一种松露与麻栎培育菌根苗的方法
【专利摘要】本发明属于农业育苗领域，涉及一种松露与麻栎培育菌根苗的方法，具体是能够有效利用松露感染接种麻栎得到松露菌根苗的培育方法。培育方法，包括以下步骤：(1)准备麻栎幼苗；(2)麻栎幼苗接种松露；(3)成苗管理。关键是采用了是采用了麻栎接种，松露，有利于麻栎根系的发展，可提高麻栎的抗性及代谢强度；接种后植株的叶绿素、SOD酶活、根系活力均得到显著的提高，促进了根系的发生，增大了地上部与地下部的比例，利于植株的生存。通过本发明方法培育菌根苗，能得到更高的菌根侵染率，菌剂中添加了有机、保水、无机离子等成分，利用植物树苗的向水性、向肥性等特点，提高菌根的侵染指数。
【专利说明】
-种松露与麻巧培育菌根苗的方法
技术领域
[0001] 本发明属于农业育苗领域，设及一种松露与麻栋培育菌根苗的方法，具体是利用 松露感染接种麻栋得到松露菌根苗的培育方法。
【背景技术】
[0002] 松露(Truffle)属珍稀食用菌，是子囊菌的菌丝与林木根系共生而形成的外生菌 根菌，广泛分布于地球的溫带地区，而中国云南和四川攀西地区大部分地区位于此范围内， 松露子囊果价格昂贵，是一种具有较高经济价值的植物。由于松露可食用的子囊果生于地 下，给人类寻找和收获松露带来巨大困难，为满足利益需要，便出现了无序和过渡采挖的现 象，可见实现松露人工培育的意义重大，而要得到松露子囊果就必须先培育出松露菌根苗， 在现今条件下，常用华山松、马尾松等松科植物和栋属植物培育其菌根苗，在环境条件适宜 时，从育苗至检测到菌根初步形成至少花费6个月，而且常常因为各种原因导致侵染率不 〇
[0003] 麻栋(Quercus acutissima化rruth)属壳斗科、栋属植物，我国多地均有分布，是 一种具有较高经济价值的植物。但鲜见松露感染接种麻栋进行根苗培育的报道。本发明欲 提供一种松露感染接种麻栋得到松露菌根苗的培育方法，并筛选得出最佳接种量及接种方 式。
【发明内容】
[0004] 本发明所解决的技术问题是提供一种能够有效利用松露感染接种麻栋得到松露 菌根苗的培育方法。
[0005] 本发明松露菌根苗的培育方法，包括W下步骤：（1)准备麻栋幼苗；（2)麻栋幼苗接 种松露；（3)成苗管理。
[0006] 上述技术方案中，步骤(1)所述准备麻栋幼苗为:收集或培育得到麻栋无菌幼苗；
[0007] 上述技术方案中，所述收集得到麻栋幼苗为通过采收或购买的方式得到无菌培育 的、苗龄为2~4月的麻栋幼苗。
[000引上述技术方案中，所述培育得到麻栋幼苗为通过无菌培育方式将种子培育至苗龄 为2~4月的麻栋幼苗。
[0009] 上述技术方案中，所述培育得到麻栋幼苗优选采用的方法如下：
[0010] 1)采收新鲜健康麻栋种子，水浮选种后用消毒液浸种消毒而后用无菌水清洗，然 后将麻栋种子用灭菌河沙沙藏3~5个月；
[0011] 2)至来年春季播种或人工控制环境溫度达到18-28°C进行播种，将沙藏后的麻栋 种子筛出并精选后消毒；
[0012] 其中，步骤2)所述消毒方法为:麻栋种子用蒸馈水洗净，再用浓度为0.1%~0.4% 的酸性高儘酸钟溶液浸泡种子0.5~化，后用无菌水清洗种子至肉眼不见洗出液显色，再用 无菌水将种子浸泡12~36h，整个消毒过程不能引入其它杂菌；
[OOU] 3)麻栋种子播种在无菌育苗基质中，种间间距0.5~1.2cm，播种完毕后，用保鲜膜 封住育苗装置，进行适溫催芽，待发芽率达50% W上后掲膜育苗，幼苗苗龄达到2~4月，即 可移栽。
[0014] 其中，步骤1)所述河沙的沙藏条件为:沙藏溫度为0~4°C，湿度自然。
