一种间充质干细胞保护运输液及其制备方法和应用与流程

本发明属于生物，具体涉及一种间充质干细胞保护运输液及其制备方法和应用。

背景技术：

1、随着细胞生物学和再生医学的发展，细胞在科研和临床上的应用越来越广泛，如免疫细胞nk等、干细胞msc等在临床上都显示出极好的应用前景。间充质干细胞(mesenchymal stem cells，mscs)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞，在细胞治疗和再生医学领域具有巨大的应用潜力。细胞在制备出来以后往往不能立即应用，这就需要有合适的保存条件先把细胞保存起来，以确保细胞的质量活性等不受影响。

2、间充质干细胞药物工艺中虽具备冻存技术与冻存保护液产品，但临床使用时，需对细胞产品复苏后，在洁净条件下进行再次清洗、离心、重悬制剂，后才能临床进行静脉输注使用。由于目前间充质干细胞药物工艺要求在临床使用端前设洁净控制操作，不仅增大了间充质干细胞药物被污染的可能性，还增大了批次制剂质量偏差风险控制成本与难度，且在临床使用前的有效期限短，保存条件苛刻。另外，冷冻保护剂有一定的细胞毒性作用，可能导致细胞膜损伤，在一定条件下可以引起膜融合，抑制酶的活性，如过氧化氢酶和过氧化物酶。

3、并且在通常情况下，mscs在临床移植治疗中，需要将输注的细胞保存在保存液(如0.9％氯化钠注射液)中一定时间，再输注于体内。目前临床常用的保存液有0.9％氯化钠注射液、5％葡萄糖注射液，1％人血白蛋白液等，但mscs在这些保存液中时间只能保存较短时间，否则细胞活性会下降，影响临床的治疗效果。

4、专利cn 108990966 a公开了一种脐带间充质干细胞运输保护液及其保护方法，该脐带间充质干细胞运输保护液，该保护液含有以体积百分比计的以下组份：复方氨基酸原液、5％的葡萄糖原液、生理盐水原液、1％的维生素c原液及0.1g/ml的edta二钠原液组成，脐带间充质干细胞以重悬方式调整加入到所述脐带间充质干细胞运输保护液中，运输保护液中人脐带间充质干细胞的浓度为2×105-8×105个/ml。该发明的优点是稳定性高，便于保存和运输，能保证细胞的活力。

5、专利cn 108849857 a公开了一种脐带间充质干细胞的运输保护液，按体积百分计由1％-3％肝素钠溶液、1％-3％硫酸链霉素溶液和80％-96％dmem培养基水溶液、1％-2％大株红景天注射液和1％-2％香丹注射液组成。该发明对不同组分的运输保护液对相同来源的脐带间充质干细胞进行保存试验和抗凝血实验，在相同的时间处理后统计各处理脐带间充质干细胞的存活率，结果显示，该发明的脐带间充质干细胞运输保护液保证较高的细胞活率，大株红景天注射液和香丹注射液组成，配伍使用保证干细胞抗凝血作用同时，降低了肝素钠的用量，减少由肝素钠带来的副作用，提高了安全性。

6、间充质干细胞作为最安全的干细胞之一，具有广泛的应用价值，为了避免存活率降低，导致临床应用受限，还需要寻找更安全高效的新型保护剂，进一步延长间充质干细胞的体外保存期限。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种间充质干细胞保护液，所述的保护液能够延长间充质干细胞的体外保存期限，避免了使用冷冻保护剂对细胞的伤害和毒性。

2、一方面，本发明提供了一种间充质干细胞保护液，所述的间充质干细胞保护液的组分如下：hbss缓冲液，海藻糖溶液，人ab血清，依达拉奉，三甲氧苄嗪和葡萄糖注射液。

3、具体地，所述的组分的体积比为：hbss缓冲液：海藻糖溶液：人ab血清：依达拉奉：三甲氧苄嗪：葡萄糖注射液＝10-13:2-3:1-2:1-2:1-2:2-3；所述的海藻糖溶液的浓度为40-60wt％；所述的依达拉奉浓度为0.2-0.8wt％；所述的三甲氧苄嗪浓度为0.2-0.8wt％；所述的葡萄糖注射液浓度为2-8wt％。

4、优选地，所述的组分的体积比为：hbss缓冲液：海藻糖溶液：人ab血清：依达拉奉：三甲氧苄嗪：葡萄糖注射液＝13:2:1:1:1:2；所述的海藻糖溶液的浓度为50wt％；所述的依达拉奉浓度为0.5wt％；所述的三甲氧苄嗪浓度为0.5wt％；所述的葡萄糖注射液浓度为5wt％。

