专利名称：一种检测粉尘螨变应原的方法
技术领域：
本发明属化学检验领域，具体涉及检测粉尘螨主要变应原的方法，尤指一种粉尘螨主要变应原Der f2的毛细管电泳电化学检测技术。
特异性免疫疗法主要应用特异性变应原进行脱敏(或减敏)治疗，以调节机体的免疫功能。目前国内临床上多采用粉尘螨变应原浸液制成针剂，以治疗慢性过敏。但均为粗制品，其主要变应原含量无法测知。国外有报道，粉尘螨螨体和代谢物培养基中主要变应原以Der f1为主，其次为Der f2。国内有研究报道经实验室培养的代谢培养基中主要以Der f2为主，且已制成Der f2的实验室标准品。鉴于上述原因，测定粉尘螨变应原制剂中主要变应原Der f1和Der f2的相对含量，建立主要变应原的含量标准是目前制备变应原制剂的首要工作。国外变应原的含量测定均采用抗Derf2的单克隆抗体的制备，并通过ELISA测定其含量，方法较烦琐和复杂。
(2)绘制Der f2标准曲线常规方法配制标准Derf2系列浓液，并通过CE-AD测得各相应电流强度，并绘制成Der f2标准曲线。
(3)粉尘螨制剂中Derf2含量测定(4)粉尘螨制剂的毛细管电泳质量控制
3.毛细管电泳-安培检测(CE-AD)粉尘螨制剂和注射液中Derf2含量(1)毛细管电泳电化学检测系统±30kV高压电源(上海原子核研究所)，CH-2毛细管电泳电化学检测器(江苏电分仪器厂)，LM 14-104自动平衡记录仪(上海大华仪表厂)，精密交流稳压电源(上海科艺仪器厂)，熔融石英毛细管(内径25mm，外径360mm，Polymicro Technologies，USA)；三维微定位仪(Olympus，Tokyo，Japan)，电动进样时间控制器(上海医大仪器厂)。
(2)优化的测定条件分离毛细管40cm长熔融石英毛细管(内径25mm，外径360mm，Polymicro Technologies，USA)；检测池三电极体系，包括直径300mm的铜圆盘检测电极、铂丝对电极和饱和甘汞参比电极。使用前检测电极尖端用M5金相砂纸抛光，无水乙醇浸洗后再置于蒸馏水中超声清洗5min备用。运行电解液为75mmol/LNaOH，检测电位0.65V(vs.SCE)，分离电压12kV，进样时间为6s(12kV)。
(3)绘制Der f2标准曲线常规方法配制标准Derf2系列浓度溶液，并通过CE-AD测得各相应电流强度，并绘制成Der f2标准曲线。表2是通过CE-AD测得各相应电流强度结果。
表2Derf2浓度(μg/mL) 电流强度(nA)41.50 22820.75 11810.38 545.19 262.59 13(4)粉尘螨制剂中Derf2含量测定用CE-AD测定粉尘螨制剂中Derf2含量为0.3101mg/ml。
(5)市售粉尘螨针剂的毛细管电泳质量检测分别测定粉尘螨注射液8批样品，测定结果表明本发明方法具有较高的灵敏度和准确性。表3是粉尘螨注射液8批样品测定结果表3批号 含量测定结果(ug/ml)930322 1/100 273.7190921020 1/1000 35.9256900113 1/10000 3.4215910926 1/5000 4.1913861119 1/100 265.1653980901 1/10000 2.0529970202 1/5000 5.1322910710 1/1000 42.7686本发明方法可高效地分离和检测粉尘螨制剂中的Der f2含量，为有关粉尘螨变应原的提取和药厂的质量控制提供简便的分析检测方法。本发明方法还适用于检测其他蛋白质类变应原成分。
权利要求
1.一种检测粉尘螨变应原的方法，其特征是采用毛细管电泳电化学检测技术，通过下述步骤进行，1)分离、纯化变应原标准品；2)测定标准品浓度制定标准曲线；3)检测样品。
2.按权利要求1的方法，其特征是所述的毛细管电泳电化学检测技术其优化条件是分离毛细管长熔融石英毛细管，检测池三电极体系包括铜圆盘检测电极、铂丝对电极和饱和甘汞参比电极。
3.按权利要求2中的方法，其特征是所述的毛细管电泳电化学检测技术使用铜圆盘电极。
4.按权利要求1和2中的方法，其特征是所述的毛细管电泳电化学检测技术其中使用前检测电极尖端用M5金相砂纸抛光，无水乙醇浸洗后置蒸馏水中超声清洗。
5.按权利要求1和2中的方法，其特征是所述的毛细管电泳电化学检测技术其中运行电解液为NaOH，检测电位0.65V，分离电压12kV，进样时间为6s。
6.按权利要求5的方法，其特征是所述的毛细管电泳电化学检测技术其中运行电解液为75mmol/LNaOH。
全文摘要
本发明属化学检验领域，具体涉及检测粉尘螨主要变应原的方法。本发明采用毛细管电泳电化学检测技术(CE－AD)测定粉尘螨主要变应原Der f2变应原的含量，本方法采用检测技术中分离毛细管长熔融石英毛细管，检测池三电极体系的优化条件，可高效地分离和检测粉尘螨制剂中的Der f2含量，为有关粉尘螨变应原的提取和药厂的质量控制提供简便快速，且灵敏度高的分析检测方法。本发明方法还适用于检测其他蛋白质类变应原成分。
文档编号C12Q1/04GK1429914SQ0215827
公开日2003年7月16日 申请日期2002年12月20日 优先权日2002年4月24日
发明者张鲁雁, 陈刚, 江世益 申请人:复旦大学