一种食源性颗粒物加速AD发病模型的建立方法

本发明属于生物学，具体涉及一种食源性颗粒物加速ad发病模型的建立方法。

背景技术：

1、阿尔茨海默病(alzheimer’s disease，ad)，又称作老年痴呆症，是一种起隐匿的神经退行性疾病，伴有认知和记忆功能障碍，主要发生在老年人，同时其发病率随年龄增加而增加。由于各种环境影响下ad的发病正在逐渐年轻化，早发型ad越来越常见。阿尔茨海默病主要病理特征包括神经元外β-淀粉样蛋白的异常沉积形成的老年斑，以及神经元内tau蛋白异常磷酸化形成的神经元纤维缠结，此外还包括神经元不同程度凋亡或丢失以及胶质细胞增生和肥大。其中，β淀粉样蛋白是β-和γ-分泌酶切割淀粉样前体蛋白(app)后形成的一系列蛋白肽，其被认为与阿尔茨海默症的发病过程相关。大脑中出现β-淀粉样蛋白斑块，即细胞外的蛋白质沉积物，是阿尔茨海默症的一项主要标志。

2、为了进一步研究阿尔茨海默病。病理特征、发病进程、发生机制，研究食源性颗粒物经口摄入对ad发病进程的影响，建立一种食源性颗粒物加速ad发病模型尤为必要。现有技术中，加速ad发病模型主要包括：(1)疾病加速模型，分为高血压、高血脂、糖尿病、肥胖和心脑血管疾病；(2)环境加速模型，分为空气污染、农药、二手烟；(3)应急加速模型，分为精神刺激和创伤。

3、阿尔茨海默病逐渐年轻化与塑料制品的过度滥用可能存在一定的关系。经口摄入为塑料主要进入人体方式，本领域需要一种全新的食源性颗粒物加速阿尔茨海默病的模型，以期为更好研究食源性颗粒物加速阿尔茨海默病发病机制和相关干预药物的研发提供参考。进一步的，现有技术中主要通过对小鼠进行基因突变或对小鼠进行药物处理，如在cn111936628a中，通过突变k670、m671、i716和e693氨基酸位点实现ad模型的构建，又如在cn114561428a中，利用嵌合小鼠/人淀粉样蛋白前体蛋白以及突变的人psen1基因，并进行hepcidin基因全身性敲除，构建appswe/ps1de9+hamp-/-(+)三转基因动物模型；在cn110882252a中，通过对狨猴腹腔注射硫胺素拮抗剂构建ad模型。以上的方法构建小鼠的实验周期最短也要达到1个月，甚至更长。现有技术中暂无一种快速构建ad模型或加速ad发病模型构建的方法。

技术实现思路

1、[技术问题]

2、现有技术中的ad模型建立方法通常需要较长的时间，需要一种加速ad模型发病的方法；食源性污染物对ad的影响机制仍处于研究初始阶段，还未有明确的食源性污染物引起ad的动物模型。

3、[技术方案]

4、本发明提供的一种食源性颗粒物加速ad发病模型的建立方法，填补了食源性污染物对ad发病影响的空白，增加了对阿尔茨海默病发病机制的探索。

5、本发明提供一种加速ad发病模型的建立方法，所述方法为使动物接触微塑料，所述动物为非人动物。

6、在一种实施方式中，所述接触为通过灌胃或滴鼻给药。

7、在一种实施方式中，所述非人动物为啮齿动物。

8、在一种实施方式中，所述啮齿动物包括小鼠、大鼠。

9、在一种实施方式中，所述小鼠为转基因app/ps1小鼠。

10、在一种实施方式中，所述小鼠为雄性小鼠。

11、在一种实施方式中，所述小鼠为6～8月龄小鼠。

12、在一种实施方式中，所述小鼠为6月龄雄性转基因app/ps1小鼠。

13、在一种实施方式中，所述微塑料选自聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚酰胺、醋酸纤维素(ca)、聚碳酸酯(pc)、聚氯乙烯(pvc)或聚对苯二甲酸乙二醇酯(pet)中的一种或多种。

14、在一种实施方式中，所述微塑料的直径小于5mm。

15、在一种实施方式中，所述微塑料的直径为2μm。

16、在一种实施方式中，给药剂量为为5～15ml/kg体重，给药浓度1～10mg/ml。

17、在一种实施方式中，给药剂量为为10ml/kg体重，给药浓度5mg/ml。

18、在一种实施方式中，给药频率为每两天给药一次。

19、在一种实施方式中，给药周期不少于2周。

20、所述构建方法还包括模型鉴定，具体为认知行为学检测、小胶质细胞、星形胶质细胞激活和β淀粉样蛋白沉积检测。

21、本发明还提供了所述方法在阿尔茨海默病机制研究中的应用。

22、[有益效果]

23、本发明采用2μm的聚苯乙烯通过灌胃的方式，逐步诱导和加速ad小鼠重要脑区(皮层、海马区)病变，更好地模拟食源性颗粒物对于ad病程加速的影响。经过本发明的实验发现，模型组ad小鼠morris水迷宫、y迷宫、新物体识别和旷场实验数据均对照组ad小鼠差，说明模型组ad小鼠出现了更严重的学习记忆障碍。同时，模型组ad小鼠β淀粉样蛋白沉积、小胶质细胞和星形胶质细胞激活情况均比对照组ad小鼠多，说明模型组ad小鼠发生了更严重的ad病理损伤。提供的方法加速且加重了ad发病，为以后研究食源性颗粒物对ad发病影响和相关药物干预提供更有针对性的理想模型。

技术特征：

1.一种加速ad发病模型的构建方法，其特征在于，所述方法为使啮齿动物接触微塑料。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接触为通过灌胃或滴鼻给药。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述啮齿动物为转基因app/ps1小鼠。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述小鼠为6～8月龄小鼠。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微塑料选自聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚酰胺、醋酸纤维素、聚碳酸酯、聚氯乙烯或聚对苯二甲酸乙二醇酯中的一种或多种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述微塑料的直径小于5mm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述给药的剂量为为5～15ml/kg体重，所述给药的浓度1～10mg/ml。

8.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，所述给药的频率为每两天给药一次。

9.根据权利要求1或8所述的方法，其特征在于，所述给药的周期不少于2周。

10.权利要求1～9任一所述方法在阿尔茨海默病机制研究中的应用。

技术总结
本发明公开了一种食源性颗粒物加速AD发病模型的建立方法，属于生物学技术领域。动物模型建立过程耗时2周；动物模型建立期间自由取食饮水。本发明以食品常见的2μm直径微颗粒作为食源性颗粒物，通过将食源性颗粒物经过灌胃的方式进入AD小鼠体内，通过食源性颗粒物积累作用，逐步诱导AD小鼠脑部记忆神经元区(皮层，海马区)病变加重，学习记忆能力加速下降，成功建立稳定AD小鼠加速发病模型。可以很好的通过此模型研究食源性污染对阿尔茨海默病发病的影响。

技术研发人员：赵炜疆,刘冲,道吉吉,李倩,张伟,申延琴,崔春,乔晨萌,乔新宇
受保护的技术使用者：江南大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/22