一种金银花带腋芽茎段的组织培养与繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种金银花带蔽芽茎段的组织培养与繁殖方法，属于植物生物技术中 植物组织培养领域。
【背景技术】
[0002] 金银花又称忍冬化onicerajaponica化unb.)，为忍冬科忍冬属植物，花初开时为 白色，后变为金黄色，故称金银花。金银花是一种重要的药用植物，始载于《名医别录》，列为 上品，药用历史悠久，是国家中医药管理局确定的38种名贵中药材之一，后来又被确定为药 食兼用中药材。金银花主要W其干燥的花蕾入药，具有清热解毒、凉散风热之功效，用于治 疗外感风热或溫病初起、热毒下频、肺热咳嗽等。金银花临床应用非常广泛，据统计有超过 500种中药制剂中含有金银花。近年来，金银花广泛用于治疗多种严重的传染性疾病，包括 严重急性呼吸综合征(SARSXH1N1流行性感冒、手足口病等。现代生化和医学研究表明金银 花提取物具有重要的生物学和药理学活性，包括抗氧化、抗菌、抗炎症、抗病毒、抗癌、保护 肝脏、抗血管生成、镇痛等。
[0003] 金银花一般采用杆插、嫁接、分株或压条繁殖，繁殖系数小，育苗周期长，而且容易 传染病菌，品种退化快。植物组织培养能够保持母株的优良性状，具有繁殖系数高，周年生 产等特点，可实现金银花良种苗木规模化生产。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的问题是建立一种快速、有效的金银花组织培养与繁殖方法，能 够快速获得大量优质金银花苗。
[0005] 为了解决上述问题，本发明采用金银花带蔽芽的茎段进行组织培养与繁殖，包括 培养基的配置、外植体的消毒、蔽芽诱导培养、丛生芽诱导培养、生根培养等步骤，具体如 下： (1)培养基的配制 本发明使用WPM培养基作为基本培养基，配方如下：
配制时，首先配制各组分母液，然后按照比例分别加入各组分母液、去离子水、激素、薦 糖，溶解后用1M化0H溶液调节pH值至5.8，之后加入琼脂，加热至完全溶解后分装至组培 瓶，12TC下高压灭菌20 min。
[0006] 其中诱导培养基为WPM + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L，分化培养基为WPM + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.05 mg/L，生根培养基为WPM + NAA 0.1 mg/L + 活性炭 150 mg/ L。
[0007] (2)外植体的消毒 从生长健壮的无病虫的金银花植株上取带有蔽芽的幼嫩茎段，减去叶片后，用含有少 量漂白粉的溶液洗净，之后在流水下漂洗2 h;剪成1~2 cm小段后，放入含有少量HC1的70% 酒精中浸泡30 S~1 min;用无菌水冲洗一遍，之后放入0.1%升隶处理8~10 min;之后用无菌 水冲洗5~6次，彻底去除升隶。
[000引（3)蔽芽诱导培养 将经过消毒处理的带有蔽芽的茎段接种到诱导培养基上，培养溫度为25Γ，湿度为 50%，光照强度为2000 Lx，光照时间为每天12 h。接种培养1周后，茎节上潜伏的叶蔽芽萌动 膨大，芽不断伸展，逐渐形成主芽，一般都能形成对生蔽芽，切口部分一般会形成少量愈伤 组织。
[0009] (4)丛生芽培养 将诱导产生的蔽芽从基部切下，转入到分化培养基中，诱导产生丛生芽，培养溫度为25 °C，湿度为50%，光照强度为2000 Lx，光照时间为每天12 h。接种5~10天后，幼苗基部开始出 现白色愈伤组织，之后会在愈伤组织中长出不定芽，或者从幼苗基部的蔽芽中长出蔽芽。之 后通过继代培养产生大量丛生芽。
[0010] (5)生根培养 选取生长健壮，高度2 cm左右的无根小苗，切成单株后接种到生根培养基上，培养溫度 为25°C，湿度为50%，光照强度为2000 Lx，光照时间为每天12 h，15 d后可看到底部长出大 量乳白色须根。
[0011] 本发明的有益效果主要为:本发明使用WPM培养基作为基本培养基，取得了较好的 培养效果，同时具有生长速度快、繁殖系数高的特点，植株生长健壮，移栽成活率高。
【具体实施方式】
[0012] 具体实施方法如下： (1)培养基的配制 首先配置WPM培养基各组分母液，配方如下：