[0015] 其中，步骤1)所述消毒液为15~25%的过氧化氨。
[0016] 其中，步骤1)所述消毒时间为0.5~化。
[0017] 其中，步骤1)所述灭菌冷却的河沙的灭菌方式为高溫湿热灭菌：121~126°C，2h; 河沙含水量15 %~30 %。
[0018] 上述技术方案中，无论是收集所得还是培育所得，所得麻栋幼苗要求在无杂菌的 育苗基质中培育。
[0019] 优选的，培育麻栋幼苗时，培育所述育苗基质为按下述体积配比组成的组分：赔 石:越西±:水=1:1:0.2~0.5。
[0020] 上述技术方案中，所述麻栋幼苗需进行适当的机械创伤，W利于植物根部组织快 速感染松露，促进菌根的快速形成，主根、部分侧根尖端剪1.0~2.0cm。
[0021] 上述技术方案中，步骤(2)麻栋幼苗接种松露为；
[0022] A、制作松露子实体菌剂；
[0023] B、麻栋幼苗苗龄达到2~4月时，移栽至移栽基质，移栽的同时接种松露子实体菌 剂。
[0024] 上述技术方案中，步骤A所述松露子实体菌剂是由下述重量配比的组分组成：泥 炭:碳酸巧:保水剂:松露子囊抱子粉=3~5:1~1.5:1:1~5。
[0025] 上述技术方案中，步骤B所述移栽基质为按下述体积配比组成的组分:泥炭:赔石： 越西±:河沙:碳酸巧=1.5~3:1~2.5: 2.5:1~3:1;所述移栽基质含水量30~60%，pH为 7.0~7.5,灭菌即得。
[00%]上述技术方案中，所述移栽基质中的灭菌为高溫湿热灭菌，灭菌条件为95~110 °C，4~化。
[0027] 上述技术方案中，所述泥炭为德国进口细泥炭;所述碳酸巧为石灰石般烧后的粉 末碳酸巧;所述松露子囊抱子粉为松露子囊果冻干后粉碎为50目过筛后的粉末;所述保水 剂为农林保水剂。所述农林保水剂为高吸水性树脂，是具有较高吸水性能和保水性能的高 分子聚合物的总称。农林保水剂又称±壤保墙剂、抗蒸腾剂、胆肥蓄药剂或微型水库，不仅 具有高的吸水性能，还具有保水释水性能，将水分提供给植物利用。
[0028] 上述技术方案中，步骤B接种松露子实体菌剂，单株单穴有效接种松露为0.5~ 2.5g。
[0029] 上述技术方案中，步骤B所述接种为松露子实体菌剂与少量移栽基质混合均匀后， 放置在底部垫有少量移栽基质的育苗盘中，然后使麻栋幼苗根系与混有菌剂的基质充分接 触后，再用移栽基质固定幼苗，填充移栽基质。
[0030] 上述技术方案中，步骤(3)成苗管理为：
[0031 ] A、移栽接种完毕并诱透定根水；
[0032] B、保持移栽基质含水量45±5%，室溫20~30°C，空气相对湿度70±5%，光照300 ~600LUX，保持空气流通，一周空气微喷2~4次，基质灌水1~2次；
[0033] 肥力管理:每个月叶面和基质喷灌营养液1~2次；
[0034] 虫害管理:放置黄板或视情况采取相应措施;禁用高残农药。整个培育过程在大棚 进行，采取放风、降溫、控水等措施对幼苗进行锻炼，W使其定植后能快速适应不良环境。
[0035] 移栽1个月后，每隔半个月随机抽检1次菌根形成情况，检测时，随机选取10%，用 超纯水洗净部分基质后，放置在体视显微镜下初步观察植株根尖菌根形成情况，发现菌根， 可挑选出来，进行DNA分析鉴定，序列比对工作，W确定是否感染成功。
[0036] 本发明的有益效果：
