一种野蕉胚的再生方法

本发明属农业生物，涉及一种野蕉繁育方法，具体是一种以野蕉种子胚作为外植体进行组织培养的再生方法。

背景技术：

1、野蕉(musa balbisiana colla)是芭蕉科芭蕉属，高大草本植物，产于中国云南西部、广西、广东，亚洲南部、东南部亦有分布。野蕉是许多香蕉品种两个主要祖先基因来源之一，其野生基因型(bb)对枯萎病及病虫害具有高度抗性，因此野蕉种质资源是现代生物技术育种的重要宝藏，其中包括抗性基因的分离克隆、基因转化和原生质体融合等技术的应用。野蕉为解决枯萎病及病虫害并生产出具有优良农艺性能的香蕉作物提供了重要基因和材料资源。因此，野蕉资源的系统考察、收集、鉴定、保护和利用的意义重大。

2、自然条件下，野蕉的常规繁殖方式为幼芽及地下茎繁殖，但其繁殖速度慢、周期长，易受多种因素限制。由于环境和人为多种因素，目前野蕉植株的数量正在锐减，该物种的野生资源极有可能变为濒危植物，采用人工干预手段繁育野蕉植株已成为保护野蕉资源的重要途径之一。有研究者利用组培技术通过将80％成熟度的野蕉种子胚经100mg/l的zt处理24h后，培养70d得到不定芽，但其萌发率仅为34.33％，萌发率较低并且没有进行植株再生的相关实验。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种野蕉胚的再生方法，以野蕉种子胚为外植体进行组织培养，诱导萌发直接分化不定芽，经过不定芽增殖、生根、移栽等过程，可在短时间内获得性状一致的组培苗，省去愈伤组织这一阶段，更加高效，为后续的增殖分化、提高分化率奠定基础。

2、本发明所采用的技术方案：

3、一种野蕉胚的再生方法，其步骤如下：

4、1.外植体的消毒与取材：取抽蕾坐果后80～100天的新鲜野蕉果实，消毒灭菌后于无菌条件下取出种子胚作为外植体。

5、2.胚萌发诱导：将获取的无菌外植体按照种子胚正常生长发育的方向垂直放至诱导培养基中进行前期不定芽萌发诱导培养，培养7～10d，培养条件：温度为25～27℃，在黑暗中进行培养；所述诱导培养基：改良ms培养基+6ba 15～20mg/l+iaa 175～200μg/l+vc10～15mg/l+蔗糖30g/l+gelrite 3g/l，ph值为5.8。

6、3.不定芽分化和增殖：将经过前期诱导的外植体转入分化与增殖培养基中进行培养，培养条件：温度为24～26℃，光照强度为1000～2000lx，光照时间为10～12h/d；培养30d后获得大量的丛生芽，更换新的分化与增殖培养基继续增殖培养；所述分化与增殖培养基：改良ms培养基+6ba 1.0～3.0mg/l+naa 0.05～0.2mg/l+蔗糖30g/l+卡拉胶7g/l，ph值为5.8。

7、4.生根培养：待不定芽生长至2～3cm时，将不定芽丛进行单株分离，接种到生根培养基上进行生根培养，培养条件：温度为24～26℃，光照强度为1500～2500lx，光照时间为10～12h/d，培养30d后形成良好根系，获得完整植株；所述生根培养基：改良white培养基+naa 0.1～1.0mg/l+蔗糖30g/l+卡拉胶6.5g/l，ph为5.8。

8、5.炼苗移栽：将生根苗移至室外炼苗7～10d后取出，洗净小苗根部的培养基，并在0.1％的高锰酸钾溶液中进行漂洗、消毒后，移至1：1的椰糠和腐殖土的基质中，覆盖薄膜保湿并遮荫65～75％，7d后逐渐去除保湿与遮荫物。

9、所述改良ms培养基是在ms培养基的基础上，调整微量元素的含量为原含量的2倍，并添加ch(水解酪蛋白)200mg/l，其它成分不变。

10、所述改良white培养基是在white培养基的基础上，调整无机盐的含量为原含量的0.6倍，并添加活性炭0.5g/l，其它成分不变。

11、优选地，所述野蕉种子胚的取出过程：先在流动自来水下清洗完整无破损的果皮，晾干后用75％酒精表面消毒5～8min，再用无菌水冲洗2～3次，备用；在无菌条件下，沿着果棱纵向切开果皮，完整分离种子，在种子顶端珠孔位置的侧下方纵向切开，得到无菌种子胚。

12、优选地，所述腐殖土是野蕉成林的林下腐殖土。

13、本发明以野蕉种子胚为外植体进行组织培养，采用先诱导后分化的两步诱导萌发的方式直接分化不定芽，省去愈伤组织这一阶段，具有较好的萌发分化效果和较高的分化率，为后续的增殖培养、生根培养奠定基础，所需原材料少，遗传性状稳定，变异小，具有分化速度快，操作简单、成本低、生长快速等特点，是一种较为高效的野蕉无菌快繁方法，为野蕉的资源保护、生态恢复和发掘利用奠定基础。

技术特征：

1.一种野蕉胚的再生方法，其特征在于，其步骤如下：

2.根据权利要求1所述的再生方法，其特征在于：所述野蕉种子胚的取出过程：先在流动自来水下清洗完整无破损的果皮，晾干后用75％酒精表面消毒5～8min，再用无菌水冲洗2～3次，备用；在无菌条件下，沿着果棱纵向切开果皮，完整分离种子，在种子顶端珠孔位置的侧下方纵向切开，得到无菌种子胚。

3.根据权利要求1所述的再生方法，其特征在于：所述腐殖土是野蕉成林的林下腐殖土。

技术总结
本发明属农业生物技术领域，涉及一种野蕉胚的再生方法，包括外植体的消毒与取材、胚萌发诱导、不定芽分化和增殖、生根培养、炼苗移栽等步骤。本发明以抽蕾坐果后约80～100天左右的新鲜野蕉果实的种子胚为外植体进行组织培养，采用先诱导后分化的两步诱导萌发的方式不经过愈伤组织阶段便可高效分化不定芽，具有较好的萌发分化效果和较高的分化率，为后续的增殖培养、生根培养奠定基础，所需原材料少，遗传性状稳定，变异小，具有分化速度快，操作简单、成本低、生长快速等特点，是一种较为高效的野蕉无菌快繁方法，为野蕉的资源保护、生态恢复和发掘利用奠定基础。

技术研发人员：陈浪欣,李志英,徐立,符运柳,王小冰,荆永琳
受保护的技术使用者：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/5/16