专利名称：微囊及含微囊的经口组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种在微生物菌体内包含外源性物质的微囊。更详细地说，涉及一种能够控制包含于微生物菌体内的外源性物质的释放速度、强度或持续性微囊。本发明进一步涉及该微囊的制造方法及含有微囊的经口组合物。
背景技术：
众所周知，现有的控制所需成分的释放时间或速度，提高该成分持续性的方法有所谓的微囊法，其中将该成分封入天然或合成高分子构成的直径大约数～数百μm的微粒子容器(微囊)中。作为微囊的制造方法，虽然已知有利用明胶的凝聚法(例如，美国专利第2800457号、2800458号公报)，由外相(水相)形成膜的原位法(例如特公昭36-9168号、47-23165号、特开昭48-57892号、51-9079号、54-25277号)；及利用内相和外相间的成膜反应的界面聚合法等，但是近年来利用酵母等微生物的细胞壁作为胶囊包膜的微生物微囊法也广为人知。
使用微生物的微囊制造方法例如有如下方法，如特开昭61-88871号、特开昭62-186937号、特开昭63-88033号、WO94/22572、WO96/36433、特开昭58-107189号、及EP0242135B1等公报中所述，不除去酵母菌体的内含成分，直接使其内含香料等所需外源性物质的方法；以及如特开平4-4033号、特开平4-63127号、特开平4-117245号、特开平5-15770号、及特开平8-243378号等公报中所述，除去酵母菌体中的内源性成分之后，使该菌体内含有希望的外源性物质的方法。后一方法有利之处在于，除去酵母菌体中的内源性成分越多，可以使其更多地内含希望的外源性物质，结果可以更多地得到该外源性物质的效果。
但是，在食品领域，口香糖是要求口味或香味具有显现速度或持续性的商品之一，满足要求非常困难，一般地开始咬发出强烈的味道或香味，但是在嚼的过程中该口味或香味快速地消失。因此，长期以来一直开发使口香糖具有尽可能长的嚼咬时间，而且使其香味持续的方法。其中在特开平5-192085号公报中提出，在微生物的菌体内封入香料，将其用作调味剂，制备口香糖。通过这样制作可以用少的香料得到具有强烈味道和持续性的口香糖。
但是，香料或呈味料(例如甜味料等)等封入微生物菌体内的外源性物质(内含成分)的显现速度、强度或其持续性仍然不充分，需要进一步改进。
发明内容
本发明的目的在于，对于微生物菌体内含有外源性物质的微囊，提供使该内含的外源性物质(内容成分)的释放速度、强度或持续性提高的方法，及改善所述形成内容成分释放特性的微囊。而且本发明通过使用该微囊，提供可以得到以更少的量有效内含的外源性物质效果的经口组合物，或者提供以更少量内含的外源性物质的持续性优良的经口组合物。
本发明者为解决上述问题进行反复研究发现，对于微生物的菌体内包含外源性物质的所谓的微生物微囊，通过用选自糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种包敷该微生物(微囊)表面的一部分或全部，可以防止该外源性物质劣化，进一步改善释放速度、强度或其持续性。而且结果表明通过使用预先除去微生物的内源性菌体内成分的微生物作为内含外源性物质的微生物，可以得到更加显著的效果。本发明是在所述发现基础上完成的。
也就是，本发明涉及如下述1～9项所述的微囊。
1项、一种微囊，其中在菌体内包含外源性物质的微生物的表面上，附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种。
2项、如1项所述的微囊，其中在菌体内包含外源性物质的微生物是内源性的菌体内成分溶出的微生物。
3项、如1项或2项所述的微囊，其中，微生物为酵母。
4项、如1项至3项任何一项所述的微囊，其中，糖类是选自由单糖类、二糖类、三糖类、四糖类、低聚糖、多糖类及糖醇组成的组中的至少一种。
5项、如1项至3项任何一项所述的微囊，其特征在于，在微生物的表面附着有选自由乳糖、麦芽酮糖(マルチロ一ス)、海藻糖、还原帕拉金糖(パラチニット)、糊精、甘油、丙二醇、聚甘油、及聚丙二醇组成的组中的至少一种。
6项、如1项至5项任何一项所述的微囊，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质为疏水性物质。
7项、如1项至6项任何一项所述的微囊，其中，包含于微生物的菌体内的外源性物质为选自由香料、着色料、苦味料、酸味料、调味料、香辛料、甜味料、脂质、脂肪酸、氨基酸类、酶、维生素类、动植物提取物及生理活性物质组成的组中的至少一种。
8项、如1项至7项任何一项所述的微囊，其可以作为食品、医药品、准医药品、化妆品或饲料的成分使用。
9项、如1项至8项任何一项所述的微囊，其中，在菌体内包含外源性物质的微生物的表面被选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种包敷。
另外该微囊包括下述形态(a)作为香料使用的1项至9项任何一项所述的微囊，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质至少是香料。
(b)作为甜味料使用的1项至9项任何一项所述的微囊，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质至少是甜味料。
(c)作为着色料使用的1项至9项任何一项所述的微囊，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质至少是着色料。
(d)作为调味料使用的1项至9项任何一项所述的微囊，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质至少是调味料。
(e)作为酸味料使用的1项至9项任何一项所述的微囊，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质至少是酸味料。
(f)作为苦味料使用的1项至9项任何一项所述的微囊，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质至少是苦味料。