[0037] 本发明采用麻栋接种松露，有利于麻栋根系的发展，可提高麻栋的抗性及代谢强 度;接种后植株的叶绿素、SOD酶活、根系活力均得到显著的提高，促进了根系的发生，增大 了地上部与地下部的比例，利于植株的生存。通过本发明方法培育菌根苗，能得到更高的菌 根侵染率，菌剂中添加了有机、保水、无机离子等成分，利用植物树苗的向水性、向肥性等特 点，提高菌根的侵染指数。
【附图说明】
[0038] 图1为接种栽培示意图。
[0039] 图2为实施例1菌根形态图。
[0040] 其中，图2a表示根系菌根形态，图化表示侧根菌根形态。
[0041 ]图3为实施例2菌根形态图。
[0042] 其中，图3c表示根系菌根形态，图3d表示第一侧根菌根形成情况，图3e表示成簇的 菌根，图3f表示单个菌根尖端菌丝。
[0043] 图4为对比例1菌根形态图。
[0044] 其中，图4g表示部分根系形态(无侵染），图地表示侧根(无侵染）。
[0045] 图5为对比例2菌根形态图。
[0046] 其中，图5i表示根系总体形态及菌根形成情况，图5j表示侧根菌根形成情况。
【具体实施方式】
[0047] W下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明，说明但不限制本发明。
[0048] 实施例1本发明菌剂有效接种量为Ig，植株剪主根和侧根各1cm。
[0049] (1)培育麻栋幼苗，详细步骤如下：
[0050] 当年11月采收新鲜麻栋种子，水浮选种后用消毒液20%的过氧化氨浸种消毒化， 河沙高溫湿热灭菌：121~126 °C，2h;河沙含水量18%;将麻栋种子用灭菌冷却的河沙沙藏4 个月，沙藏溫度为0~4°C，湿度自然。至来年3月份，将沙藏后的种子筛出并精选后，用超纯 水洗净，再用浓度为0.2%的酸性高儘酸钟溶液浸泡种子化，后用无菌水清洗种子至肉眼不 见洗出液显色，再用无菌水将种子浸泡2地，整个消毒过程不能引入其它杂菌，最后播种在 育苗基质（赔石:越西±:水按体积比1:1:0.5)中，种间间距Im，播种完毕后，用保鲜膜封住 育苗盘，放置于消毒支架(克霉灵等消毒处理)上进行适溫催芽，待发芽率达50%后接膜育 苗，幼苗苗龄达到3月，进行移栽，移栽时剪主根和侧根各1.0cm。
[0051] (2)人工接种：
[0052] 挑选2月份新鲜松露子实体，按照下述重量比混合泥炭(德国）：碳酸巧:保水剂：印 度块菌子囊抱子粉=4:1:1:4制成松露子实体菌剂，放置在4Γ冰箱中保存待用。待幼苗苗 龄达3月，移栽入移栽基质中，在移栽的同时进行接种工作，单株单穴有效接种松露达到 1 .Og。移栽基质为泥炭：赔石：越西±:河沙：碳酸巧=3 :1.5 : 2.5 : 2 :1，含水量40%，pH在 7.3，经过高溫湿热灭菌，95~110°(：，4~化。
[0053] 具体的移栽方法为:按照栽培要求计算自制菌剂的用量再与少量移栽基质混合均 匀后，放置在底部垫有少量移栽基质的育苗盘中，然后使华山松根系与混有菌剂的基质充 分接触后，再用移栽基质固定幼苗，填充移栽基质。
[0化4] (3)成苗管理：
[0055] 移栽接种完毕并诱透定根水，保持移栽基质含水量45±5%，室溫20~30°C，空气 相对湿度70 ±5 %，光照300~60化UX，保持棚子空气流通，一般一周可空气微喷2~4次，基 质灌水1~2次。在肥力管理上，每一个月叶面和基质喷灌营养液1~2次。虫害管理，需在大 棚多处放置黄板，如有其它问题，可视情况采取相应措施，禁用高残农药。整个培育过程在 大棚进行，在幼苗生长的同时还可实现炼苗。
[0056] 菌根形成情况检测：
[0057] 移栽2个月后，可观察到菌根初步形成，至3个月时，可看见菌根颜色有所加深，根 系整体感染强度增加，至第5个月的时候，可观察到部分菌根呈浅褐色，随机选取10 %进行 数据采集。
