一种百香果脱毒的方法

本发明涉及果木脱毒快繁，特别是涉及一种百香果脱毒的方法。

背景技术：

1、百香果(passion fruit)，学名鸡蛋果(passiflora edulia sims)，为西番莲科西番莲属植物，是热带、亚热带多年生常绿藤本浆果类果树。其生长迅速，从种到收只需几个月，投产早，收益快；且果实耐贮运，销路广，经济效益高。由于其独特的香味和口感，越来越受广大消费者的青睐。

2、在过去的几十年间，百香果的种植过程以扦插和嫁接等无性繁殖方式为主，导致茎秆中病毒病连年积累，百香果病毒病也随着种植范围的增加而迅速扩散。在实际生产中百香果病毒病发生频率高，造成减产甚至绝产。病毒病的不断积累会导致品种的退化、抗性减弱和产量下降，因此通过种苗脱毒技术生产健康百香果种苗，实现种植百香果产业的稳产、增产，是实现百香果产业健康发展的基石。

3、本发明通过茎尖+愈伤组织诱导+器官再生+在培养过程中添加抗病毒药剂相结合的方法能够更加简便，高效的实现百香果的脱毒工作。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明提供了一种百香果脱毒的方法，脱毒率高，为百香果的脱毒提供技术和方法支撑。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、本发明提供了一种百香果脱毒的方法，包括以下步骤：

4、1)将百香果的茎尖接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤诱导，得到愈伤组织；

5、所述愈伤组织诱导培养基为：ms+2,4-二氯苯氧乙酸2～6mg/l、1-萘乙酸0.1～0.3mg/l、寡壳糖2mg/l、蔗糖30g/l和琼脂3.5g/l；

6、2)将所述步骤1)得到的愈伤组织接种于芽分化诱导培养基中进行再生芽诱导，得到再生芽；

7、所述芽分化诱导培养基为：ms+6-苄氨基嘌呤0.5～1.2mg/l、噻苯隆0.5～1.5mg/l、激动素0.5～1.5mg/l、寡壳糖2mg/l、蔗糖30g/l和琼脂3.5g/l；

8、3)将所述步骤2)得到的再生芽接种于壮苗培养培养基中进行壮苗培养，实现百香果脱毒；

9、所述壮苗培养培养基为：ms+1-萘乙酸0.2mg/l、激动素0.5mg/l、寡壳糖2mg/l、蔗糖30g/l和琼脂3.5g/l。

10、优选的，所述步骤1)愈伤组织诱导培养基为：ms+2,4-二氯苯氧乙酸4mg/l、1-萘乙酸0.2mg/l、寡壳糖2mg/l、蔗糖30g/l和琼脂3.5g/l。

11、优选的，所述步骤2)芽分化诱导培养基为：ms+6-苄氨基嘌呤0.8mg/l、噻苯隆1mg/l、激动素1.5mg/l、寡壳糖2mg/l、蔗糖30g/l和琼脂3.5g/l。

12、优选的，所述步骤1)茎尖的长度为1.5～2.5mm。

13、优选的，所述步骤1)愈伤诱导的条件包括：先进行暗培养3d，后进行光照培养20d，所述光照培养条件为：温度为28±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为40μmol·m-2·s-1。

14、优选的，所述步骤2)再生芽诱导的条件包括：温度为28±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为40μmol·m-2·s-1，培养40d。

15、优选的，所述步骤3)壮苗培养的条件包括：温度为28±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为40μmol·m-2·s-1，培养40d。

16、优选的，所述步骤3)壮苗培养后，得到百香果苗，检测得到的百香果苗上的病毒；

17、当所述百香果苗带病毒时，重复步骤1)～3)1次。

18、优选的，所述病毒包括东亚西番莲病毒、黄瓜花叶病毒、夜来香花叶病毒和西番莲木质化病毒中的一种或多种。

19、优选的，所述百香果为黄果型百香果。

20、本发明的有益效果：

21、本发明提供了一种百香果脱毒的方法，从茎尖切除、茎尖愈伤组织诱导、愈伤组织芽分化诱导、壮苗培养及对阳性植株进行二次脱毒着手，探究其各个阶段适宜方法，完善并优化其脱毒技术体系，以期为百香果脱毒的高效化提供技术支撑。优选的茎尖愈伤组织诱导培养：以ms培养基为基础，通过有效激素及抗病毒药剂组合，切除的顶芽在培养基中培养23天，愈伤组织诱导率91.0％，所产生的愈伤组织大量表现为乳白色颗粒状，少量表现为黄色颗粒状；优选的愈伤组织芽分化培养：以ms培养基为基础，通过有效激素及抗病毒药剂组合，上述愈伤组织在光照下培养12天，开始明显有芽的分化，培养40天，芽苗高1.0～1.5cm，芽诱导率(能诱导出芽的愈伤组织个数/愈伤组织接种数)为74％，平均每个愈伤组织出芽6.44个；将再生芽分株转入壮苗培养基中进行光照培养40天，苗高4-5cm，叶片嫩绿，长势强；对每株苗进行病毒病检测，脱毒效率为69％(检测为阴性个体数量/总株数)；将上述过程称为一个脱毒周期。以第一次脱毒培养仍表现为阳性的个体为材料，切除茎尖进行第二次脱毒培养，脱毒效率可达95％。本方法通过茎尖+愈伤组织诱导+器官再生+在培养过程中添加抗病毒药剂(寡壳糖)相结合的方法最终在第二次脱毒培养后，脱毒效率即可达到95％，如果不添加寡壳糖则需要四次脱毒培养才能够达到这个效果。

技术特征：

1.一种百香果脱毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)愈伤组织诱导培养基为：ms+2,4-二氯苯氧乙酸4mg/l、1-萘乙酸0.2mg/l、寡壳糖2mg/l、蔗糖30g/l和琼脂3.5g/l。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)芽分化诱导培养基为：ms+6-苄氨基嘌呤0.8mg/l、噻苯隆1mg/l、激动素1.5mg/l、寡壳糖2mg/l、蔗糖30g/l和琼脂3.5g/l。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)茎尖的长度为1.5～2.5mm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)愈伤诱导的条件包括：先进行暗培养3d，后进行光照培养20d，所述光照培养条件为：温度为28±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为40μmol·m-2·s-1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)再生芽诱导的条件包括：温度为28±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为40μmol·m-2·s-1，培养40d。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)壮苗培养的条件包括：温度为28±3℃，光照时间为12h/d，光照强度为40μmol·m-2·s-1，培养40d。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)壮苗培养后，得到百香果苗，检测得到的百香果苗上的病毒；

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述病毒包括东亚西番莲病毒、黄瓜花叶病毒、夜来香花叶病毒和西番莲木质化病毒中的一种或多种。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述百香果为黄果型百香果。

技术总结
本发明涉及果木脱毒快繁技术领域，特别是涉及一种百香果脱毒的方法。包括：将百香果的茎尖接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤诱导，得到愈伤组织；将得到的愈伤组织接种于芽分化诱导培养基中进行再生芽诱导，得到再生芽；将得到的再生芽接种于壮苗培养培养基中进行壮苗培养，实现百香果脱毒。将上述步骤称为一个脱毒周期，脱毒效率为69％。将经过一次脱毒后检测仍为阳性的感病植株重新按照上述方法进行第二次脱毒培养，脱毒效率可达95％。

技术研发人员：苏江,冼康华,付传明,黄宁珍,何金祥,刘宝骏
受保护的技术使用者：广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/10/17