一种树鼩阿尔兹海默症造模方法与流程

本发明属于疾病动物模型构建，尤其涉及一种树鼩阿尔兹海默症造模方法。

背景技术：

1、阿尔兹海默症（alzheimer’s disease, ad）又称老年痴呆，是一种常见的多发性、进行性的神经系统退行性疾病，主要临床表现为渐进性记忆减退、认知功能障碍、行为异常和社交障碍，甚至丧失生活能力，患者发病10-20年内常因并发症而死亡。患病率随着年龄的升高呈显著增长趋势。这不仅使患者、患者家庭承受巨大的压力，也将对社会造成巨大的经济负担。因此寻求预防ad的方法、寻找 ad 新的治疗途径、研制新型治疗 ad 药物是十分必要和迫切的。

2、ad 病程隐匿、呈现进行性发展，一般在临床表现未被察觉之前，患者大脑就已经发生了多种潜移默化的病理生理变化。这些病理生理变化包括 app剪切产生的aβ毒性蛋白的异常积累形成淀粉样斑块，微管蛋白 tau 的过度磷酸化引发的大量神经原纤维缠结、脑葡萄糖代谢减少、小胶质细胞不受控制的激活，慢性氧化应激损伤以及神经毒素和炎症因子的分泌。但是具体的发病机制至今尚未研究清楚，主要有β淀粉样蛋白级联学说、tau 蛋白学说、胆碱能损伤学说、氧化应激/线粒体级联学说、兴奋性谷氨酸毒性学说和基因突变学说等。由于ad发病机制非常复杂，发病过程涉及的环节较多，目前尚缺乏疗效满意的治疗药物。为了探究ad的致病机制和潜在治疗药物，建立合适的动物模型是关键的一步。现有的ad动物模型有老化型、注入诱导型、转基因型、复合型，这四种模型均在ad发病机制和药物治疗研究中被广泛应用且各有优缺点。然而现有的ad动物模型造模时间较长、效率低下，严重影响了后续的研究进度，例如d-半乳糖复合ibo造模需要2个月以上的时间。因此开发与人类亲缘关系更近且耗时较短，又能有效模拟ad病理的动物模型具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供了一种树鼩阿尔兹海默症造模方法。

2、本发明的目的是这样实现的，一种树鼩阿尔兹海默症造模方法，其具体步骤如下：

3、（1）试剂配制：

4、microcystin-lr溶液：为浓度0.5μg/μl microcystin-lr的乙醇溶液；microcystin-lr是一种高效的蛋白质磷酸酶抑制剂，简称mc-lr，为微囊藻毒素或者微囊毒素，是一种市购产品，购置于mce公司；

5、鹅膏蕈氨酸溶液配置：无菌条件下，吸取200μl的无菌生理盐水加入含有1mg的鹅膏蕈氨酸小瓶中，反复吹打使其完全溶解，配置浓度为5μg/μl；

6、（2）用步骤（1）配置的microcystin-lr 溶液与鹅膏蕈氨酸溶液进行混合后给树鼩双侧meynert基底核各注射2μl，前述混合溶液是在无菌条件下，按照microcystin-lr: 鹅膏蕈氨酸溶液:无菌生理盐水=1:3:6进行稀释后获得；

7、（3）给药结束后，正常饲养2周完成阿尔兹海默症造模。

8、本发明的有益效果是：

9、本发明给予树鼩双侧meynert基底核分别注射mc-lr（0.1μg）+ibo溶液（3μg）的混合溶液，2周后可建立稳定的树鼩ad模型。给药3天后，树鼩出现ad行为表现，如：精神萎靡、活动量减少；2周后，树鼩大脑表现出aβ沉积、tau蛋白多个磷酸化位点表达水平升高等ad典型的病理表现。

技术特征：

1.一种树鼩阿尔兹海默症造模方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的树鼩阿尔兹海默症造模方法，其特征在于，双侧meynert基底核注射方法具体为：

3.根据权利要求1所述的树鼩阿尔兹海默症造模方法，其特征在于，所述的树鼩体质量为120-150g。

4.根据权利要求1所述的树鼩阿尔兹海默症造模方法，其特征在于，所述的树鼩的饲养温度为室温24±2℃、相对湿度50±5%、光/暗周期12h/12h。

技术总结
本发明公开了一种树鼩阿尔兹海默症造模方法，具体步骤为将浓度为0.5μg/μl Microcystin‑LR的乙醇溶液与鹅膏蕈氨酸溶液进行混合后给树鼩双侧Meynert基底核各注射2μl；给药结束后，正常饲养2周完成阿尔兹海默症造模。鹅膏蕈氨酸溶液为无菌条件下，吸取200μl的无菌生理盐水加入含有1mg的鹅膏蕈氨酸小瓶中，反复吹打使其完全溶解，配置浓度为5μg/μl的溶液；Microcystin‑LR溶液为市购产品。本发明给予树鼩双侧Meynert基底核分别注射MC‑LR（0.1μg）+IBO溶液（3μg）的混合溶液，2周后可建立稳定的树鼩AD模型。给药3天后，树鼩出现AD行为表现，如：精神萎靡、活动量减少；2周后，树鼩大脑表现出Aβ沉积、Tau蛋白多个磷酸化位点表达水平升高等AD典型的病理表现。

技术研发人员：贺永胜,李慧,陆志星,唐梅
受保护的技术使用者：云南洛宇生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2025/3/18