一种干细胞保存液及其制备方法和应用与流程

本发明涉及细胞保存，具体涉及一种干细胞保存液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、间充质干细胞(mesenchymal stem cell msc)是可形成多种细胞类型的多能干细胞。msc最早在骨髓中发现，随后还发现存在于人体发生、发育过程的许多种组织中。随着间充质干细胞及其相关技术的日益成熟，临床研究已经在许多领域开展。

2、目前，已经从骨髓、脐带、脐血、胎盘、脂肪等组织中分离出间充质干细胞，用得最多的是骨髓来源的间充质干细胞。但骨髓来源的间充质干细胞存在以下问题：随着年龄的老化，干细胞数目显著降低、增殖分化能力大幅度衰退；制备过程不容易质控；移植给异体可能引起免疫反应；取材时对患者有损伤，患者有骨髓疾病时不能采集，即使是健康供者，亦不能抽取太多的骨髓。这都限制了骨髓间充质干细胞临床应用，使得寻找骨髓以外其他可替代的间充质干细胞来源成为一个重要的问题。

3、脂肪间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells, adscs）是来源于脂肪组织的干细胞，与其它成体干细胞一样具有自我更新和多向分化的能力，在诱导条件下可以分化成为神经细胞、免疫细胞、胰岛细胞、肌细胞、肝细胞、软骨细胞、基质细胞。同时，脂肪间充质干细胞，取材容易，脂肪中干细胞浓度高出骨髓500倍以上，细胞性状较其他干细胞培养更加稳定，安全可靠，分化能力强大，可以分化为各个系统的功能细胞。而且脂肪干细胞不会根据人的年龄增长而活性下降，相对比其他来源的干细胞，脂肪干细胞更加稳定。但是在临床阶段，由于环境距离、制备时间以及患者自身状况等原因，间充质干细胞无法在制备后直接应用于临床患者，而是需要保存一段时间，才能给患者使用。因此，需要干细胞保存液来保证其活性和稳定性。

4、现有技术中干细胞的保存条件通常为低温或深低温，若长时间保存可能会对干细胞造成损害，影响其生物学特性，如增殖能力的降低。

5、申请号为2022101634437的发明专利公开了一种脂肪间充质干细胞保存液及其制备方法和应用，该发明所公开的保存液在保存72h后脂肪间充质干细胞的存活率在90％以上，能够降低短途运输的成本。但是96h后细胞存活率即下降至85%左右，这说明该保存液的保存效果仍存在可提升空间。同时，该发明并未解决低温保存后干细胞增殖能力下降的问题。

技术实现思路

1、针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种干细胞保存液及其制备方法和应用。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一方面，提供一种干细胞保存液，所述干细胞保存液包括基础组分、抗氧化组分和保护组分，所述基础组分、抗氧化组分、保护组分的重量比为（2-4）：（1-1.5）：（0.5-2）；

4、所述基础组分由以下重量份的原料组成： 6-8份氯化钠、3-5份透明质酸钠、1-7份维生素、5-12份人血蛋白和20-35份注射用水；

5、所述抗氧化组分由以下重量份的原料组成：10-15份富勒烯c70、8-12份茶多酚和5-10份鞣花酸；

6、所述保护组分由以下重量份的原料组成：2-6份海藻糖、1-3份向日葵芽提取物和1-4份甘油。

7、其中，基础组分能够起到维持干细胞渗透压、提供营养物质的作用；抗氧化组分能够清除自由基，减少代谢废物产生和对有害物质的吸收，保护脂肪间充质干细胞的结构完整性和功能；保护组分则能够减少脂肪间充质干细胞所受的低温损伤，并降低保存液外部环境以及内部化合物对干细胞可能造成的损伤。同时，干细胞保存液中的抗氧化组分和保护组分之间协同作用，对提高干细胞保存的时间长度、保存后的细胞存活率起到了1+1＞2的效果。

8、优选的，所述透明质酸钠包括低分子量透明质酸钠、高分子量透明质酸钠中的一种或多种。

9、优选的，所述维生素包括维生素b、维生素c、维生素e和维生素k中的一种或多种。

10、本发明的第二方面，提供上述干细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：

11、（1）将氯化钠、透明质酸钠、维生素和人血蛋白添加至注射用水，搅拌均匀得到基础组分；向基础组分中依次加入鞣花酸、富勒烯c70和茶多酚，搅拌均匀得到混合液；

12、（2）将海藻糖、向日葵芽提取物和甘油混合均匀得到保护组分，将保护组分添加至混合液，搅拌均匀后低温保存，得到干细胞保存液。

13、优选的，所述低温保存的条件为-2℃～4℃。

14、本发明的第三方面，提供上述干细胞保存液在脂肪间充质干细胞保存中的应用，将脂肪间充质干细胞重悬于保存液中，在0-4℃条件下保存。

15、优选的，保存液中间充质干细胞的密度为（2-6）×106个/ml。

16、本发明的有益效果：

17、（1）本发明的干细胞保存液在保存脂肪间质干细胞时，120h后的细胞存活率仍在90%以上，相比于现有技术，在充分满足了临床需求的同时，能够进一步延长干细胞的保存时间，为干细胞的运输、储存提供了灵活性和便利性。

18、（2）本发明的干细胞保存液在保存后对干细胞的生物学特性影响极小，能够在保存后直接临床使用。

技术特征：

1.一种干细胞保存液，其特征在于，包括基础组分、抗氧化组分和保护组分，所述基础组分、抗氧化组分、保护组分的重量比为（2-4）：（1-1.5）：（0.5-2）；

2.根据权利要求1所述的一种干细胞保存液，其特征在于，所述透明质酸钠包括低分子量透明质酸钠、高分子量透明质酸钠中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的一种干细胞保存液，其特征在于，所述维生素包括维生素b、维生素c、维生素e和维生素k中的一种或多种。

4.一种权利要求1-3任意一项所述的干细胞保存液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述低温保存的条件为-2℃～4℃。

6.权利要求1-3任意一项所述的干细胞保存液在脂肪间充质干细胞保存中的应用，其特征在于，将脂肪间充质干细胞重悬于保存液中，在0-4℃条件下保存。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，保存液中间充质干细胞的密度为（2-6）×106个/ml。

技术总结
本发明公开了一种干细胞保存液及其制备方法和应用，属于细胞保存技术领域。干细胞保存液包括基础组分、抗氧化组分和保护组分，基础组分由以下原料组成：氯化钠、透明质酸钠、维生素、人血蛋白和注射用水；抗氧化组分由以下原料组成：富勒烯C70、茶多酚和鞣花酸；保护组分由以下原料组成：海藻糖、向日葵芽提取物和甘油。本发明的干细胞保存液在保存脂肪间质干细胞时，120h后的细胞存活率仍在90%以上，在充分满足临床需求的同时，能够进一步延长干细胞的保存时间，为干细胞的运输、储存提供了灵活性和便利性。

技术研发人员：王川,杨继建,吴蓉,和法莲,张婷
受保护的技术使用者：诺莱生物医学科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15