配置1L WPM培养基时，分别加入各组分母液的量为:大量元素50 ml,微量元素5 ml,巧 盐10 ml,铁盐5 ml,有机成分5 ml;之后加入薦糖30g，用去离子水补足至1 L然后根据不 同培养基需要加入不同激素，用1M化0田容液调节抑值至5.8,之后加入琼脂5.7 g，加热至 完全溶解后分装至组培瓶，12rC下高压灭菌20 min。
[OOU] 其中不同培养基激素含量为:诱导培养基WPM + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/ L，分化培养基WPM + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.05 mg/L，生根培养基WPM + NAA 0.1 mg/L +活性炭150 mg/L。
[0014] (2)外植体的消毒 从生长健壮的无病虫的金银花植株上取带有蔽芽的幼嫩茎段，减去叶片后，用含有少 量漂白粉的溶液洗净，之后在流水下漂洗2 h;剪成1~2 cm小段后，放入含有少量HC1的70% 酒精中浸泡45 S;用无菌水冲洗一遍，之后放入0.1%升隶处理10 min;之后用无菌水冲洗5~ 6次，彻底去除升隶。
[0015] (3)蔽芽诱导培养 将经过消毒处理的带有蔽芽的茎段接种到诱导培养基上，培养溫度为25Γ，湿度为 50%，光照强度为2000 Lx，光照时间为每天12 h。接种培养1周后，茎节上潜伏的叶蔽芽萌动 膨大，芽不断伸展，逐渐形成主芽，一般都能形成对生蔽芽，切口部分一般会形成少量愈伤 组织。
[0016] (4)丛生芽培养 将诱导产生的蔽芽从基部切下，转入到分化培养基中，诱导产生丛生芽，培养溫度为25 °C，湿度为50%，光照强度为2000 Lx，光照时间为每天12 h。接种5~10天后，幼苗基部开始出 现白色愈伤组织，之后会在愈伤组织中长出不定芽，或者从幼苗基部的蔽芽中长出蔽芽。之 后通过继代培养产生大量丛生芽。
[0017]巧）生根培养 选取生长健壮，高度2 cm左右的无根小苗，切成单株后接种到生根培养基上，培养溫度 为25°C，湿度为50%，光照强度为2000 Lx，光照时间为每天12 h，15 d后可看到底部长出大 量乳白色须根。
【主权项】
1. 一种金银花带腋芽茎段的组织培养与繁殖方法，包括步骤如下： (1) 腋芽诱导培养 从生长健壮的无病虫的金银花植株上取带有腋芽的幼嫩茎段，经消毒处理，将处理后 带有腋芽的茎段接种到诱导培养基上，其中诱导培养基的成分为:WPM + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L + 3%鹿糖； (2) 丛生芽培养 将步骤(1)中诱导产生的腋芽转入到分化培养基中，诱导产生丛生芽，其中分化培养基 的成分为:WPM + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.05 mg/L + 3%蔗糖； (3) 生根培养 将步骤（2)中生长健壮的无根小苗接种到生根培养基上，其中生根培养基的成分为： WPM + NAA 0.1 mg/L + 活性炭 150 mg/L + 3%鹿糖。2. -种用于如权利要求1所述的方法的诱导培养基，其特征在于，所述培养基成分为 WPM + 6-BA 1.0 mg/L + NAA 0.2 mg/L + 3%蔗糖。3. -种用于如权利要求1所述的方法的分化培养基，其特征在于，所述培养基成分为 WPM + 6-BA 2.0 mg/L + NAA 0.05 mg/L + 3%蔗糖。4. 一种用于如权利要求1所述的方法的生根培养基，其特征在于，所述培养基成分为 WPM + NAA 0.1 mg/L + 活性炭 150 mg/L + 3%鹿糖。
【专利摘要】本发明公布了一种金银花带腋芽茎段的组织培养与繁殖方法，具体包括培养基的配置、外植体的消毒、腋芽诱导培养、丛生芽诱导培养、生根培养。本方法具有生长速度快、植株生长健壮、成活率高等特点，使用本发明中的方法，可以快速获得大量优质金银花苗。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105594592
【申请号】CN201510948933
【发明人】亓希武, 梁呈元, 于盱, 房海灵, 李维林
【申请人】江苏省中国科学院植物研究所
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年12月18日