本发明涉及雄蜂精液保存液领域，具体为一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法。
背景技术：
1、蜜蜂是一种重要的典型社会性昆虫，以群体生活为主，蜜蜂通常在花朵上采集花粉和蜜，并利用这些原料来生产蜜、蜂蜡和蜂胶等产品，蜜蜂是自然界中重要的传粉媒介，对维护生态平衡和保护植物多样性具有重要作用。
2、在蜜蜂育种和繁殖的过程中，工作人员大多需要使用到雄蜂精液保存液，蜜蜂雄蜂精液保存液是一种为了保存蜜蜂雄蜂精液而设计的特殊液体，蜜蜂繁殖过程中，雄蜂精液需要长时间保持活力，以便在配对的时候成功受精，传统上，蜜蜂养殖者需要不断地从蜂群中捕获雄蜂并取出其精液，这样做不仅浪费时间和精力，也会造成雄蜂数量减少和蜂群损失，而蜜蜂雄蜂精液保存液则可以帮助解决这个问题，将雄蜂精液保存在保存液中，长时间保存，方便随时使用。
3、然而传统的雄蜂精液保存液制备过程中，大多无菌操作不够严格，细菌污染的风险比较高，进而极大地影响了雄蜂精液存储的质量，同时传统的雄蜂精液保存液制备过程中，使用的抗生素类型单一，通常只使用一种抗生素如青霉素，这会导致细菌在长期的保存过程中产生耐药性，从而影响蜜蜂雄蜂精液的质量和有效性，为此，急需进行技术改进。
技术实现思路
1、(一)解决的技术问题
2、针对现有技术的不足，本发明提供了一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法，解决了传统雄蜂精液保存液无菌操作不够严格，细菌污染的风险较高的问题，解决了传统雄蜂精液保存液使用的抗生素类型单一的问题。
3、(二)技术方案
4、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：
5、包括如下配比的组成成分：去离子水7-14份、氨基酸0.5-1份、葡萄糖1.65-3.3份、琼脂0.25-0.5份、庆大霉素0.1-0.2份、神经营养因子0.05-0.1份、抗氧化剂0.08-0.16份，激素0.02-0.04份、碳酸盐0.05-0.1份、谷氨酸0.1-0.2份、脱氧核苷酸0.2-0.4份；
6、优选的，包括如下配比的组成成分：去离子水7份、氨基酸0.5份、葡萄糖1.65份、琼脂0.25份、庆大霉素0.1份、神经营养因子0.05份、抗氧化剂0.08份，激素0.02份、碳酸盐0.05份、谷氨酸0.1份、脱氧核苷酸0.2份。
7、优选的，包括如下配比的组成成分：去离子水10.5份、氨基酸0.75份、葡萄糖2.475份、琼脂0.375份、庆大霉素0.15份、神经营养因子0.075份、抗氧化剂0.12份，激素0.03份、碳酸盐0.075份、谷氨酸0.15份、脱氧核苷酸0.3份。
8、优选的，包括如下配比的组成成分：去离子水14份、氨基酸1份、葡萄糖3.3份、琼脂0.5份、庆大霉素0.2份、神经营养因子0.1份、抗氧化剂0.16份，激素0.04份、碳酸盐0.1份、谷氨酸0.2份、脱氧核苷酸0.4份。
9、优选的，所述去离子水是指使用离子交换树脂去除大部分离子后得到的水，经过去离子处理后，基本上除了水分子之外，几乎不含其他离子。
10、优选的，所述葡萄糖是一种单糖，也称为血糖、玉米糖或玉米葡糖。
11、优选的，所述碳酸盐是由碳酸根离子co32-和金属离子组成的化合物。
12、优选的，一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法，包括以下步骤：
13、s1.收集雄蜂精液
14、在天气晴朗温度适宜的时候收集雄蜂精液，具体时间为早上10点到下午3点，在工作人员采集雄蜂精液前应先将雄蜂捆绑于浅盘上，把捆绑后的雄蜂移入无菌的环境下，并将雄蜂精液采集至无菌的聚丙烯制品内部，再将收集后的雄蜂精液及时放入恒温的水浴中，同时保持恒温水浴的温度为28-34℃；
15、s2.对制备保存液所需要的材料进行准备；
16、s3.开始制备保存液
17、首先将琼脂加入去离子水中，通过磁力加热搅拌器边搅拌边加热，以使琼脂能充分溶解，当琼脂完全溶解后，工作人员加入氨基酸和葡萄糖，继续搅拌均匀，当氨基酸和葡萄糖混合均匀后，工作人员再依次加入庆大霉素、神经营养因子、抗氧化剂、激素、碳酸盐、谷氨酸和脱氧核苷酸进行再次搅拌，直到均匀混合为止；
18、s4.对配置好的雄蜂精液保存液进行过滤
19、将无菌处理完成的0.45μm过滤器安装在过滤器支架上，使用0.9％的生理盐水对过滤器进行预先冲洗，以确保过滤器完全湿润，将配置完成的雄蜂精液保存液倒入过滤器中，同时在雄蜂精液保存液过滤过程中需要工作人员轻轻摇动过滤器，使雄蜂精液保存液通过过滤器；
