一种百合的组织培养快繁方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种百合的组织培养快繁方法。
【背景技术】
[0002]百合Ui7i_)是单子叶植物纲百合科百合属的多年生球根草本植物的总称，是中国传统名花，具有极高的观赏价值，深受广大群众的喜爱。百合属大约有100个种，目前注册的商用百合就有I万多个，主要分布于北半球寒带和温带的山区。除了具有较高的观赏价值外，还具有重要的食用和药用价值，其鳞茎具有消炎、止咳、镇定的功效。
[0003]植物组织培养在百合的快速繁殖、转基因、脱毒、种质资源保存及人工种子生产等方面具有极大的应用潜力。目前已成功建立了百合组织培养的多种方法，但由于存在基因特异性强的问题，一直缺乏高效、广谱的再生体系，而本发明具有简单、经济、易操作的特点，易进行推广应用。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种百合的组织培养快繁方法，本发明本发明以东方百合“西伯利亚”(LOriental hybrid Siberia)鳞片为外植体,通过不定芽诱导、继代培养、试管苗生根以及试管苗驯化移栽等阶段实现了百合的组织培养快速繁殖，进而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种百合的组织培养快繁方法，包括以下的工艺步骤:
(I)不定芽诱导:选取生长健壮饱满的百合鳞茎，用清水洗净，剥去外界I?3层鳞片，取中层和内层的鳞片，先在75%?80%的乙醇中浸泡10?30s，用无菌水冲洗3?5次，每次3?8min,然后用0.1%?0.5%的升萊溶液消毒5?1min,再用洗菌水冲洗3?5次，每次3?8min。用无菌滤纸吸干表面水珠后接种到诱导培养基上进行不定芽诱导。
[0006](2)不定芽芽增殖培养:将步骤(I)获得的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养7?14天，然后置于每天光照12?15小时，光照强度为1500?25001x，培养温度为25?28°C的条件下培养，25?30天转接一次。
[0007](3)生根培养:将步骤(I)或步骤(2)获得的茎长大于3cm的不定芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25?28°C条件下全暗培养7?14天，然后置于每天光照12?15小时，光照强度为2000?30001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根。
[0008](4)炼苗移栽:将具有完整健壮根(根长3 0.5cm)试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由珍珠岩和火碳泥(I:1)混合成的基质中并定植于大田中。
[0009]上述步骤(I)所述的诱导培养基为1/2MS+2?5mg/L 6-BA+0.1?lmg/L NAA+1?5mg/LGA3+2.5% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 琼脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH 值为 5.4 ?5.8ο
[0010]上述步骤(2)所述的增殖培养基为MS+0.5?3mg/L 6-BA+0.1?lmg/LNAA+2.5% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5% 琼脂 +0.05% ?0.1% 活性炭，pH 值为 5.4 ?5.8。
[0011]上述步骤(3)所述的生根培养基为:l/2MS+0.1?lmg/L NAA+1?2.0mg/L GGR(注:双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研究开发中心)+2.5%?3.5%蔗糖+0.35%?0.5%琼脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值为5.4?5.8。
[0012]与现有技术相比本发明的优点是:本发明通过组织培养技术手段在短时间内快速繁殖保持亲本原有优良性状的百合种苗。以东方百合“西伯利亚”(LOriental hybridSiberia)鳞片为外植体，通过不定芽诱导、继代培养、试管苗生根以及试管苗驯化移栽等阶段实现了百合的组织培养快速繁殖。从而在人工控制的条件实现百合种苗的快速繁殖，短时间内大量试管苗，促进百合的商业化进程。
【具体实施方式】
[0013]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0014]实施例1:
(I)不定芽诱导:选取生长健壮饱满的百合鳞茎，用清水洗净，剥去外界3层鳞片，取中层和内层的鳞片，先在75%的乙醇中浸泡10s，用无菌水冲洗5次，每次3min，然后用0.1%的升汞溶液消毒5min,再用洗菌水冲洗3次，每次3min。用无菌滤纸吸干表面水珠后接种到诱导培养基上进行不定芽诱导，诱导率达92.7%。所述的诱导培养基为l/2MS+2mg/L6-BA+0.lmg/L NAA+lmg/LGA3+3.5% 蔗糖 +0.35% 琼脂 +0.1% 活性炭，pH 值为 5.8。
[0015](2)不定芽芽增殖培养:将步骤(I)获得的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28°C条件下全暗培养7天，然后置于每天光照15小时，光照强度为1500x，培养温度为28°C的条件下培养，30天转接一次，增殖系数为6.07。所述增殖培养基为 MS+0.5mg/L 6-BA+0.lmg/L NAA+3.5% 蔗糖 +0.5% 琼脂 +0.1% 活性炭，pH 值为 5.8。
[0016](3)生根培养:将步骤(I)或步骤(2)获得的茎长大于3cm的不定芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在28°C条件下全暗培养7天，然后置于每天光照12小时，光照强度为20001x，培养温度为28°C的条件下培养26天即可生根，生根率为91.2%。所述的生根培养基为1/2MS+0.lmg/L NAA+lmg/L GGR+2.5%蔗糖+0.35%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.8。
