专利名称：暗纹东方豚的人工繁殖技术的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种特种鱼类的人工繁殖，特别是一种暗纹东方豚的人工繁殖技术。
暗纹东方豚(Fugu obseurus)隶属于豚形目豚科东方豚属，是一种江海洄游性鱼类，俗称“河豚”，肉鲜味美，中国、日本、朝鲜等国人们历来喜食。但格昴贵，市售价每公斤约1000-1200元人民币。此外，暗纹东方豚还有很高的综合利用价值，由其内脏提取的毒素价格高达5-7万美元/公斤，其艳丽的鱼皮亦是制革的上等原料。因此，河豚是一种具有较高开发价值的名、特、优、新水产品。
由于人类经济活动的影响，暗纹东方豚的自然资源剧减，而市场需求却有增无减。针对这一矛盾，暗纹东方豚的人工繁殖应运而生，但由于苗种的繁育技术不过关，苗种供给不足，严重制约了人工养殖的发展。暗纹东方豚是一种溯河性产卵鱼类，必须经过盐化、淡化两个过程，性腺才能发育成熟，它具有许多纯海水性或纯淡水性鱼类所不具有的独特的生理、生态及生物学特征，其繁殖生态条件较为苛刻，而前人对其有关生物、生态、生理、繁殖等特性知之甚少，因此，暗纹东方豚的人工繁殖是一个悬而未决的技术难题。1979年，江苏省淡水水产研究所贾长春等对具有相似属性的另一种河豚——弓斑东方豚(Fugu ocellatus)的人工繁殖作了初步研究，(水产科技情报，79-7)通过繁殖季节采捕天然河豚亲鱼进行激素催产、人工授精、室内孵化等措施人工繁殖，但效果不甚理想，人繁三率(催产率、受精率、孵化率)均很低。
本发明结合暗纹东方豚的繁殖生态学和组织细胞学等的研究，在充分掌握暗纹东方豚繁殖生态环境和性腺生长发育规率的基础上，利用鱼类繁殖是内在生理变化和外界环境协同作用的原理，通过加强亲鱼驯养与培育，模拟自然环境，激素调控等手段，促进亲鱼性腺的发育成熟与排放，并加强孵化期的管理与生态调控，以实现提高河豚人工繁殖的催产率、受精率和孵化率的目的。
本发明对人工繁殖的三个基本环节亲鱼的驯养与培育、催情产卵、孵化中的技术内容进行了科学的改进与创新，其特征是在充分掌握暗纹东方豚繁殖生态环境和性腺生长发育规律的基础上，模拟自然生态环境，利用激素调控，以实现促进亲鱼性腺的发育成熟与排卵，同时对孵化期加强生态管理，促进人工繁殖的催产率、受精率、孵化率的大幅提高，具体技术步骤为A.亲鱼的驯养与培育选择以下其一a.天然采捕亲鱼的驯养在3-5月季节，收购从天然水域直接采捕的河豚亲鱼、选择无病、无伤、体格健壮、性腺发育至IV期以上，腹部外观膨大，手感松软而有弹性，生殖孔发红的亲鱼，取雄鱼数量不少于雌鱼数量，运输至室内水泥池中驯养，池水面积30-100M2，水深50-100CM，溶氧6mg/L以上，光照500-1000Lux，微流水，日换水1-2次，先投喂动物性饵料，待亲鱼开口摄食后，再逐步投以混合饵料，每天投饵数次，同时向池水加水至0.8-1.5M，并每天向池中冲水数次；b.亲鱼的自行培育10月底-11月初，在沙砾底质池中，以盐度逐级递增方式模拟海水培育，每级3-5天，池水深1.5-2M，水温10-15℃，放养密度每亩60-100尾，每天投饵数次，来年2月初，再以盐度逐级递减方式过渡至淡水培育，并逐步升高池水温至16-26℃，投饵中加入维生素E，并不定期向池中冲水，以满足亲鱼性腺最后成熟发育的流水环境；B.催情产卵采用生理生态相结合的方法，对鱼体直接注射外源激素催情，使亲鱼性腺从IV期过渡至V期，并使之排卵、排精，时间在4月份，于催产池中进行，池水10-30M2，水深40-60CM，水温16-26℃，溶氧6mg/L以上，效应时间40-72小时，采用湿法或干法人工授精；C.孵化在孵化池中，水温16-26℃，溶氧6mg/L以上，光照500-1000Lux，将卵洒于粘卵板上挂置于孵化网箱中，将网箱置于孵化池中静水孵化或用孵化桶流水孵化，孵化时间6-8天，孵化过程中需采取防霉措施。
