一种金叶蜀桧初代组培方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业技术领域，具体涉及一种金叶蜀桧初代组培方法。
【背景技术】
[0002] 金叶蜀桧是新引进的彩叶植物，由于四季均为黄色，色彩鲜明，在园林绿化中具有 很重要的作用。金叶蜀桧一般采用种子播种、扦插方法繁殖，但种子繁殖容易发生变异，扦 插繁殖的穗源较少，不能快速大量繁殖，所以用组织培养的方法是金叶蜀桧快繁新途径。
[0003] 在金叶蜀桧的初代组织培养过程中，如何能够使金叶蜀桧的初代培养能顺利的进 入下一阶段培育是非常重要的，由于金叶蜀桧为外来树种，以往对它的繁殖还没有报道。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种金叶蜀桧初代组培方 法，使金叶蜀桧能快速、大量的形成分枝，以便进入继代培养过程。
[0005] 技术方案：为实现上述技术目的，本发明提出的一种金叶蜀桧初代组培方法，包括 如下步骤：
[0006] (1)培养基的制作：配制MS培养基的母液，根据配方制作MS+0. 05~0. 4mg/L NAA+0. 1~2. 0mg/L6-BA+0. 2~0. 8wt%琼脂+3wt%蔗糖的培养基，分装灭菌备用；
[0007] (2)准备外植体；
[0008] (3)外植体的消毒：
[0009] (5)接种消毒：用酒精棉花擦拭手掌，超净工作台和桌面上的器皿；
[0010] (6)接苗：用镊子夹出冲洗后的外植体，剪去外植体的旧伤口，换成新伤口，将外 植体依次插入装有培养基的培养瓶中；
[0011] (7)培养：将接种好的外植体统一放到试管架中，推入培养室培养，等待其发芽生 长。
[0012] 优选地，步骤（2)中，准备外植体的步骤为：在晴天早上剪去不带芽的外植体，用 洗衣粉浸泡过后用流水冲洗2~3小时。
[0013] 步骤⑶中，外植体的消毒方法为：用配制0. 1~0. 3wt%的升采将外植体浸泡 5~8min，用无菌水冲洗5次以上。
[0014] 更优选地，步骤（1)中，培养基的配方为MS+0. 1~· 0· 3mg/L ΝΑΑ+0. 5~lmg/ L6-BA+0. 4 ~0· 6wt%琼脂 +3wt%鹿糖。
[0015] 最优选地，步骤（1)中，培养基的配方为 MS+0. 3mg/L NAA+1. 0mg/L6-BA+0. 6wt% 琼脂+3wt%蔗糖。
[0016] 组织培养在离体培养条件下，不同植物以及同种植物不同部位的组织细胞对营养 要求不同，只有满足了他们各自的特殊要求，才能更好地生长发育。掌握培养基的配制及筛 选方法是取得组培成功的关键环节之一。由于本发明属于外来物种，因此在研宄其组培方 法时可参考的资料不多，必须通过试验来逐一解决，关键要解决外植体的取材部位、培养基 的选择以及培养条件等因素。本发明通过长期的探索试验，发现通过采用本发明的外植体 的取材方法以及选择MS+O. 3mg/L NAA+1. 0mg/L6-BA+0. 6wt%琼脂+3wt%鹿糖，可以使金叶 蜀桧能快速、大量的形成分枝，以便进入继代培养过程，同时不会出现玻璃化、褐化等现象。
【附图说明】
[0017] 图1为利用本发明培养的成活的外植体的图片。
【具体实施方式】
[0018] 本发明提出了一种金叶蜀桧初代组培方法，包括如下步骤：
[0019] (1)外植体的准备：在晴天早上剪去不带芽的外植体，用洗衣粉浸泡过净后流水 冲洗2小时；
[0020] ⑵外植体的消毒：用配制0. 1 %的升采将外植体浸泡5mins，用无菌水冲洗5次 以上；
[0021] (3)接种消毒：用酒精棉花擦拭手掌，超净工作台和桌面上的器皿；
[0022] (4)接苗：用镊子夹出冲洗后的外植体，剪去外植体的旧伤口，换成新伤口，将外 植体依次插入装有培养基的培养瓶中；其中，培养基的制作方法为：配制MS培养基的母液。 根据配方制作 MS+0. 05 ~0· 4mg/L ΝΑΑ+0. 1 ~2. 0mg/L6-BA+0. 2 ~0· 8wt% 琼脂 +3wt% 蔗 糖的培养基，在每个培养瓶内倒入25ml，灭菌备好；
[0023] (5)培养：将接种好的外植体同一放到试管架中，推入培养室培养，等待其发芽生 长。其发芽生长后的图如图1所示。
[0024] 下面通过具体的实施例详细说明本发明。
[0025] 实施例1 6-BA浓度对初代培养效果的影响。
[0026] 在初代培养时，将6-BA浓度设为0、0. 05、0. 2、1. Omg/L四个浓度梯度，使用MS培 养基，加入6wt %琼脂和3wt %蔗糖，进行初代组培，每组设10个平行实验，结果如下表所 示：
[0027] 表1不同浓度的6-BA对初代培养效果的影响
[0028]
【主权项】
1. 一种金叶蜀桧初代组培方法，其特征在于，包括如下步骤： ⑴培养基的制作：配制MS培养基的母液，根据配方制作MS+0. 05~0. 4mg/L NAA+0. 1~2. 0mg/L6-BA+0. 2~0. 8wt%琼脂+3wt%蔗糖的培养基，分装灭菌备用； (2) 准备外植体； (3) 外植体的消毒： (5) 接种消毒：用酒精棉花擦拭手掌，超净工作台和桌面上的器皿； (6) 接苗：用镊子夹出冲洗后的外植体，剪去外植体的旧伤口，换成新伤口，将外植体 依次插入装有培养基的培养瓶中； (7) 培养：将接种好的外植体统一放到试管架中，推入培养室培养，等待其发芽生长。
2. 根据权利要求1所述的金叶蜀桧初代组培方法，其特征在于，步骤（2)中，准备外植 体的步骤为：在晴天早上剪去不带芽的外植体，用洗衣粉浸泡过后用流水冲洗2~3小时。
3. 根据权利要求1所述的金叶蜀桧初代组培方法，其特征在于，步骤（3)中，外植体的 消毒方法为：用配制〇. 1~〇. 3wt%的升采将外植体浸泡5~8min，用无菌水冲洗5次以 上。
4. 根据权利要求1所述的金叶蜀桧初代组培方法，其特征在于，步骤（1)中，培养基的 配方为MS+0. 1 ~? 0? 3mg/LNAA+0. 5 ~lmg/L6_BA+0. 4 ~0? 6wt%琼脂 +3wt%鹿糖。
5. 根据权利要求1所述的金叶蜀桧初代组培方法，其特征在于，步骤（1)中，培养基的 配方为MS+0. 3mg/LNAA+1. 0mg/L6-BA+0. 6wt%琼脂 +3wt%鹿糖。
【专利摘要】本发明公开了一种金叶蜀桧初代组培方法，包括如下步骤：培养基的制作；准备外植体；外植体的消毒；接种消毒；接苗；培养。其中，培养基的配方为MS+0.1～0.3mg/LNAA+0.5～1mg/L6-BA+0.4～0.6wt％琼脂+3wt％蔗糖。利用本发明的方法进行金叶蜀桧初代组培，可以使金叶蜀桧能快速、大量的形成分枝，以便进入继代培养过程。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104813942
【申请号】CN201510276663
【发明人】周余华, 周琴, 蒋涛, 王红梅, 于健
【申请人】江苏农林职业技术学院
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月26日