自发性早期肺癌小鼠模型及其构建方法和应用与流程

本发明属于动物模型构建，具体涉及自发性早期肺癌小鼠模型及其构建方法和应用。

背景技术：

1、肺癌是恶性程度最高的肿瘤之一，在世界范围内发病率和死亡率均居高不下，严重危害人们的生命与健康，五年生存率仅为15％，早期发现早期治疗是提高肺癌患者生存率的重要手段。肺癌的发生是经历早期的非典型增生，原位癌到浸润癌的复杂过程，但是其发生发展的机制尚不明确。因此，深入探索肺癌发生的病理机制，是防治肺癌恶性进程、提高肺癌患者生存率所亟需解决的关键问题。

2、g蛋白及其配体组成的gpcr超家族可激活pi3k、mapk及离子通道等多种二级信号通路，参与调控一系列的细胞生物学行为，在多种肿瘤的发生中发挥重要作用，gpcr及其下游信号通路的异常表达和活化已被证明是肿瘤恶性进程的重要标志。近年来许多研究对肺部自发性肿瘤的模型进行了探，但多为浸润性癌模型。腺病毒诱导的条件性肺部kras g12d的突变可以诱导早期肺癌非典型腺瘤样增生，但是常同时伴有乳头状腺瘤的存在，而在人体肿瘤常很少同时发生乳头状腺瘤，而且肿瘤的形成和发展程度受到腺病毒数量的影响。因此探索一种可以短时间内自发发生早期肺癌的动物模型，对深入研究肺癌从早期的非典型增生至如何逐步发展成浸润性癌的机制，从而寻找肺癌早期诊断的标志物及重要的治疗靶点非常关键。因此，亟需找到一种能够短期构建发生早期肺癌小鼠的方法，方便科研人员的对肺癌发生发展机制及药物开发靶点的研究探索。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供自发性早期肺癌小鼠模型及其构建方法和应用，所述自发性早期肺癌小鼠模型可短期内诱发早期肺癌发生，大大拓展了肺部肿瘤科研可利用模型的广度，也节约了科研工作的时间和成本。

2、本发明提供了一种自发性早期肺癌小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：将条件性过表达gngt1的小鼠与肺部特异性打靶的scgb1a1-cre工具鼠进行杂交，f1代中包含所述自发性早期肺癌小鼠模型。

3、优选的，所述条件性过表达gngt1的小鼠的构建方法，包括将包含过表达gngt1基因的表达框插入到c57bl/6j小鼠6号染色体的rosa26基因位点处，得所述条件性过表达gngt1的小鼠。

4、优选的，所述表达框的结构包括cag-loxp-stop-loxp-gngt1-wpre-pa。

5、优选的，肺部特异性打靶的scgb1a1-cre工具鼠的构建方法，包括在scgb1a1基因终止密码子位点后定点敲入ires-cre表达框。

6、优选的，所述杂交，包括以条件性过表达gngt1的小鼠为母本，以肺部特异性打靶的scgb1a1-cre工具鼠为父本。

7、优选的，所述杂交后，还包括对杂交后f1代进行筛选，筛选lsl-gngt1和scgb1a1-ires-cre双杂合基因型小鼠；

8、所述lsl-gngt1杂合，包括利用核苷酸序列如seq id no.10和seq id no.11所示的引物对，以及seq id no.12和seq id no.13所示的引物对均能扩增出条带；

9、所述scgb1a1-ires-cre杂合，包括利用核苷酸序列如seq id no.18和seq idno.19所示的引物对，以及seq id no.20和seq id no.21所示的引物对均能扩增出条带。

10、优选的，所述自发性早期肺癌小鼠模型产生肺部上皮非典型增生的时间小于30d。

11、本发明还提供利用上述构建方法构建得到的自发性早期肺癌小鼠模型在以下任一用途中的应用；

12、(1)研究肺癌发生和发展过程；

13、(2)研究肺癌致病机理；

14、(3)制备肺癌的早期检测和/或诊断工具；

15、(4)研制针对肺癌的药物；

16、(5)筛选对肺癌有效的药物。

17、有益效果：本发明提供了一种自发性早期肺癌小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：将条件性过表达gngt1的小鼠与肺部特异性打靶的scgb1a1-cre工具鼠进行杂交，f1代中包含所述自发性早期肺癌小鼠模型。本发明在肺部特异性过表达gngt1的早期肺癌小鼠模型，经实验表明能够在较短时间内成功构建早期肺癌模型，既能大大加快科研人员的研究进展，节省时间成本，也拓展了肺肿瘤研究的可用模型范围。本发明提供的自发性早期肺癌小鼠模型重复性高、可控性好，是推动肺癌研究进展及最终向临床转化的重要桥梁。

技术特征：

1.一种自发性早期肺癌小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将条件性过表达gngt1的小鼠与肺部特异性打靶的scgb1a1-cre工具鼠进行杂交，f1代中包含所述自发性早期肺癌小鼠模型。

2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述条件性过表达gngt1的小鼠的构建方法，包括将包含过表达gngt1基因的表达框插入到c57bl/6j小鼠6号染色体的rosa26基因位点处，得所述条件性过表达gngt1的小鼠。

3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，所述表达框的结构包括cag-loxp-stop-loxp-gngt1-wpre-pa。

4.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，肺部特异性打靶的scgb1a1-cre工具鼠的构建方法，包括在scgb1a1基因终止密码子位点后定点敲入ires-cre表达框。

5.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述杂交，包括以条件性过表达gngt1的小鼠为母本，以肺部特异性打靶的scgb1a1-cre工具鼠为父本。

6.根据权利要求1或5所述构建方法，其特征在于，所述杂交后，还包括对杂交后f1代进行筛选，筛选lsl-gngt1和scgb1a1-ires-cre双杂合基因型小鼠；

7.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，所述自发性早期肺癌小鼠模型产生肺部上皮非典型增生的时间小于30d。

8.利用权利要求1～7任一项所述构建方法构建得到的自发性早期肺癌小鼠模型在以下任一用途中的应用；

技术总结
本发明公开了自发性早期肺癌小鼠模型及其构建方法和应用，属于动物模型构建技术领域。本发明将条件性过表达GNGT1的小鼠与肺部特异性打靶的Scgb1a1‑Cre工具鼠进行杂交，F<subgt;1</subgt;代中包含所述自发性早期肺癌小鼠模型。本发明在肺部特异性过表达GNGT1的早期肺癌小鼠模型，能够在较短时间内成功构建早期肺癌模型，既能大大加快科研人员的研究进展，节省时间成本，也拓展了肺肿瘤研究的可用模型范围。本发明提供的自发性早期肺癌小鼠模型重复性高、可控性好，是推动肺癌研究进展及最终向临床转化的重要桥梁。

技术研发人员：符达,蒋庚西,范琳琳,马雨水
受保护的技术使用者：药源基石生物科技（上海）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15