5、具体地，所述的间充质干细胞保护液为间充质干细胞的重悬液。

6、进一步具体地，所述的间充质干细胞的密度可以是1-5×107个/ml，如1×107个/ml、2×107个/ml、3×107个/ml、4×107个/ml、5×107个/ml等，该数值范围内的其他点值均可选择。

7、进一步具体地，所述的间充质干细胞保护液的工作温度为低温。

8、优选地，所述的间充质干细胞保护液的工作温度可以是2-10℃、2-8℃、2-6℃或2-4℃。

9、进一步优选地，所述的间充质干细胞保护液的工作温度为4℃。

10、又一方面，本发明提供了一种间充质干细胞的运输保护方法，所述的运输保护方法包括以下步骤：

11、(1)将制备好的间充质干细胞加入前述的间充质干细胞保护液重悬，制备得到细胞悬液；

12、(2)将步骤(1)获得的细胞悬液置低温下进行运输。

13、具体地，步骤(1)所述的细胞悬液的浓度为1-5×107个/ml，如1×107个/ml、2×107个/ml、3×107个/ml、4×107个/ml、5×107个/ml等，该数值范围内的其他点值均可选择。

14、优选地，步骤(2)所述的温度可以是2-10℃、2-8℃、2-6℃或2-4℃。

15、进一步优选地，步骤(2)所述的温度为4℃。

16、又一方面，本发明提供了前述的间充质干细胞保护液在干细胞运输中的应用。

17、具体地，所述的干细胞包括但不限于：造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞、人类胚胎干细胞或诱导多能干细胞中的一种或多种。

18、优选地，所述的干细胞为间充质干细胞。

19、又一方面，本发明提供了前述的间充质干细胞保护液在干细胞保存中的应用。

20、具体地，所述的干细胞包括但不限于：造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞、人类胚胎干细胞或诱导多能干细胞中的一种或多种

21、优选地，所述的干细胞为间充质干细胞。

22、本发明所取得的技术效果：

23、(1)本发明的保存液能够有限延长间充质干细胞的存活率，延长天数可达10天。

24、(2)本发明的保存液对间充质干细胞的表型无影响。

25、(3)避免了冷冻保护剂对间充质干细胞的伤害。

技术特征：

1.一种间充质干细胞保护液，其特征在于，所述的间充质干细胞保护液的组分如下：hbss缓冲液，海藻糖溶液，人ab血清，依达拉奉，三甲氧苄嗪和葡萄糖注射液。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞保护液，其特征在于，所述的组分的体积比为：hbss缓冲液：海藻糖溶液：人ab血清：依达拉奉：三甲氧苄嗪：葡萄糖注射液＝10-13:2-3:1-2:1-2:1-2:2-3；所述的海藻糖溶液的浓度为40-60wt％；所述的依达拉奉浓度为0.2-0.8wt％；所述的三甲氧苄嗪浓度为0.2-0.8wt％；所述的葡萄糖注射液浓度为2-8wt％。

3.根据权利要求2所述的间充质干细胞保护液，其特征在于，所述的组分的体积比为：hbss缓冲液：海藻糖溶液：人ab血清：依达拉奉：三甲氧苄嗪：葡萄糖注射液＝13:2:1:1:1:2；所述的海藻糖溶液的浓度为50wt％；所述的依达拉奉浓度为0.5wt％；所述的三甲氧苄嗪浓度为0.5wt％；所述的葡萄糖注射液浓度为5wt％。

4.一种间充质干细胞的运输保护方法，其特征在于，所述的运输保护方法包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的运输保护方法，其特征在于，步骤(1)所述的细胞悬液的浓度为1-5×107个/ml。

6.根据权利要求4所述的运输保护方法，其特征在于，步骤(2)所述的温度为2-10℃。

7.根据权利要求6所述的运输保护方法，其特征在于，步骤(2)所述的温度为4℃。

8.权利要求1-3任一项所述的间充质干细胞保护液在干细胞运输中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的干细胞为造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞、人类胚胎干细胞或诱导多能干细胞中的一种或多种。

10.权利要求1-3任一项所述的间充质干细胞保护液在干细胞保存中的应用。

技术总结
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种间充质干细胞保护运输液及其制备方法和应用。所述的保护液的配方为：HBSS缓冲液，海藻糖溶液，人AB血清，依达拉奉，三甲氧苄嗪和葡萄糖注射液。该保护液能够有效延长间充质干细胞的体外保存时间，时间可长达10天，间接降低了成本；该保护液配制方法简单、降低了污染概率，避免了冷冻保护剂对细胞的伤害。

技术研发人员：胡向兵,姬云
受保护的技术使用者：苏州科为康生物医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/7/25