一种同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积的方法

本发明涉及生物，特别是涉及一种同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积的方法。

背景技术：

1、刺五加（ acanthopanax senticosus）是五加科五加属的多年生落叶灌木，在我国主要分布于黑龙江、吉林和辽宁等地。《本草纲目》、《神农本草经》和《中华人民共和国药典》等将五加皮列为上品，具有益气健脾、补气安神之功效。现代药理学研究表明，刺五加根茎富含皂苷类、多糖和黄酮等活性成分，具有抗感染、抗病毒、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、增强机体免疫力、降低血糖血脂等多种药理学功能。

2、以细胞全能性为基础建立起来的植物细胞培养技术为刺五加中黄酮等有用活性物质的生产提供了一条新途径，它不仅不受土地资源和季节的限制，更不受其活性物质累积部位的影响。在应用植物细胞培养生产植物有用活性物质的研究中，国内外研究者通过优质细胞系的选育、培养条件的优化、诱导技术以及活性物质生物合成的途径工程等，促进有用活性物质的高产。但同时发现，诱导或调控细胞生长与活性物质的累积一般不同步，即有助于活性物质累积高的调控或诱导技术一般抑制细胞的生长。因此，探索一种新的调控技术，使得在诱导调控的过程中最大限度地增加细胞的生长和活性物质的累积，是目前有待解决的科学问题。

技术实现思路

1、发明人前期通过细胞工程手段获得了产黄酮和皂苷等的一株刺五加胚性愈伤组织细胞系，该细胞系可以通过体细胞胚途径发育形成完整植株，但该细胞系生长速率相对较慢。然而，寻找促进其生长和活性物质累积的绿色环保方法是该细胞系能够被高效利用以及用于工业化生产的前提保障。因此，本发明致力于探索促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮等活性物质累积的方法，以促进刺五加胚性愈伤组织的工业化利用。

2、本发明的目的是提供一种同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积的方法，以解决上述现有技术存在的问题。本发明的方法协调了诱导或调控下活性物质累积和细胞生长不能同时兼顾的问题。

3、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

4、本发明提供电刺激在同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积中的应用，所述电刺激的电流强度为100 ma，处理时间为30 min。

5、本发明还提供一种利用电刺激同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积的方法，包括对刺五加胚性愈伤组织依次进行电刺激和暗培养；所述电刺激的电流强度为100ma，处理时间为30min。

6、进一步地，所述暗培养的培养时间为28d。

7、进一步地，所述胚性愈伤组织为经过继代培养2个周期的胚性愈伤组织。

8、进一步地，所述刺五加胚性愈伤组织由刺五加的茎段接种在含有1.0 mg·l-12,4-二氯苯氧乙酸（2,4-d）的ms培养基上培养获得。

9、进一步地，所述刺五加的茎段为刺五加无菌苗的茎段。

10、进一步地，所述刺五加无菌苗由刺五加完整的胚经过组织培养获得，所述组织培养的培养基为不含激素的ms培养基。

11、进一步地，所述刺五加完整的胚由成熟的刺五加种子先用乙醇溶液浸泡，再用次氯酸钠溶液浸泡后，灭菌蒸馏水冲洗后获得。

12、本发明公开了以下技术效果：

13、本发明首次提出了电刺激能够同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积，调整电流强度和处理时间能够在促进刺五加胚性愈伤组织生长的同时，满足其活性物质积累不受抑制。

14、本发明提供了一种同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积的电刺激调控方法，该方法协调了诱导或调控下活性物质累积和细胞生长不能同时兼顾的问题，为利用植物细胞工程技术生产活性物质提供了技术支撑，促进了刺五加胚性愈伤组织的工业化生产和利用。

技术特征：

1.电刺激在同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积中的应用，其特征在于，所述电刺激的电流强度为100ma，处理时间为30min。

2.一种利用电刺激同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积的方法，其特征在于，包括对刺五加胚性愈伤组织依次进行电刺激和暗培养；所述电刺激的电流强度为100ma，处理时间为30min。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述暗培养的培养时间为28d。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述胚性愈伤组织为经过继代培养2个周期的胚性愈伤组织。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述刺五加胚性愈伤组织由刺五加的茎段接种在含有1.0mg·l-1 2,4-d的ms培养基上培养获得。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述刺五加的茎段为刺五加无菌苗的茎段。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述刺五加无菌苗由刺五加完整的胚经过组织培养获得，所述组织培养的培养基为不含激素的ms培养基。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述刺五加完整的胚由成熟的刺五加种子先用乙醇溶液浸泡，再用次氯酸钠溶液浸泡后，灭菌蒸馏水冲洗后获得。

技术总结
本发明公开了一种同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积的方法，属于生物技术领域。本发明提供了电刺激在同步促进刺五加胚性愈伤组织生长和黄酮累积中的应用，所述电刺激的电流强度为100mA，处理时间为30min。具体包括对刺五加胚性愈伤组织依次进行电刺激和暗培养，所述暗培养的培养时间为28d；所述胚性愈伤组织为经过继代培养2个周期的胚性愈伤组织。本发明协调了诱导或调控下活性物质累积和细胞生长不能同时兼顾的问题，为利用植物细胞工程技术生产活性物质提供了技术支撑。

技术研发人员：范桂枝,姚大彬,唐中华,李德文,由香玲,詹亚光,高兴蕾
受保护的技术使用者：东北林业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15