[0058] 实施例2本发明菌剂有效接种量为2g，植株剪主根和侧根各1cm。
[0059] (1)培育麻栋幼苗，详细步骤如下：
[0060] 当年11月采收新鲜麻栋种子，水浮选种后用消毒液20%的过氧化氨浸种消毒化， 河沙为高溫湿热灭菌：121~126 °C，2h;河沙含水量18%;将麻栋种子用灭菌冷却的河沙沙 藏4个月，沙藏溫度为0~4°C，湿度自然。至来年3月份，将沙藏后的种子筛出并精选后，用超 纯水洗净，再用浓度为0.2%的酸性高儘酸钟溶液浸泡种子化，后用无菌水清洗种子至肉眼 不见洗出液显色，再用无菌水将种子浸泡2地，整个消毒过程不能引入其它杂菌，最后播种 在育苗基质（赔石:越西±:水按体积比1:1:0.5)中，种间间距Im，播种完毕后，用保鲜膜封 住育苗盘，放置于消毒支架(克霉灵等消毒处理)上进行适溫催芽，待发芽率达50% W上后 接膜育苗，幼苗苗龄达到3月，进行移栽，移栽时剪主根和侧根各1.0cm。
[0061] (2)人工接种：
[0062] 收购2月份松露子实体，按照下述重量比混合泥炭(德国）：碳酸巧:保水剂：印度块 菌子囊抱子粉=4:1:1:4制成菌剂，放置在4Γ冰箱中保存待用。待实生幼苗苗龄达3月，移 栽入移栽基质中，在移栽的同时进行接种工作，单株单穴有效接种松露达到2. Og。移栽基质 为泥炭:赔石:越西±:河沙:碳酸巧=3:1.5: 2.5: 2:1，含水量40 %，pH为7.3，经过高溫湿热 灭菌，95~110°C，4~化。
[0063] 具体的移栽方法为:按照栽培要求计算自制菌剂的用量再与少量移栽基质混合均 匀后，放置在底部垫有少量移栽基质的育苗盘中，然后使华山松根系与混有菌剂的基质充 分接触后，再用移栽基质固定幼苗，填充移栽基质。
[0064] (3)成苗管理：
[0065] 移栽接种完毕并诱透定根水，保持移栽基质含水量45±5%，室溫20~30°C，空气 相对湿度70 ±5 %，光照300~60化ux，保持棚子空气流通，一般一周可空气微喷2~4次，基 质灌水1~2次。在肥力管理上，每一个月叶面和基质喷灌营养液1~2次。虫害管理，需在大 棚多处放置黄板，如有其它问题，可视情况采取相应措施，禁用高残农药。整个培育过程在 大棚进行，在幼苗生长的同时还可实现炼苗。
[0066] 菌根形成情况检测：
[0067] 移栽2个月后，可观察到菌根初步形成，至3个月时，可看见菌根颜色有所加深，根 系整体感染强度增加，至第5个月的时候，可观察到部分菌根呈浅褐色，随机选取10 %进行 数据采集。
[0068] 实施例3(空白对照)本发明菌剂有效接种量为Og，植株剪主根和侧根各1cm。
[0069] (1)培育麻栋幼苗，详细步骤如下：
[0070] 采收新鲜麻栋种子，水浮选种后用消毒液20%的过氧化氨浸种消毒化，河沙高溫 湿热灭菌：121~126°C，2h;河沙含水量18%;将麻栋种子用灭菌冷却的河沙沙藏4个月，沙 藏溫度为0~4°C，湿度自然。至来年3月份，将沙藏后的种子筛出并精选后，用超纯水洗净， 再用浓度为0.2%的酸性高儘酸钟溶液浸泡种子化，后用无菌水清洗种子至肉眼不见洗出 液显色，再用无菌水将种子浸泡2地，整个消毒过程不能引入其它杂菌，最后播种在育苗基 质(赔石:越西±:水按体积比1:1:0.5)中，中间间距Im，播种完毕后，用保鲜膜封住育苗盘， 放置于消毒支架(克霉灵等消毒处理)上进行适溫催芽，待发芽率达50% W上后接膜育苗， 幼苗苗龄达到3月，进行移栽，移栽时剪主根和侧根各1.0cm。
