一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于组织培养领域，具体设及一种脱毒马铃馨试管苗的继代培养方法。
【背景技术】
[0002] 中国是世界第一大人口国，粮食问题非常突出，马铃馨（SonalmuutbeosrunlL.) 是仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物，也是粮、菜、饲料和工业原料兼用的经济作 物，由于它高产稳产、适应性广、营养成分全等特点，且自身具有很高的营养价值和药用价 值被广泛栽培。
[0003] 马铃馨是冷凉作物，适合生长的区域比较广，在马铃馨栽培过程中，容易出现叶片 皱缩卷曲，叶色浓淡不均，茎杆矮小细弱，块茎变形龟裂，产量逐年下降等"退化"现象，采用 现代生物技术将种馨内的病毒去掉，恢复马铃馨品种本身的生理功能和生产特性，才能防 止马铃馨的"退化"。
[0004] 在进行马铃馨脱毒培养过程中，尤其是在夏季，因为高溫高湿的环境极易感病死 亡，同时，溫度过高，植株的蒸腾作用加强，易失水造成死亡，从而影响脱毒苗的培养效率， 一般脱毒苗在培养室进行培养，为了满足脱毒苗对光照的需求，往往会对脱毒苗进行补光， 即在培养室增加日光灯进行补光，马铃馨适宜生长的溫度在23-25°C，超过28°C则会影响 继代培养苗的生长，通过补充日光灯的照射，尤其是在夏季使得培养室的溫度达到3(TC左 右，有时甚至可达到32°CW上，而单单通过空调等外部降溫设备都无法将溫度降到脱毒苗 生长适宜的溫度范围内，对脱毒苗的生长受到抑制，进而影响栽培苗的质量。 阳0化]综上所述，如何控制脱毒苗在培养室的环境溫度，降低生产投入，减少脱毒苗的培 养时间，成为本行业迫待解决而未解决的技术问题。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是为了降低夏季在培养脱毒马铃馨试管苗的过程中，由于提供光照 而造成的培养室溫度过高，导致脱毒马铃馨继代培养苗的生长受到抑制。
[0007] 本发明的技术方案是运样实现的：一种脱毒马铃馨试管苗的继代培养方法，包 括品种选择、培养基的配制、灭菌、接种、继代培养过程，所述脱毒马铃馨试管苗在夏季的 继代培养过程中，通过调节日间和夜间的日光灯的开关时间，控制培养室室内溫度平衡， 日间培养室的溫度保持在23-25°C，夜间培养室的溫度保持在16-17°c;所述日光灯每天 18:00-19:00开启，次日早晨8:00-9:00关闭。
[0008] 优选的，所述脱毒马铃馨试管苗在继代培养过程中的光照时间为14-15个小时/ 天。
[0009] 更优选的，所述脱毒马铃馨试管苗的继代培养周期为24-28天。
[0010] 优选的，所述脱毒马铃馨试管苗的继代培养过程中的光照强度为3000-50(K)Lx。
[0011] 优选的，所述脱毒马铃馨试管苗的培养基为MS培养基。 阳〇1引更优选的，所述MS培养基中添加0. 2mg/L的NAA。
[0013] 相对于现有技术，本发明具有如下优点，继代培养方法可W降低由于为培养苗提 供光照造成培养室溫度过高，导致继代培养苗的生长受到抑制，造成烧苗、死苗的现象，通 过培养室溫度变化调整日光灯的开关时间，可极大节省电力能源的消耗，且培养方法比传 统方法可节约6-21天的培养时间。
【具体实施方式】
[0014] 下面结合具体实例，进一步阐述本发明。运些实例仅用于说明本发明而不用于限 制本发明的范围。 阳〇1引实施例一
[0016] 选取=组继代培养苗作为试验，每组选取200个培养瓶。
[0017] 品种选择：选择马铃馨品种天兴一号为试验品种，天兴一号为天津市天兴佳业科 技有限公司自主研发品种。
[0018] 1)MS培养基的配制：根据表1的母液配方表进行MS培养基母液的配制。
[0019] 大量元素母液、微量元素母液、有机成分母液的配制方法是：每种母液中的几种成 分称量完毕后，分别用少量的纯净水彻底溶解，最后定容到1L。
[0020] 铁盐母液的配制方法是：将称好的化S〇4 ? 7&0和化2-邸TA? 2&0分别放到450血 纯净水中，边加热边不断揽拌使它们溶解，最后定容到比，保存在栋色玻璃瓶中。 阳021] 分别量取5mL的微量元素母液、有机成分母液、铁盐母液，50mL的大量元素母液， 并加入5-7g的琼脂和30g的绵白糖，加入纯净水定容至比，将配制好的MS培养基放在电炉 上加热至沸腾，边加热边用玻璃棒揽拌，直到液体呈半透明状，加入0. 2mg/L的NAA-(糞乙 酸），用0.Imol/L的K0H将培养液的抑值调节至6. 0-7. 0,稍微冷却后分装至培养瓶中，每 个培养瓶中分装MS培养基50ml。
[0022] 2)灭菌：将上述培养瓶放入灭菌装置中进行125°C高压灭菌20分钟。
[0023] 3)接种：灭菌后让培养基自然冷却凝固后，然后将灭菌后的培养基移至接种间在 超净工作台上进行接种。
[0024] 4)继代培养：将马铃馨的脱毒试管苗用剪刀剪取大小一致的1叶1芽的茎段，接 种到装有继代增殖培养基的培养瓶中，然后放置于培养室的培养架上进行继代培养，在夏 季培养室的日光灯在每天的18:00-19:00开启，次日早晨8:00-9:00关闭，日间利用自然光 照进行培养，控制室内溫度恒定在23-25°C，光照强度为3500LX，继代培养时间为24天，通 过此方法继代培养后试管苗的株高为6. 29cm，根长为4. 98cm，根条数为4. 77条，增值倍数 分别在继代培养第7天、第14天、第24天分别为2. 1、3. 4、6. 6倍。 阳0巧]表1 :MS培养基母液配方表[0026]
