一种桉树分化培养基及其应用的制作方法

本发明涉及植物组织培养，特别是涉及一种桉树分化培养基及其应用。

背景技术：

1、桉树(eucalyptus)是桃金娘科(myrtaceae)杯果木属(angophora)、伞房属(corymbia)和桉属(eucalyptus)3个属树种的统称，共有808个种和137个亚种或变种，共计945个分类群，是我国南方速生丰产林战略树种，在缓解木材等林产品短缺方面发挥着重要的作用。遗传控制、培育优良的抗性品种有利于桉树产业的可持续发展。为了研究桉树的基因功能和进行转基因育种，首先需要解决桉树再生体系的构建问题。

2、目前虽然有多篇论文已发表了桉树再生体系的构建方法，但是由于无性系不同、实验药品不可得、配方无法重复性等问题，导致桉树再生体系无法广泛应用推广，且目前针对尾巨桉dh3229、尾叶桉ldud26和尾叶桉zquc14的再生体系的构建过程中，存在不定芽诱导效果和褐化率高的问题。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种桉树分化培养基及其应用。本发明提供的桉树分化培养基，可以有效诱导尾巨桉dh3229、尾叶桉ldud26和尾叶桉zquc14的不定芽生成，10d左右可见(即肉眼可以看到)茎段形成愈伤组织，30d左右可见茎段两端膨大，60d左右可见茎段不定芽生成，此后茎段呈爆发式生长，而且茎段的褐化率仅为30％。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、本发明提供了一种桉树分化培养基，所述桉树分化培养基以ms培养基为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄基氨基嘌呤0.5～2mg/l、激动素1～3mg/l、萘乙酸0.02～0.05mg/l和蔗糖15～30g/l。

4、优选的，所述桉树分化培养基的适用植物包括尾巨桉dh3229、尾叶桉ldud26或尾叶桉zquc14；

5、所述桉树分化培养基的适用植物为尾巨桉dh3229时，所述桉树分化培养基中激动素的浓度为1～1.5mg/l；

6、所述桉树分化培养基的适用植物为尾叶桉ldud26或尾叶桉zquc14时，所述桉树分化培养基中激动素的浓度为2mg/l。

7、本发明还提供了上述技术方案所述的桉树分化培养基在桉树组织培养中的应用。

8、优选的，所述应用包括诱导愈伤组织生成和/或诱导芽生成。

9、优选的，所述桉树包括尾巨桉dh3229、尾叶桉ldud26或尾叶桉zquc14。

10、本发明还提供了一种桉树的组织培养方法，包括以下步骤：

11、将外植体接种到桉树分化培养基上，进行诱导培养，得到不定芽；

12、所述外植体包括桉树苗的茎段；所述桉树分化培养基包括上述技术方案所述的桉树分化培养基。

13、优选的，所述茎段的长度为0.3～0.7cm。

14、优选的，所述诱导培养的方法包括：先暗培养3～6d后再进行光照培养；所述光照培养的条件包括：温度为25℃，光照强度为1000～1500lux，每天的光暗时间比为16h：8h。

15、优选的，所述诱导培养的方法还包括：当所述外植体出现失绿现象时，更换所述桉树分化培养基。

16、优选的，所述组织培养方法还包括：将所述不定芽转入生根培养基上，进行生根培养，得到完整的植株；所述生根培养基以1/2ms培养基为基础培养基，还包括吲哚乙酸0.1～0.2mg/l和琼脂5～7g/l。

17、有益效果：

18、本发明提供了一种桉树分化培养基，所述桉树分化培养基以ms培养基为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄基氨基嘌呤0.5～2mg/l、激动素1～3mg/l、萘乙酸0.02～0.05mg/l和蔗糖15～30g/l。本发明通过在ms培养基中添加适宜浓度的6-苄基氨基嘌呤、激动素和萘乙酸，配制得到的桉树分化培养基可以有效诱导尾巨桉dh3229、尾叶桉ldud26和尾叶桉zquc14的不定芽生成，且从外植体到不定芽生成过程中，无需改变培养基配方，采用本发明提供的桉树分化培养基可以直接将外植体诱导分化至不定芽，其中，诱导培养10d左右可见茎段形成愈伤组织，诱导培养30d左右可见茎段两端膨大，诱导培养60d左右可见茎段不定芽生成，此后茎段呈爆发式生长，而且茎段的褐化率仅为30％，为研究桉树的基因功能和进行转基因育种提供了技术支持。

技术特征：

1.一种桉树分化培养基，其特征在于，所述桉树分化培养基以ms培养基为基础培养基，还包括以下浓度的组分：6-苄基氨基嘌呤0.5～2mg/l、激动素1～3mg/l、萘乙酸0.02～0.05mg/l和蔗糖15～30g/l。

2.根据权利要求1所述的桉树分化培养基，其特征在于，所述桉树分化培养基的适用植物包括尾巨桉dh3229、尾叶桉ldud26或尾叶桉zquc14；

3.权利要求1或2所述的桉树分化培养基在桉树组织培养中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用包括诱导愈伤组织生成和/或诱导芽生成。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，所述桉树包括尾巨桉dh3229、尾叶桉ldud26或尾叶桉zquc14。

6.一种桉树的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述茎段的长度为0.3～0.7cm。

8.根据权利要求6或7所述的组织培养方法，其特征在于，所述诱导培养的方法包括：先暗培养3～6d后再进行光照培养；所述光照培养的条件包括：温度为25℃，光照强度为1000～1500lux，每天的光暗时间比为16h：8h。

9.根据权利要求8所述的组织培养方法，其特征在于，所述诱导培养的方法还包括：当所述外植体出现失绿现象时，更换所述桉树分化培养基。

10.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述组织培养方法还包括：将所述不定芽转入生根培养基上，进行生根培养，得到完整的植株；所述生根培养基以1/2ms培养基为基础培养基，还包括吲哚乙酸0.1～0.2mg/l和琼脂5～7g/l。

技术总结
本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是涉及一种桉树分化培养基及其应用。本发明通过在MS培养基中添加适宜浓度的6‑苄基氨基嘌呤、激动素和萘乙酸，配制得到的桉树分化培养基可以有效诱导尾巨桉DH3229、尾叶桉LDUD26和尾叶桉ZQUC14的不定芽生成，且从外植体到不定芽生成过程中，无需改变培养基配方，采用本发明提供的桉树分化培养基可以直接将外植体诱导分化至不定芽，其中，诱导培养8～12d可见茎段形成愈伤组织，诱导培养35～35d可见茎段两端膨大，诱导培养50～60d左右可见茎段不定芽生成，此后茎段呈爆发式生长，而且茎段的褐化率仅为25％，为研究桉树的基因功能和进行转基因育种提供了技术支持。

技术研发人员：杨晓慧,潘文,廖焕琴,杨会肖,张卫华,徐放
受保护的技术使用者：广东省林业科学研究院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13