一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法和药物筛选方法及应用

本公开涉及生物，具体地，涉及一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法、该方法构建的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型、药物筛选方法及应用。

背景技术：

1、膝骨关节炎（knee osteoarthritis，koa）是一种慢性退行性疾病，是最常见的关节炎类型。koa的主要病理特征是关节软骨退变、软骨下骨硬化、滑膜炎症等，常表现为膝关节疼痛、畸形、肌肉无力、功能障碍等，致残率达53%。从中医角度讲，koa归属于“痹症”范畴，依据病因病机，多将koa分为肝肾亏虚、湿热痹阻、气滞血瘀、寒湿痹阻、气血虚弱5个证型，其中，仅肝肾亏虚证（liver-kidney deficiency，lkd）即占总患病数的40.4%，远超第二位的湿热痹阻证（17.9%），是该病的核心证候。

2、高血压（hypertension）是一种以动脉血压持续升高为主要表现的心脑血管疾病，诊断标准为收缩压大于≥140 mmhg或舒张压≥90 mmhg。据统计，70%的老年人患有高血压。高血压在中医中属于“眩晕”、“头痛”等范畴，分为肝肾亏虚、气血两虚、阴阳两虚、肝火上炎、痰浊上蒙、瘀血阻窍6个证型，其中，老年患者亦以肝肾亏虚为其临床最常见的核心证候，70岁及以上患者占总患病数的21.7%，且随着年龄增长，肝肾亏虚证呈上升趋势，80岁及以上患者占总患病数的26.2%。

3、临床研究表明，膝骨关节炎患者常伴随高血压并发症，两者的共病率为84.5%。西医认为两病有年龄、肥胖、炎症、激素等共同致病因素，中医认为老年人素体虚弱，多肝肾亏虚，筋骨失养，导致软骨的退行性病变；同时，肝风内动、肾精亏损，引起虚火上炎，易感高血压病眩晕症，即两病均以肝肾亏虚为本。但是，目前尚未见膝骨关节炎合并高血压动物模型的报道，更未见以肝肾亏虚型结合上述两种病症的模型。因此，亟需一种构建一种肝肾亏虚型膝骨关节炎合并高血压动物模型。

技术实现思路

1、本公开的目的是提供一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法、该方法构建的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型、药物筛选方法及应用，该模型的共病和证候表征均与临床观察结果相一致，能够为肝肾亏虚型膝骨关节炎与高血压共病的创新药物研发、上市品种再评价和作用机制研究提供可靠的实验载体。

2、为了实现上述目的，本公开第一方面提供一种膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法，所述方法包括如下步骤：

3、s1、使自发性高血压大鼠的左后肢和/或右后肢的前交叉韧带断离，若前交叉韧带断离后的大鼠与膝骨关节炎假手术合并高血压组的大鼠相比，膝骨关节炎指标的差异具有统计学意义，则得到膝骨关节炎结合高血压病症的大鼠；

4、s2、向膝骨关节炎结合高血压病症的大鼠的患侧肢肌肉内注射氢化可的松注射液以进行肝肾亏虚证诱导，注射剂量为每天5-100mg/kg，连续注射5-30天，若肝肾亏虚证诱导的大鼠与膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的大鼠相比，肝肾亏虚证指标的差异具有统计学意义，则得到肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型。

5、可选地，所述自发性高血压大鼠为5-20周龄、160-200g的spf级自发性高血压雄性大鼠。

6、可选地，所述自发性高血压大鼠的收缩压为160-180mmhg，舒张压为120-140mmhg，平均血压为140-160mmhg，心率为380-420bmp。

7、可选地，所述膝骨关节炎指标包括：tnf-α含量、il-1β含量、患侧肢足底机械痛、双后肢负重差、患侧肢关节肿胀度、患侧肢摆动时间、患侧肢摆动速度、患侧肢步幅、患侧肢站立时间、患侧肢最大接触面积、患侧肢足印面积、患侧肢与健侧肢足印面积比、患侧肢最大强度、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数和骨小梁分离度。

8、可选地，所述注射剂量为每天25mg/kg，连续注射15天。

9、可选地，所述肝肾亏虚证的指标包括：tsh含量、acth含量、cort含量、t含量、肾脏指数、脾脏指数和胸腺指数。

10、本公开第二方面第一方面所述的构建方法构建的动物模型的药物筛选方法，包括以下步骤：向动物模型的大鼠给予候选药物，并对给予药物的大鼠进行药效检测和比较；其中，所述动物模型包括：膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型和/或肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型。

11、本公开第三方面提供第一方面所述的构建方法构建的动物模型在筛选治疗或改善肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症药物的动物模型方面的应用。

12、本公开第四方面提供第一方面所述的构建方法构建的动物模型在筛选治疗或改善肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的药物方面的应用。

13、本公开第五方面提供第一方面所述的构建方法构建的动物模型在非诊断或治疗目的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的发病机理的研究和药效评价方面的应用。

14、通过上述技术方案，本公开提供一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法、该方法构建的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型及药物筛选方法，该模型的共病和证候表征均与临床观察结果相一致，能够为肝肾亏虚型膝骨关节炎与高血压共病的创新药物研发、上市品种再评价和作用机制研究提供可靠的实验载体。

15、本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

技术特征：

1.一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其中，所述自发性高血压大鼠为5-20周龄、160-200g的spf级自发性高血压雄性大鼠。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其中，所述自发性高血压大鼠的收缩压为160-180mmhg，舒张压为120-140mmhg，平均血压为140-160mmhg，心率为380-450bmp。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其中，所述膝骨关节炎指标包括：tnf-α含量、il-1β含量、患侧肢足底机械痛、双后肢负重差、患侧肢关节肿胀度、患侧肢摆动时间、患侧肢摆动速度、患侧肢步幅、患侧肢站立时间、患侧肢最大接触面积、患侧肢足印面积、患侧肢与健侧肢足印面积比、患侧肢最大强度、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数和骨小梁分离度。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其中，所述注射剂量为每天25mg/kg，连续注射15天。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其中，所述肝肾亏虚证的指标包括：tsh含量、acth含量、cort含量、t含量、肾脏指数、脾脏指数和胸腺指数。

7.权利要求1-6中任意一项所述的构建方法构建的动物模型的药物筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

8.权利要求1-6中任意一项所述的构建方法构建的动物模型在筛选治疗或改善肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症药物的动物模型方面的应用。

9.权利要求1-6中任意一项所述的构建方法构建的动物模型在筛选治疗或改善肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的药物方面的应用。

10.权利要求1-6中任意一项所述的构建方法构建的动物模型在非诊断或治疗目的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的发病机理的研究和药效评价方面的应用。

技术总结
本公开涉及一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法和药物筛选方法及应用。所述方法包括如下步骤：S1、使自发性高血压大鼠的左后肢和/或右后肢的前交叉韧带断离，得到膝骨关节炎结合高血压病症的大鼠；S2、向膝骨关节炎结合高血压病症的大鼠的患侧肢肌肉内注射氢化可的松注射液以进行肝肾亏虚证诱导，注射剂量为每天5‑100mg/kg，连续注射5‑30天，得到肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型。该模型的共病和证候表征均与临床观察结果相一致，能够为肝肾亏虚型膝骨关节炎与高血压共病的创新药物研发、上市品种再评价和作用机制研究提供可靠的实验载体。

技术研发人员：张彦琼,马兆臣,林娜,刘毓东,胥明珠,张楚
受保护的技术使用者：中国中医科学院中药研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/5/19