[007U (2)移栽
[0072] 将苗龄达3月的麻栋幼苗栽培进入多孔育苗盘中即可。
[0073] (3)成苗管理：
[0074] 移栽接种完毕并诱透定根水，保持移栽基质含水量45±5%，室溫20~30°C，空气 相对湿度70 ±5 %，光照300~60化UX，保持棚子空气流通，一般一周可空气微喷2~4次，基 质灌水1~2次。在肥力管理上，每一个月叶面和基质喷灌营养液1~2次。虫害管理，需在大 棚多处放置黄板，如有其它问题，可视情况采取相应措施，禁用高残农药。整个培育过程在 大棚进行，在幼苗生长的同时还可实现炼苗。
[00巧]实施例4
[0076] 实施专利申请号为200710048943.1，所述的松露菌剂制作及相关接种方法并按照 其菌根苗培育管理方法进行重复试验，并按实施例3进行实施，最终测量记录相关数据。
[0077] 本发明各实施例结果如下：
[0078] 根系活力、SOD酶活、叶绿素含量都与植株的代谢密切相关，可W间接反映植株的 健康状况，具体表现情况见下表1所示，菌根形态图见图2-图5。
[0079] 表1各实施例数据测定汇总表
[0080]
[0081] 注:根系活力测定采用TTC法测定；SOD活性测定采用氮蓝四挫(NBT)法;根冠比为 地下部分与地上部分干重的比值；叶绿素含量测定采用植物生理实验方法测定;根系感染 率=调查根中的感染根数/调查总根数。
[0082] 由表1可知，在没有接种的情况下，麻栋的根系活力、SOD酶活、叶绿素含量都低于 其他组，即植株代谢情况不如其他处理组，间接表明，接种块菌，有利于根系的发展，可提高 麻栋的抗性及代谢强度。从表中数据可知，加大接种量能得到更高的感染率，接种后植株的 叶绿素、SOD酶活、根系活力均得到显著的提高，促进了根系的发生，增大了地上部与地下部 的比例，利于植株的生存。通过本发明技术培育菌根苗，能得到更高的菌根侵染率，其侵染 效果比专利200710048943.1中所述更明显，菌剂中添加了有机、保水、无机离子等成分，利 用植物树苗的向水性、向肥性等特点，提高菌根的侵染指数。
[0083] 综上，本发明采用麻栋接种松露，有利于麻栋根系的发展，可提高麻栋的抗性及代 谢强度;接种后植株的叶绿素、SOD酶活、根系活力均得到显著的提高，促进了根系的发生， 增大了地上部与地下部的比例，利于植株的生存。通过本发明方法培育菌根苗，能得到更高 的菌根侵染率，菌剂中添加了有机、保水、无机离子等成分，利用植物树苗的向水性、向肥性 等特点，提高菌根的侵染指数。
【主权项】
1. 松露与麻栎培育菌根苗的方法，其特征在于:包括以下步骤：（1)准备麻栎幼苗；（2) 麻栎幼苗接种松露；（3)成苗管理； 其中，步骤(2)麻栎幼苗接种松露为； A、 制作松露子实体菌剂； B、 麻栎幼苗苗龄达到2~4月时，移栽至移栽基质，移栽的同时接种松露子实体菌剂。2. 根据权利要求1所述的松露与麻栎培育菌根苗的方法，其特征在于:步骤(2)的步骤A 所述松露子实体菌剂是由下述重量配比的组分组成：泥炭:碳酸钙:保水剂:松露子囊孢子 粉=3 ~5:1 ~1.5:1:1 ~5〇3. 根据权利要求2所述的松露与麻栎培育菌根苗的方法，其特征在于:至少满足以下任 一项： 所述泥炭为德国进口细泥炭； 所述碳酸钙为石灰石煅烧后的粉末碳酸钙； 所述松露子囊孢子粉为松露子囊果冻干后粉碎为50目过筛后的粉末； 所述保水剂为农林保水剂。4. 