a中天然采捕的亲鱼雌鱼体重应选择600克以上，雄鱼体重400克以上，雌雄比例1∶1-2，采捕后用双层尼龙袋运输，每袋1-2尾，运输时间超过3小时的，中途应充氧换水，运输过程中防震，以防止性腺退化；若亲鱼在采捕或运输过程中受伤，每天用1PPm孔雀石绿药溶20-30分钟或1PPmKMnO4药溶5-10分钟，待亲鱼伤愈恢复后，再放入大池中驯养；b中模拟海水培育的盐度以2-5‰、7-10‰，15-20‰、30-33‰4级递增，来年再反向4级递减过渡至淡水培育。
B中外源催情激素为鲤鱼脑垂体(PG)、促黄体生成激素释放激素类似物(LRH-A)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)三种单独使用或两两混合使用，催情剂量雌鱼LRH-A80-180ug/kg或HCG2000-4000Iu/g，或2-10mg PG加50-150ug LRH-A/kg，或HCG500-1000ug加50-150ugLRH-A/kg，雄鱼剂量减半，注射方式为体腔或背部肌肉注射，注射次数1-3次，两次注射间隔时间12-24小时，人工授精后，将卵漂洗2-3次，即可送至孵化程序。
C中的防霉措施是用1PPm孔雀石绿泼洒，但胚胎发育敏感期及出膜前后忌用，孵化过程中应加强监控，每隔1-2小时，测水温，每天观察溶氧2-3次。
实施例3月中下旬，在常熟与镇江段收集亲鱼20组，因受捕捞工具限制，亲鱼大多有伤，鳍条发白损伤，雌鱼体重在600克以上，雄鱼体重400克以上。雌鱼腹部膨大，手感松软而有弹性，生殖孔闭锁或微张，选择前进行雌、雄鉴别，雌、雄比例1∶1。采用双尾尼龙袋充氧运输，运输时间5小时，中途换水充氧1次，下垫以塑料泡沫箱防震。亲鱼驯养在温室的水泥池进行，面积30m2，水深50-60cm，水温17-20℃，弱光。采用水泵沿池壁45°角冲水造成流水环境，同时，每天换水1/3，温室周围环境安静。因亲鱼有伤，每天用1PPm孔雀石绿药浴30分钟，一星期后，亲鱼体质恢复，逐渐投以螯虾肉、罗非鱼肉，诱导亲鱼开口吃食。亲鱼开口后，逐步投以鱼肉糜与鳗鱼饲料混合而成的饵料团，并加以促性腺发育物质维生素E等，同时加水至1.2m，催产前每天冲水1次，促进亲鱼性腺成熟。催情场所温室20m2的水泥池，水深60cm。4月15日至4月25日用鲤鱼脑垂体(PG)、促黄体释放激素类似物(LRH-A2)混合注射。雌鱼2-10mgPG加50-150ngLRH-A/kg，雄鱼剂量减半，体腔注射，分二次注射，间隔时间12小时，注射第二针后，随时检查卵的发育情况，接近产卵时间时，每隔2小时检查一次，用挖卵器挖取少许卵于显微镜检查，若卵核偏位，卵粒正规，卵色晶莹透明时，轻按腹部有卵粒流出时，即采卵、授精。采卵时，2人分别提出雌、雄鱼头部，使雌、雄鱼泄殖孔相对，右手自上而下，缓缓推挤，把精、卵挤入干燥的塘瓷盆内，用羽毛轻轻搅拌2-3分钟，漂洗3次。将卵洒于粘卵板上，孵化，共获受精卵36余万粒，受精率75％。孵化采用粘卵板静水孵化方式进行，共获出膜仔鱼约28万尾，孵化率78％。孵化设备由粘卵板和孵化网箱组成，粘卵板由50目的聚乙烯网布做成，将直径焊成矩形架，而后将网布缝上。受精卵粘于粘卵板后，将粘卵板挂置于50目网箱中孵化。用100目筛绢过滤后的东太湖水作为孵化用水，溶氧7mg/L以上，孵化温度18-20℃。除敏感期及出膜前后，用1PPm孔雀石绿泼洒防霉。光照条件500lux，孵化时间140-216小时，孵化过程中，每天检测溶氧、NH4-N、水温等，24小时跟踪观察胚胎发育。
本发明注意把握河豚人繁的各个环节，特别加强亲鱼的管理与培育，通过筛选优质亲鱼，强化培育亲鱼，人工模拟自然生态条件和注射外源激素，严格掌握激素注射剂量，使影响河豚鱼性腺发育的内外条件协同作用，共同促使精、卵的成熟与排放，提高精、卵质量，从而提高亲鱼的催产率、受精率，同时通过对孵化用水的生态调控，使用防霉药物，改进孵化方式，加强生态管理，大大提高了鱼苗孵化率。本技术第一次实现了暗纹东方豚人工繁殖的成功，对暗纹东方豚人工繁养殖的发展具推动作用。与其它河豚人繁技术相比，不仅提高了人繁三率、催产率达90％以上，还第一次通过自行培育亲鱼，稳定了人繁三率，使河豚鱼的人工繁殖获得突破性进展。本发明技术亦适用于其它河豚鱼类，特别是同属江海洄游的弓斑东方豚。
权利要求
