专利名称：抑制疫霉病的pr的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种抑制疫霉病的PR5菌剂及其制备方法疫霉病在我国蔬菜产区分布很广泛，并且是危害性很大的土壤传播的病害之一。该病传播速度很快，一旦发现疫霉病病情，再进行治理已为时过晚。早期预防事在必行，采用生物防治应是最佳选择。
目前，利用根际微生物进行生物防治已成为研究开发的热点。拮抗微生物对土传病的生物调控作用及其机理已有诸多报道。若在作物根际具有拮抗病原菌的微生物菌群占主导地位，那么作物在代谢过程中产生拮抗蛋白或者抗生素等物质，形成抵抗土传病病原菌侵害的屏障，就能有效的抑制土壤中的病原菌的发展与传播，达到早期预防之目的。
本发明目的在于，研制的抑制疫霉病的PR5菌剂是由干旱沙生植物麻黄素根际土壤中分离筛选的菌剂。经鉴定应属芽孢杆菌属。PR5菌经发酵制的PR5菌剂，通过拌种、沾根、灌根等措施，使PR5菌群进入作物根区并在根际定殖大量繁殖，在根的区系中占有主要位点。在根系和土壤提供足够的养分、空气和水分的环境中，PR5菌将不断地生长繁殖，分泌毒蛋白，抑制疫酶病原菌的发生及对根系的侵染，从而达到防治疫霉病的目的。该菌剂对茄科蔬菜和西瓜等的疫霉病有显著的抑制作用。抑制辣椒疫霉病效果R2/R1为0.47较为明显。用盆栽作抑菌试验PR5菌剂抑菌率达到87.5％，田间作抑菌试验PR5抑菌率达到71.4％。除有抑制疫霉病外，对蔬菜和瓜类有促进生长发育的作用，可提高产量20％以上。
本发明所述的抑制疫霉病的PR5菌剂，它是由干旱区沙生植物麻黄素根际土壤中分离筛选的细菌，属芽孢杆菌属，均在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏(CGMCC),NO.0523
抑制疫霉病的PR5菌剂的制备方法，按下列步骤进行原菌种培养方法PR5菌剂用的培养基为常用的芽孢杆菌属培养基(1000毫升为基数)，牛肉膏2-8克、蛋白胨2-8克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调PH 7，好氧培养，培养温度28-32℃。
液体发酵将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时，进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。
本发明所述的抑制疫霉病的PR5菌剂，其中PR5菌特征为细菌，短杆状，2.5×1.2mm，周生鞭毛，有芽胞、中生；革兰氏染色阳性；接触酶反应阳性；硝酸盐反应阳性。葡萄糖利用产酸、不产气；V·P反应阳性；淀粉水解阳性；柠檬酸利用阳性；酪素水解阳性；酪氨酸水解阴性。根据PR5菌剂的特征，按伯杰细菌手册(八版)索引核对，应定名为枯草芽孢杆菌(Bacillius subtilis)。
PR5菌剂标准以菌剂中的活菌数为主要指标，达到25-30亿/ml，发酵工艺全部在无菌条件下进行，菌剂中不得有其它杂菌。检测方法以平板稀释方法测得结果为主要依据。在制作过程中主要以显微镜血球计数方法为依据。
田间应用效果PR5菌剂主要用于蔬菜和瓜类的种植业，对蔬菜和瓜类的疫霉病有抑制作用，对辣椒疫霉病抑制率达60％以上，对西瓜疫霉病抑制率达到70％以上。
使用方法沾根或灌根PR5菌剂稀释20倍，使每毫升菌液含有菌数达到1亿个以上。菜苗移植时用量平均5ml/株沾根，植株生长20-30厘米时灌根，灌根时稀释40倍，灌根用量平均10ml/株。
喷施在抑霉病发生前10天，菌剂稀释100倍，每亩地用10公斤(稀释)，喷施时最好向根茎部位喷施。
拌种西瓜、蔬菜等在播种前拌种即可，每亩种子量用原PR5菌剂液300ml拌种存放30分钟后播种即可。
实施例1(1)首先制备PR5菌剂原菌种培养PR5菌剂用的培养基为常用的芽孢杆菌属培养基(1000毫升为基数)，牛肉膏2克、蛋白胨8克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调PH7，好氧培养，培养温度28-32℃。
液体发酵将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时；进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。