根据权利要求1所述的松露与麻栎培育菌根苗的方法，其特征在于:步骤(2)的步骤B 所述移栽基质为按下述体积配比组成的组分:泥炭:蛭石:越西土:河沙:碳酸钙=1.5~3:1 ~2.5:2.5:1~3:1;所述移栽基质含水量30~60%，pH为7.0~7.5，灭菌即得。5. 根据权利要求1-4任一项所述的松露与麻栎培育菌根苗的方法，其特征在于:至少满 足以下任一项： 步骤(2)的步骤B所述移栽基质中的灭菌为高温湿热灭菌，灭菌条件为95~110°C，4~ 6h; 步骤(2)的步骤B接种松露子实体菌剂，单株单穴有效接种松露为0.5~2.5g; 步骤(2)的步骤B所述接种为松露子实体菌剂与少量移栽基质混合均匀后，放置在底部 垫有少量移栽基质的育苗盘中，然后使麻栎幼苗根系与混有菌剂的基质充分接触后，再用 移栽基质固定幼苗，填充移栽基质。6. 根据权利要求1所述的松露与麻栎培育菌根苗的方法，其特征在于:至少满足以下任 一项： 步骤(1)所述准备麻栎幼苗为:收集或培育得到麻栎无菌幼苗； 优选的，所述收集得到麻栎幼苗为通过采收或购买的方式得到无菌培育的、苗龄为2~ 4月的麻栎幼苗； 优选的，所述培育得到麻栎幼苗为通过无菌培育方式将种子培育至苗龄为2~4月的麻 栎幼苗。7. 根据权利要求6所述的松露与麻栎培育菌根苗的方法，其特征在于:所述培育得到麻 栎幼苗方法如下： 1) 采收新鲜健康麻栎种子，水浮选种后用消毒液浸种消毒而后用无菌水清洗，然后将 麻栎种子用灭菌河沙沙藏3~5个月； 2) 至来年春季播种或人工控制环境温度达到18-28Γ进行播种，将沙藏后的麻栎种子 筛出并精选后消毒； 3) 麻栎种子播种在无菌育苗基质中，种间间距0.5~1.2cm，播种完毕后，用保鲜膜封住 育苗装置，进行适温催芽，待发芽率达50%以上后揭膜育苗，幼苗苗龄达到2~4月，即可移 栽。8. 根据权利要求7所述的松露与麻栎培育菌根苗的方法，其特征在于:至少满足以下任 一项： 步骤1)所述河沙的沙藏条件为:沙藏温度为〇~4°C，湿度自然； 步骤1)所述消毒液为15~25 %的过氧化氢； 步骤1)所述消毒时间为〇. 5~Ih; 步骤1)所述灭菌冷却的河沙的灭菌方式为高温湿热灭菌：121~126°C，2h;河沙含水量 15%~30% ; 优选的，培育麻栎幼苗时，培育所述育苗基质为按下述体积配比组成的组分:蛭石：越 西土:水= 1:1:0.2 ~0.5; 步骤2)所述消毒方法为:麻栎种子用蒸馏水洗净，再用浓度为0.1%~0.4%的酸性高 锰酸钾溶液浸泡种子0.5~2h，后用无菌水清洗种子至肉眼不见洗出液显色，再用无菌水将 种子浸泡12~36h; 步骤3)所述麻栎幼苗苗龄达到2~4月时，进行适当的机械创伤； 优选的，步骤3)所述麻栎幼苗苗龄达到2~4月时，所述机械创伤为主根、部分侧根尖端 剪1 · 0~2·0cm。9. 根据权利要求1所述的松露与麻栎培育菌根苗的方法，其特征在于:步骤(3)成苗管 理为： A、 移栽接种完毕并浇透定根水； B、 保持移栽基质含水量45±5%，室温20~30°C，空气相对湿度70±5%，光照300~ 600LuX，保持空气流通，一周空气微喷2~4次，基质灌水1~2次； 肥力管理:每个月叶面和基质喷灌营养液1~2次； 虫害管理:放置黄板或视情况采取相应措施;禁用高残农药。
【文档编号】A01G9/10GK105917913SQ201610272291
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】李小林, 叶雷, 张波, 吴晨光, 冯仁才, 周洁, 熊小龙, 吴翔, 谢丽源, 谭伟, 彭卫红, 黄忠乾, 甘炳成
【申请人】四川省农业科学院土壤肥料研究所