[0017](4)炼苗移栽:将具有完整健壮根(根长3 0.5cm)试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由珍珠岩和火碳泥(I:1)混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为89.7%。
[0018]实施例2:
(I)不定芽诱导:选取生长健壮饱满的百合鳞茎，用清水洗净，剥去外界2层鳞片，取中层和内层的鳞片，先在78%的乙醇中浸泡12s，用无菌水冲洗5次，每次3min，然后用0.15%的升汞溶液消毒6min，再用洗菌水冲洗3次，每次3min。用无菌滤纸吸干表面水珠后接种到诱导培养基上进行不定芽诱导，诱导率达89.5.7%。所述的诱导培养基为1/2MS+2.5mg/L6-BA+0.6mg/L NAA+3mg/LGA3+3.5% 蔗糖 +0.35% 琼脂 +0.1% 活性炭，pH 值为 5.8。
[0019](2)不定芽芽增殖培养:将步骤(I)获得的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在28°C条件下全暗培养9天，然后置于每天光照13小时，光照强度为1500x，培养温度为28°C的条件下培养，30天转接一次，增殖系数为5.4。所述增殖培养基为MS+0.7mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+3.5% 蔗糖 +0.5% 琼脂 +0.06% 活性炭，pH 值为 5.8。
[0020](3)生根培养:将步骤(I)或步骤(2)获得的茎长大于3cm的不定芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在28°C条件下全暗培养7天，然后置于每天光照12小时，光照强度为20001x，培养温度为28°C的条件下培养28天即可生根，生根率为91.2%。所述的生根培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA+2mg/L GGR+2.5%蔗糖+0.35%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.8。
[0021](4)炼苗移栽:将具有完整健壮根(根长3 0.5cm)试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由珍珠岩和火碳泥(I:1)混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为90.1%。
【主权项】
1.一种百合的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤: (1)不定芽诱导:选取生长健壮饱满的百合鳞茎，用清水洗净，剥去外界I?3层鳞片，取中层和内层的鳞片，先在75%?80%的乙醇中浸泡10?30s，用无菌水冲洗3?5次，每次3?8min,然后用0.1%?0.5%的升萊溶液消毒5?1min,再用洗菌水冲洗3?5次，每次3?8min，用无菌滤纸吸干表面水珠后接种到诱导培养基上进行不定芽诱导； (2)不定芽芽增殖培养:将步骤(I)获得的不定芽接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养7?14天，然后置于每天光照12?15小时，光照强度为1500?25001x，培养温度为25?28°C的条件下培养，25?30天转接一次； (3)生根培养:将步骤(I)或步骤(2)获得的茎长大于3cm的不定芽分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25?28°C条件下全暗培养7?14天，然后置于每天光照12?15小时，光照强度为2000?30001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根； (4)炼苗移栽:将具有完整健壮根(根长30.5cm)试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由珍珠岩和火碳泥(1:1)混合成的基质中并定植于大田中。
2.根据权利要求1所述的一种百合的组织培养快繁方法，其特征在于步骤(I)所述的诱导培养基为 1/2MS+2 ?5mg/L 6-BA+0.1 ?lmg/L NAA+1 ?5mg/LGA3+2.5% ?3.5% 蔗糖+0.35%?0.5%琼脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值为5.4?5.8。
3.根据权利要求1所述的一种百合的组织培养快繁方法，其特征在于步骤(2)所述的增殖培养基为 MS+0.5 ?3mg/L 6-BA+0.1 ?lmg/L NAA+2.5% ?3.5% 蔗糖 +0.35% ?0.5%琼脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值为5.4?5.8。
4.根据权利要求1所述的一种百合的组织培养快繁方法，其特征在于步骤(3)所述的生根培养基为:l/2MS+0.1?lmg/L NAA+1?2.0mg/L GGR (注:双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研究开发中心)+2.5%?3.5%蔗糖+0.35%?0.5%琼脂+0.05%?0.1%活性炭，pH值为 5.4 ?5.8。
【专利摘要】本发明公开了一种百合的组织培养快繁方法，涉及百合（Lilium）通过组织培养技术手段在短时间内快速繁殖保持亲本原有优良性状的百合种苗。本发明以东方百合“西伯利亚”（L.Oriental hybrid Siberia）鳞片为外植体，通过不定芽诱导、继代培养、试管苗生根以及试管苗驯化移栽等阶段实现了百合的组织培养快速繁殖。从而在人工控制的条件实现百合种苗的快速繁殖，短时间内大量试管苗，促进百合的商业化进程。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104686337
【申请号】CN201510085927
【发明人】梁仕华
【申请人】梁仕华
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2015年2月22日