专利名称：神经干细胞分化相关基因及其用途的制作方法
技术领域：
本发明属于发育生物学，涉及神经干细胞分化发育的基因和遗传工程，以及利用这些基因及其产物作为干预干细胞分化发育的靶标。
神经干细胞是指具有分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力，并能进行自我更新、足以提供脑组织细胞的可再生细胞。在哺乳动物中枢神经系统发育，保持中枢神经系统的功能具有重要作用。神经干细胞分化是一个极为复杂的过程。影响神经干细胞分化的因子很多，如CNTF能促进神经干细胞分化为胶质细胞，而BDNF则促进分化为神经元。到目前为止，有哪些基因、有多少基因参与神经干细胞分化的过程还无法知晓。
对神经干细胞分化特异基因表达的研究，为进一步探讨神经元的发生、分化和多种神经疾病的诊治提供了新的机遇。神经干细胞的发育、分化受控于相关基因的表达，从全基因组层面研究神经干细胞分化特异基因表达的相互关系有助于形成对神经干细胞发育、分化的整体认识，进而加深对这一过程分子机制的研究。
本发明包括下列步骤寻找神经干细胞分化发育过程中差异表达的基因；研究这些基因所在的特定代谢途径；异源表达这些基因；利用这些基因的及其产物为靶标，干预神经干细胞的分化发育。具体的包括以下的方案1.神经干细胞分离和培养从孕鼠(14天)纹状体分离神经干细胞，置于培养液中。[DMEM/F12(1∶1，V∶V)，谷氨酰胺(2mmol/L)，青霉素(100U/mL)，B27(2％)]，细胞种植浓度为3×105mL，37℃，5％CO2培养。2.RNA分离用SK311Trizol RNA isolation Kit分离细胞→Trizol 1mL→氯仿200uL→振荡30s→4℃，12000g离心5分钟→加入等体积异丙醇→70％乙醇洗二次，干燥→0。1％DEPC水，3倍体积无水乙醇，-70℃保存。3.微距阵分析总RNA→cDNA→与人类基因(14000)杂交分析。
图象分析软件Array Guage software；基因功能分析PubMed(NCBI)，Drosophila BanR。4.新功能基因的克隆获得差异表达基因克隆至T-vector及表达载体。
通过与人类14000个基因杂交分析，共有1406个基因差异表达，148个基因呈现2倍以上差异，60个基因呈现3倍以上差异，新功能序列46个。
b)图象分析软件Array Guage software；c)基因功能分析PubMed(NCBI)，Drosophila BanR。部分差异表达的基因列表基因登录号差异表达的倍数AL046825 2.43J029662.43BF258548 4.42U7929112.40D236602.38NM001660 2.37AW014.22 5.34AB032951 2.31AI698743 6.34AF037439 2.26S781872.2权利要求
1.一组与神经干细胞发育有关的基因，包括SEQ ID1(A1046825)、2(J02966)、3(BE258548)、4(U79291)、5(D23660)、6(NM001660)、7(AW014022)、8(AB032951)、9(AI698743)、10(AF037439)、11(S78187)。
2.含有序列SEQ NO1-11中任何一个或几个核酸序列的表达载体。
3.含有权利要求2所述的表达载体的宿主细胞。
4.一种监测神经干细胞分化发育相关基因表达的方法，其特征是包括下列步骤提供样品，将权利要求1所述的多核苷酸与样品的核酸在高严紧度下杂交，形成一个或多个杂交复合物，检测杂交复合物的形成，复合物的形成则表示样品表达了多核苷酸。
全文摘要
本发明提供了与神经干细胞分化发育有关的基因以及这些基因编码的多肽。本发明也提供了这些基因相应的表达载体、宿主细胞和抗体。本发明提供了与这些基因杂交的核酸探针。这些基因和相关分子可以作为神经干细胞分化发育的标记，以及干预神经干细胞分化发育的靶标。
文档编号C12N15/12GK1415751SQ0214519
公开日2003年5月7日 申请日期2002年11月12日 优先权日2002年11月12日
发明者文铁桥, 谷平, 陈付学 申请人:上海大学