20、s5.分装保存液
21、将过滤完成的雄蜂精液保存液分装到无菌的离心管中进行密封，使用高压蒸汽灭菌器对离心管进行灭菌处理，以保证保存液的无菌性；
22、s6.保存蜜蜂雄蜂精液
23、此时将收集好的雄蜂精液缓慢地注入保存液中，尽可能让蜜蜂雄蜂精液与保存液充分混合；
24、s7.雄蜂精液保存液的冻结；
25、将混合完成的雄蜂精液保存液放入-80℃超低温冰箱中冻结，之后将冻结后的雄蜂精液保存液储存在-196℃的液氮罐内长期保存即可。
26、(三)有益效果
27、本发明提供了一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法。具备以下有益效果：
28、1、本发明提供的一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法，该方法在制备保存液的过程中，达到了全程无菌处理的目的，降低了细菌对雄蜂精液存储造成的不利影响。
29、2、本发明提供的一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法，该方法通过加入神经营养因子，神经营养因子可以保护蜜蜂雄蜂精巢神经细胞的正常功能，从而保持蜜蜂雄蜂作为种群的生殖能力，通过加入抗氧化剂，抗氧化剂能够防止蜜蜂雄蜂精液受到自由基的氧化损伤，从而延长保存液的保存时间，通过加入激素，激素能够促进蜜蜂雄蜂精巢内精子的生产和成熟，从而提高保存液中的精子质量，通过加入碳酸盐，碳酸盐可以维持保存液的ph，保持其稳定性，并且能够促进蜜蜂雄蜂精液中的激活酶的活性，从而提高精子的存活率，通过加入谷氨酸，谷氨酸是一种氨基酸，可以帮助精子提高活力、增强存活能力、受精能力和促进精液的质量，通过加入脱氧核苷酸，脱氧核苷酸是dna的核心部分，可以促进精子的新陈代谢和能量代谢，增强精子的存活能力和受精能力，进而提高了蜜蜂雄蜂精液的质量和有效性。
1.一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备，其特征在于，包括如下配比的组成成分：去离子水7-14份、氨基酸0.5-1份、葡萄糖1.65-3.3份、琼脂0.25-0.5份、庆大霉素0.1-0.2份、神经营养因子0.05-0.1份、抗氧化剂0.08-0.16份，激素0.02-0.04份、碳酸盐0.05-0.1份、谷氨酸0.1-0.2份、脱氧核苷酸0.2-0.4份。
2.根据权利要求1所述的一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备，其特征在于，包括如下配比的组成成分：去离子水7份、氨基酸0.5份、葡萄糖1.65份、琼脂0.25份、庆大霉素0.1份、神经营养因子0.05份、抗氧化剂0.08份，激素0.02份、碳酸盐0.05份、谷氨酸0.1份、脱氧核苷酸0.2份。
3.根据权利要求1所述的一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备，其特征在于，包括如下配比的组成成分：去离子水10.5份、氨基酸0.75份、葡萄糖2.475份、琼脂0.375份、庆大霉素0.15份、神经营养因子0.075份、抗氧化剂0.12份，激素0.03份、碳酸盐0.075份、谷氨酸0.15份、脱氧核苷酸0.3份。
4.根据权利要求1所述的一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备，其特征在于，包括如下配比的组成成分：去离子水14份、氨基酸1份、葡萄糖3.3份、琼脂0.5份、庆大霉素0.2份、神经营养因子0.1份、抗氧化剂0.16份，激素0.04份、碳酸盐0.1份、谷氨酸0.2份、脱氧核苷酸0.4份。
5.根据权利要求1所述的一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法，其特征在于，所述去离子水是指使用离子交换树脂去除大部分离子后得到的水，经过去离子处理后，基本上除了水分子之外，几乎不含其他离子。
6.根据权利要求1所述的一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法，其特征在于，所述葡萄糖是一种单糖，也称为血糖、玉米糖或玉米葡糖。
7.根据权利要求1所述的一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法，其特征在于，所述碳酸盐是由碳酸根离子co32-和金属离子组成的化合物。
8.一种蜜蜂雄蜂精液的保存液制备方法，其特征在于，包括以下步骤：