一种牛精液保存方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种牛精液保存方法。
【背景技术】
[0002]家畜精液保存技术是二十世纪随着人工授精技术广泛应用而生产的，原理是通过降低或抑制精子新陈代谢程度达到延长精子在体外寿命的目的。为此，研究者试验将精液放在低温状态(非结冰)或冷冻(结冰)状态下保存。但在温度变化过程中，精液对精子的保护能力是有限的。为此，进行精液冷冻保存就要配合使用专用的溶液先将精液进行稀释。对稀释液的基本要求包括PH值、缓冲性、渗透压和低温保护性能。
【发明内容】
[0003 ]本发明要解决的技术问题是提供一种牛精液保存方法。
[0004]解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是:
[0005]—种牛精液保存方法，包括以下步骤:
[0006](I)精液采集:采集成熟度好的牛精液，存放于6_7°C洁净的环境下备用；
[0007](2)稀释液配制:以灭菌蒸馏水为溶剂，每100ml稀释液由以下成分组成:甘油δ-?Ο 克、大豆卵磷脂 1-2 克、海藻糖 8-12 克、维生素 E2-4 克、卵黄 10-15 克、柠檬酸三钠 4-7 克、青霉素80-100万IU、其余为溶剂，调节PH值为6.6-7.0;
[0008](3)精液稀释:用等温的稀释液将采得的浓份牛精液在30°C下按1:0.5倍作第一次稀释，经I小时降温至15°C ;用等温的稀释液按原精量1:1作第二次稀释，经2-3小时降温至5°C ;再用等温的稀释液按原精量I: I作第三次稀释；
[0009](4)精液冷冻:将精液装入细管，放于冷冻罐内。
[0010]所述采集的牛精液平均成活率大于80%;
[0011]所述步骤(3)经稀释后的精液取样在30-40°C下镜检活率不低于原精液。
[0012]本发明的优点是:
[0013]1、步骤(2)的稀释液配方合理，有效延长了精子存活时间；
[0014]2、采用细管冷冻方法保存精子，降温速度加快，可以保护精子在降温、冷冻过程中免受低温损害；
[0015]3、本发明条件要求低，操作易于实现，适合于规模化养殖繁育。
【具体实施方式】
[0016]下面对本发明的实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
[0017]实施例1
[0018]一种牛精液保存方法，包括以下步骤:
[0019](I)精液采集:采集成熟度好的牛精液，采集的牛精液平均成活率大于80%，存放于6-7°C洁净的环境下备用；
[0020](2)稀释液配制:以灭菌蒸馏水为溶剂，每100ml稀释液由以下成分组成:甘油5克、大豆卵磷脂I克、海藻糖8克、维生素E2克、卵黄10克、柠檬酸三钠4克、青霉素80万IU、其余为溶剂，调节PH值为6.6;
[0021](3)精液稀释:用等温的稀释液将采得的浓份牛精液在30°C下按1:0.5倍作第一次稀释，经I小时降温至15°C ;用等温的稀释液按原精量1:1作第二次稀释，经2-3小时降温至5°C;再用等温的稀释液按原精量1:1作第三次稀释，经稀释后的精液取样在30-40°C下镜检活率不低于原精液；
[0022](4)精液冷冻:将精液装入细管，放于冷冻罐内。
[0023]实施例2
[0024]—种牛精液保存方法，包括以下步骤:
[0025](I)精液采集:采集成熟度好的牛精液，采集的牛精液平均成活率大于80 %，存放于6-7°C洁净的环境下备用；
[0026](2)稀释液配制:以灭菌蒸馏水为溶剂，每100ml稀释液由以下成分组成:甘油7.5克、大豆卵磷脂1.5克、海藻糖10克、维生素E3克、卵黄12.5克、柠檬酸三钠5.5克、青霉素90万IU、其余为溶剂，调节PH值为6.8;
[0027](3)精液稀释:用等温的稀释液将采得的浓份牛精液在30°C下按1:0.5倍作第一次稀释，经I小时降温至15°C ;用等温的稀释液按原精量1:1作第二次稀释，经2-3小时降温至5°C;再用等温的稀释液按原精量1:1作第三次稀释，经稀释后的精液取样在30-40°C下镜检活率不低于原精液；
[0028](4)精液冷冻:将精液装入细管，放于冷冻罐内。
[0029]实施例3
[0030]一种牛精液保存方法，包括以下步骤:
[0031 ] (I)精液采集:采集成熟度好的牛精液，采集的牛精液平均成活率大于80%，存放于6-7°C洁净的环境下备用；
[0032](2)稀释液配制:以灭菌蒸馏水为溶剂，每100ml稀释液由以下成分组成:甘油10克、大豆卵磷脂2克、海藻糖12克、维生素E4克、卵黄15克、柠檬酸三钠7克、青霉素100万IU、其余为溶剂，调节PH值为7.0;
[0033](3)精液稀释:用等温的稀释液将采得的浓份牛精液在30°C下按1:0.5倍作第一次稀释，经I小时降温至15°C ;用等温的稀释液按原精量1:1作第二次稀释，经2-3小时降温至5°C;再用等温的稀释液按原精量1:1作第三次稀释，经稀释后的精液取样在30-40°C下镜检活率不低于原精液；
[0034](4)精液冷冻:将精液装入细管，放于冷冻罐内。
【主权项】
1.一种牛精液保存方法，其特征在于包括以下步骤: (1)精液采集:采集成熟度好的牛精液，存放于6-7°C洁净的环境下备用； (2)稀释液配制:以灭菌蒸馏水为溶剂，每100ml稀释液由以下成分组成:甘油5-10克、大豆卵磷脂卜2克、海藻糖8-12克、维生素E2-4克、卵黄10-15克、柠檬酸三钠4-7克、青霉素80-100万IU、其余为溶剂，调节PH值为6.6-7.0; (3)精液稀释:用等温的稀释液将采得的浓份牛精液在30°C下按1:0.5倍作第一次稀释，经I小时降温至15°C;用等温的稀释液按原精量1:1作第二次稀释，经2-3小时降温至5°C ;再用等温的稀释液按原精量I: I作第三次稀释； (4)精液冷冻:将精液装入细管，放于冷冻罐内。2.根据权利要求1所述的牛精液保存方法，其特征在于所述采集的牛精液平均成活率大于80%。3.据权利要求1或2所述的牛精液保存方法，其特征在于所述步骤(3)经稀释后的精液取样在30-40°C下镜检活率不低于原精液。
【专利摘要】本发明公开了一种牛精液保存方法，包括以下步骤：(1)精液采集；(2)稀释液配制；(3)精液稀释；(4)精液冷冻。本发明条件要求低，操作易于实现，适合于规模化养殖繁育。
【IPC分类】A01N1/02
【公开号】CN105660609
【申请号】CN201610254576
【发明人】李志新
【申请人】李志新
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年4月22日