W27] 实施例二
[0028]选取=组继代培养苗作为试验，每组选取200个培养瓶。
[0029] 品种选择：选择马铃馨品种津引馨八号作为试验品种，津引馨八号的品种来源是 中国农科院蔬菜花弁所引进经定向培育而成，选（弓I)育单位（人）是天津市农科院蔬菜 所。
[0030]MS培养基的配制、培养基的灭菌、接种、继代培养步骤同实施例一，继代培养时间 为25天，通过此方法继代培养后试管苗的株高为6. 13cm，根长为5. 23cm，根条数为4. 9条， 增值倍数分别在继代培养第7天、第14天、第24天分别为2. 0、3. 5、6. 2倍。 阳0川 对比例
[0032]选取=组继代培养苗作为试验，每组选取200个培养瓶。
[003引对比例的品种选择、MS培养基的配制、灭菌、接种步骤同实施例一。
[0034] 继代培养：将接种好的芽外植体的培养瓶放置于培养室的培养架上进行培养，在 夏季日光灯设置在日间8:00-18:00开启，夜间18:00-次日早晨8:00关闭，光照强度为 40(K)Lx，继代培养时间为30天，通过对比例继代培养后试管苗的株高为5. 23cm，根长为 3. 28cm，根条数为3. 3条，增值倍数分别在继代培养第7天、第14天、第24天、第30分别为 1.2、1.8、3. 4、5. 9 倍。
[0035] 表1实施例与对比例的试验效果对比表
[0036]
[0037] 由表1可W看出，溫度对增殖芽的增殖倍数和试管苗的高度均有较大的影响，实 施例一中利用日光灯的开关节点将溫度控制在23-25C，适宜试管苗的生长，经过实施例一 或二处理后的培养苗的增殖倍数高，株高较对比例高，继代培养的增值倍数也比较高，比对 比例培养周期30-45天相比缩短了 6-21天的培养时间，大大缩短了生产周期，在单位时间 内增加增殖培养的转接次数，从而极大提高了生产效率，此外利用自然室溫进行脱毒马铃 馨继代培养苗的工厂化生产，可极大节省电力能源，降低生产成本。
[0038] W上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用W限制本发明，凡在本发明的精 神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法，包括品种选择、培养基的配制、灭菌、接 种、继代培养过程，其特征在于：所述脱毒马铃薯试管苗在夏季的继代培养过程中，通过调 节日间和夜间的日光灯的开关时间，控制培养室室内温度平衡，日间培养室的温度保持在 23-25°C，夜间培养室的温度保持在16-17°C ;其中所述日光灯每天18:00-19: OO开启，次日 早晨7:00-8:00关闭。2. 根据权利要求1所述的一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法，其特征在于：所述 脱毒马铃薯试管苗在继代培养过程中的光照时间为14-15个小时/天。3. 根据权利要求1或2所述的一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法，其特征在于： 所述脱毒马铃薯试管苗的继代培养周期为24-28天。4. 根据权利要求3所述的一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法，其特征在于：所述 脱毒马铃薯试管苗的继代培养过程中的光照强度为3000-5000LX。5. 根据权利要求4所述的一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法，其特征在于：所述 脱毒马铃薯试管苗的培养基为MS培养基。6. 根据权利要求5所述的一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法，其特征在于：所述 MS培养基中添加0. 2mg/L的NAA。
【专利摘要】本发明提供了一种脱毒马铃薯试管苗的继代培养方法，包括品种选择、培养基的配制、灭菌、接种、继代培养过程，所述脱毒马铃薯试管苗继代培养过程中，夏季通过调节日间和夜间的日光灯的开关时间，控制培养室室内温度平衡，日间培养室的温度保持在23-25℃，夜间培养室的温度保持在16-17℃，所述日光灯每天18:00-19:00开启，次日早晨7:00-8:00关闭。本发明的有益效果是：降低了由于为培养苗提供光照造成培养室温度过高，导致继代培养苗的生长受到抑制，造成烧苗、死苗的现象，可节约电力能源的消耗，比传统培养方法可节约6-21天的培养时间。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105145367
【申请号】CN201510627091
【发明人】胡小兰, 刘刚
【申请人】天津市天兴佳业科技有限公司
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年9月28日