(2)使用方法4月份，首先选择辣椒疫霉病发病区，用地1.3亩，0.65亩为对照，另0.65亩为处理。辣椒栽培时用已稀释20倍的菌液沾根，用量5ml/株。沾根5-10分钟栽种。移苗后过半个月调查，秧苗长势正常，对照与处理均没有明显差异。7月中旬，疫霉病发生期进行第二次调查。处理与对照分别随机选10个点，每点40株，对照与处理分别调查400株。对照发病52株，发病率为13％；PR5菌剂处理区，发病16株，发病率为4％；PR5菌剂抑病率为69.2％。9月份，第三次调查测产，处理比对照增产36.2％。
实施例2(1)首先制备PR5菌剂原菌种培养PR5菌剂用的培养基为常用的芽孢杆菌属培养基(1000毫升为基数)，牛肉膏8克、蛋白胨2克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调PH7，好氧培养，培养温度28-32℃。
液体发酵将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时；进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。
(2)使用方法4月份，首先选择疫霉病发病区，选择轻度疫霉病发生地4亩，分两个小区，每小区2亩。区1种无籽黑密2号西瓜，区2种黄色西瓜。每小区分对照和处理各一亩地。播种前，处理区用300mlPR5菌剂(原液)拌种，存放30分钟后播种。对照用300ml清水拌种后播种。对照与处理的其他农业管理方法相同。在西瓜苗期进行调查，处理区长势优于对照，叶浓绿，茎粗壮。西瓜地疫霉病发生期进行第二次调查，每小区的对照和处理分别随机选点10个，每个点调查20株，合计200株。区1对照200株中有28株发病，发病株占14％。处理区200株有6株发病，发病率为3％，PR5菌剂防疫霉病的抑制率达到78.8％；区2对照200株中有25株发病，发病率为12.5％。处理200株中发病5株，发病率2.5％。PR5菌剂抑病率为84％。9月份用户统计，区1用PR5菌剂处理的无籽西瓜比对照增产25％。区2黄色西瓜用PR5菌剂处理的比对照增产30％。
实施例3(1)首先制备PR5菌剂原菌种培养PR5菌剂用的培养基为常用的芽孢杆菌属培养基(1000毫升为基数)，牛肉膏6克、蛋白胨4克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调PH7，好氧培养，培养温度28-32℃。
液体发酵将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时；进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。
(2)使用方法首先对辣椒基地疫霉病轻度发生区进行试验，选地面积2亩，1亩对照，1亩地作PR5菌剂处理，辣椒苗移栽时用5ml/株PR5菌液沾根，10分钟后栽种。辣椒疫霉病发生期调查。对照和用PR5处理的分别随机选10个点，每点调查88株，对照880株中有55株发病，发病率6.25％；用PR5菌剂处理的880株中仅有5株发病，发病率0.34％；PR5菌剂抑病率达94％。据用户反应，用PR5菌剂沾根的辣椒生育期延长，对照地基本枯萎，没有结椒现象。而PR5菌剂处理辣椒地仍有很多新鲜辣椒可摘。
权利要求
1.一种抑制疫霉病的PR5菌剂，其特征在于它是由干旱区沙生植物麻黄素根际土壤中分离筛选的细菌，属芽孢杆菌属，均在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏(CGMCC),NO.0523
2.一种抑制疫霉病的PR5菌剂的制备方法，其特征在于按下列步骤进行原菌种培养方法PR5菌剂用的培养基为常用的芽孢杆菌属培养基(1000毫升为基数)，牛肉膏2-8克、蛋白胨2-8克，用7°麦芽汁定容1000毫升，固体培养时加1.0-2.0％的琼脂粉，用氢氧化钠调PH7，好氧培养，培养温度28-32℃。液体发酵将菌种进行斜面菌种培养，再接入三角瓶液体培养接入种子罐通气培养，气压为0.01-0.05μPa，时间18小时，进入发酵罐，时间24小时，发酵温度28-30℃，即可放罐、分装、包装。
全文摘要
本发明涉及一种抑制疫霉病的PR
文档编号C12N1/20GK1310229SQ0013565
公开日2001年8月29日 申请日期2000年12月14日 优先权日2000年12月14日
发明者关桂兰, 程秀兰, 戴晓燕, 陈理, 杨敬, 孔爱琴, 郭朝辉 申请人:中国科学院新疆生态与地理研究所, 中国科学院微生物研究所