也尚未明确，因此，深入挖掘eps在植物促生领域的潜力，对其开发和提高农业生产都具有重要的意义。

3、桃色欧文氏菌(erwiniapersicina)是一种典型的革兰氏阴性细菌(gramnegative，g-)，其编号cp2菌株可在金氏b培养基上能产生大量生黏液状eps，且广泛存在于自然环境中，但关于cp2-eps对植物促生的研究较少，以cp2-eps和根瘤菌联合接种的研究更是鲜有报道，因此，本试验以桃色欧文氏菌cp2-eps和根瘤菌联合接种，探究其对紫花苜蓿种子萌发及苗期生长的影响，以期为促进紫花苜蓿的生长和优化根瘤菌接种提供理论依据。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种促进紫花苜蓿结瘤和生长的方法，以解决紫花苜蓿生长的技术问题。

2、本发明为解决上述技术问题，采用以下技术方案来实现：

3、一种促进紫花苜蓿结瘤和生长的方法，包括以下步骤：

4、s1、供试材料选取及保存

5、由紫花苜蓿“巨能551”成熟根瘤分离得到，菌株保存温度为-80℃，cp2-eps常温保存；

6、s2、种养选择

7、挑选足够籽粒饱满、无病虫害的紫花苜蓿“巨能551”种子，种样4℃恒温保存；

8、s3、培养液制备

9、制备出0、0.6、0.9、1.2、1.5g.l-1五种不同浓度的cp2-eps溶液，将五种cp2-eps溶液分别以190ml加入生长瓶中，并通过灭菌锅121℃、0.11mpa灭菌21min后待用，再以无菌水配置菌悬液，其中od600＝0.12，并以10ml分别加入生长瓶中，确定为种子萌发和幼苗生长的培养液；

10、s5、种子处理

11、将挑选好的种子用95％的乙醇表面消毒，后用5％的naclo浸泡5min，并依次用无菌水洗涤；

12、s5、种子萌发试验

13、在培养皿中铺放3层滤纸后灭菌，加入培养液完全浸湿，均匀放入50粒种子，重复制作4个，封培养皿，置于光照培养箱中，温度25±1℃、湿度60％、光强4000lx条件下培养，记录每天发芽种子数；

14、s6、种子发芽试验

15、将处理后的种子等距置于生长瓶的发芽床上，每瓶25粒，重复制作8个。生长瓶置于温度23℃、湿度45％、光照(18klux)18h、黑暗6h的生长室进行培养，21d时取样测定指标；

16、测定指标：种子发芽率＝第10d发芽的种子数/25×100％；发芽势＝(第5d发芽的种子数/25×100％；发芽指数＝∑gt/dt；

17、gt:第td天的发芽数；

18、dt:相应的发芽日数)。

19、优选的，还包括如下步骤：

20、数据分析：通过spss 23.0进行单因素方差法统计分析，分析出种子鲜干重、长度、根系指标等，幼苗生长指标、叶绿素含量测定、相对电导率、生理指标，并计算平均值和平均值的标准误差，由最小显著差异(p＜0.05)检验确定，再进行数据整理和绘图。

21、本发明的有益效果是：

22、本发明以紫花苜蓿“巨能551”种子为试验材料，探究不同浓度(0.6g.l-1、0.9g.l-1、1.2g.l-1、1.5g.l-1)cp2-eps和根瘤菌(r)联合接种对紫花苜蓿种子萌发及幼苗生长的影响，得出0.6～1.5g/l cp2-eps和根瘤菌联合接种可以有效地促进紫花苜蓿幼苗的生长和根部结瘤，进一步通过topsis综合分析得出1.2g/l的cp2-eps和根瘤菌联合接种对紫花苜蓿幼苗生长的促进效果最好。

技术特征：

1.一种促进紫花苜蓿结瘤和生长的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种促进紫花苜蓿结瘤和生长的方法，其特征在于还包括如下步骤：

技术总结
本发明提供一种促进紫花苜蓿结瘤和生长的方法，涉及生物繁育领域，包括以下步骤，供试材料选取及保存，种养选择，培养液制备，种子处理，种子萌发试验，种子发芽试验，数据分析，通过SPSS23.0进行单因素方差法统计分析，分析出种子鲜干重、长度、根系指标等，幼苗生长指标、叶绿素含量测定、相对电导率、生理指标，本发明以紫花苜蓿“巨能551”种子为试验材料，探究不同浓度(0.6g.L<supgt;‑1</supgt;、0.9g.L<supgt;‑1</supgt;、1.2g.L<supgt;‑1</supgt;、1.5g.L<supgt;‑1</supgt;)Cp2‑EPS和根瘤菌(R)联合接种对紫花苜蓿种子萌发及幼苗生长的影响，得出0.6～1.5g/LCp2‑EPS和根瘤菌联合接种可以有效地促进紫花苜蓿幼苗的生长和根部结瘤，进一步通过Topsis综合分析得出1.2g/L的Cp2‑EPS和根瘤菌联合接种对紫花苜蓿幼苗生长的促进效果最好。

技术研发人员：张振粉,靳振海,黄荣,姚博,谢金晶,杨杰,侯瑄,朱绍玮
受保护的技术使用者：甘肃农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13