1.暗纹东方豚的人工繁殖技术，包括亲鱼的采取，驯养与培育、催情产卵、孵化等过程，其特征是在充分掌握暗纹东方豚繁殖生态环境和性腺生长发育规律的基础上，模拟自然生态环境，利用激素调控，以实现促进亲鱼性腺的发育成熟与排卵，同时对孵化期加强生态管理，促进人工繁殖的催产率、受精率、孵化率的大幅提高，具体技术步骤为A.亲鱼的驯养与培育选择以下其一a.天然采捕亲鱼的驯养在3-5月季节，收购从天然水域直接采捕的河豚亲鱼，选择无病、无伤，体格健壮、性腺发育至IV期以上，腹部外观膨大，手感松软而有弹性，生殖孔发红的亲鱼，取雄鱼数量不少于雌鱼数量，运输至室内水泥池中驯养，池水面积30-100M2，水深50-100CM，溶氧6mg/L以上，光照500-1000Lux，微流水，日换水1-2次，先投喂动物性饵料，待亲鱼开口摄食后，再逐步投以混合饵料，每天投饵数次，同时向池水加水至0.8-1.5M，并每天向池中冲水数次；b.亲鱼的自行培育10月底-11月初，在室内沙砾底质池中、以盐度逐级递增方式模拟海水培育，每级3-5天，池水深1.5-2M，水温10-15℃，放养密度每亩60-100尾，每天投饵数次，来年2月初，再以盐度逐级递减方式过渡至淡水培育，并逐步升高池水温至16-26℃，投饵中加入维生素E，并不定期向池中冲水，以满足亲鱼性腺最后成熟发育的流水环境；B.催情产卵采用生理生态相结合的方法，对鱼体直接注射外源激素催情，使亲鱼性腺从IV期过渡至V期，并使之排卵、排精，时间在4月份，于催产池中进行，池水10-30M2，水深40-60CM，水温16-26℃，溶氧6mg/L以上，效应时间40-72小时，采用湿法或干法人工授精；C.孵化在孵化池中，水温16-26℃，溶氧6mg/L以上，光照500-1000Lux，将卵洒于粘卵板上挂置于孵化网箱中，将网箱置于孵化池中静水孵化或用孵化桶流水孵化，孵化时间6-8天，孵化过程中需采取防霉措施。
2.根据权利要求1所述的暗纹东方豚人工繁殖技术，其特征是a中天然采捕的亲鱼雌鱼体重应选择600克以上，雄鱼体重400克以上，雌雄比例1∶1-2，采捕后用双层尼龙袋运输，每袋1-2尾，运输时间超过3小时的，中途应充氧换水，运输过程中防震，以防止性腺退化；若亲鱼在采捕或运输过程中受伤，每天用1PPm孔雀石绿药溶20-30分钟或1PPmKMnO4药溶5-10分钟，待亲鱼伤愈恢复后，再放入大池中驯养；b中模拟海水培育的盐度以2-5‰、7-10‰、15-20‰、30-33‰4级递增，来年再反向4级递减过渡至淡水培育。
3.根据权利要求1或2所述的暗纹东方豚人工繁殖技术，其特征是B中外源催情激素为鲤鱼脑垂体(PG)、促黄体生成激素释放激素类似物(LRH-A)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)三种单独使用或两两混合使用，催情剂量雌鱼LRH-A80-180ug/kg或HCG2000-4000Iu/g，或2-10mg PG加50-150ug LRH-A/kg，或HCG500-1000ug加50-150ugLRH-A/kg，雄鱼剂量减半，注射方式为体腔或背部肌肉注射，注射次数1-3次，两次注射间隔时间12-24小时，人工授精后，将卵漂洗2-3次，即可送至孵化程序。
4.根据权利要求3所述的暗纹东方豚人工繁殖技术，其特征是C中的防霉措施是用1PPm孔雀石绿泼洒，但胚胎发育敏感期及出膜前后忌用，孵化过程中应加强监控，每隔1-2小时，测水温，每天观察溶氧2-3次。
全文摘要
由于人类经济活动的影响,暗纹东方豚的自然资源剧减,而市场需求却有增无减。本发明结合暗纹东方豚的繁殖生态学和组织细胞学等的研究,在充分掌握暗纹东方豚繁殖生态环境和性腺生长发育规率的基础上,利用鱼类繁殖是内在生理变化和外界环境协同作用的原理,通过加强亲鱼驯养与培育,模拟自然环境,激素调控等手段,促进亲鱼性腺的发育成熟与排放,并加强孵化期的管理与生态调控,以实现提高河豚人工繁殖的催产率、受精率和孵化率。
文档编号A01K61/00GK1256069SQ98111600
公开日2000年6月14日 申请日期1998年12月9日 优先权日1998年12月9日
发明者陈亚芬, 刘正文, 陈源高 申请人:中国科学院南京地理与湖泊研究所