(g)作为香辛料使用的1项至9项任何一项所述的微囊，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质至少是香辛料。
而且，本发明涉及下述10～11项所列的上述微囊的制造方法。
10项、一种微囊的制造方法，包括(1)使微生物的菌体内包含外源性物质的工序，(2)使工序(1)得到的微生物的表面上附着选自糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇组成的组中的至少一种的工序。
11项、如10项所述的微囊的制造方法，其中(1)的工序是使用内源性菌体内成分被溶出的微生物，使该微生物的菌体内包含外源性物质的工序。
另外，该微囊的制造方法包含下述形态(a)如10项或11项所述的微囊的制造方法，其中使用酵母作为微生物。
(b)如10项或11项所述的微囊的制造方法，其中使微生物表面附着的糖类为选自由单糖类、二糖类、三糖类、四糖类、低聚糖、多糖类及糖醇组成的组中的至少一种。
(c)如10项或11项所述的微囊的制造方法，其中使微生物的表面附着选自由乳糖、麦芽酮糖、海藻糖、还原帕拉金糖、糊精、甘油、丙二醇、聚甘油、及聚丙二醇组成的组中的至少一种。
(d)如10项或11项所述的微囊的制造方法，其中在微生物的菌体内包含的外源性物质为疏水性物质。
(e)如10项或11项所述的微囊的制造方法，其中包含于微生物的菌体内的外源性物质为选自由香料、着色料、苦味料、酸味料、调味料、香辛料、甜味料、脂质、脂肪酸、氨基酸类、酶、维生素类、动植物提取物及生理活性物质组成的组中的至少一种。
(f)如10项或11项所述的微囊的制造方法，其中(2)的工序是用选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种包敷微生物表面的工序。
另外，本发明涉及含有上述1或9任何一项所述的微囊的经口组合物。所述的经口组合物包括食品、经口医药品、及经口准医药品等可食用组合物及洁齿剂等口腔内组合物的任何一种。优选食品。其中适合的经口组合物，例如有象口香糖等胶类、粘糖或牛轧糖等软糖果、或咀嚼剂等那样，在口腔内长时间保持的物质，优选在口腔内长期咀嚼使用的物质。
12项、一种经口组合物，其中含有如1至9任何一项所述的微囊。
13项、如12项所述的经口组合物，其含有1项至9项任何一项所述的微囊作为香料、着色料、调味料、酸味料、苦味料、香辛料及甜味料组成的组中的至少一种。
14项、如12项或13项所述的经口组合物，其是一种在口腔内长期保持，或者在口腔内长期咀嚼的物质。
15项、如12项或14项任一项所述的经口组合物，其为口香糖。
而且本发明涉及下述16～20项所列的控制包含于微囊中的外源性物质的释放的方法。
16项、一种控制在微生物的菌体内包含外源性物质的微囊的外源性物质的释放速度、强度或持续性的方法，其特征在于，使所述微囊的表面上附着选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种。
17项、如16项所述的方法，其为控制在微生物的菌体内包含香味成分的微囊的香味的显现速度、强度或持续性的方法。
18项、如17项所述的方法，其中在微生物的菌体内包含香味成分的微囊是在内源性的菌体内成分被溶出的微生物的菌体内包含有香味成分的微囊。
19项、如17项或18项所述的方法，其为提高香味的显现速度、强度或持续性的方法。
20项、如17或19任何一项所述的方法，其特征在于，微囊的表面用选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种包敷。
另外该微囊的控制方法包含下述形态(a)如16项至20项任何一项所述的方法，其中使用酵母作为微生物。
(b)如16项或20项任何一项所述的方法，其中微生物表面附着的糖类为选自由单糖类、二糖类、三糖类、四糖类、低聚糖、多糖类及糖醇组成的组中的至少一种。
(c)如16项或20项任何一项所述的方法，其为使微生物的表面附着选自由乳糖、麦芽酮糖、海藻糖、还原帕拉金糖、糊精、甘油、丙二醇、聚甘油、及聚丙二醇组成的组中的至少一种的方法。
(d)如16项或20项任何一项所述的方法，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质为疏水性物质。
(e)如16项或20项任何一项所述的方法，其中，包含于微生物的菌体内的外源性物质为选自由香料、着色料、苦味料、酸味料、调味料、香辛料、甜味料、脂质、脂肪酸、氨基酸类、酶、维生素类、动植物提取物及生理活性物质组成的组中的至少一种。
另外，本发明涉及下述21项～25项所列的控制经口组合物的所需成分的显现速度、强度或持续性的方法。
21项、一种控制经口组合物的外源性物质的显现速度、强度或持续性的方法，包括步骤将在菌体内包含外源性物质的微生物的表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊，配合于经口组合物。
22项、一种控制经口组合物的香味的显现、强度或持续性的方法，包括步骤步骤将在菌体内包含有香味成分的微生物的表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊，配合于经口组合物中。
23项、如21项或22项所述的方法，其中在菌体内包含外源性物质、特别是香味成分的微生物是内源性菌体内成分被溶出的微生物。
24项、如21项或23项任何一项所述的方法，其为对于经口组合物而言，提高经口组合物的外源性物质特别是香味的显现速度、强度或持续性的方法。
25项、如21或24任何一项所述的方法，其中，作为微囊，是用选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种包敷微生物的表面的微囊。
另外该方法包含下述形态(a)如21项至25项任何一项所述的方法，其中使用酵母作为微生物。
(b)如21项或25项任何一项所述的方法，其中微生物表面附着的糖类为选自由单糖类、二糖类、三糖类、四糖类、低聚糖、多糖类及糖醇组成的组中的至少一种。
(c)如21项或25项任何一项所述的方法，其为使微生物的表面附着选自由乳糖、麦芽酮糖、海藻糖、还原帕拉金糖、糊精、甘油、丙二醇、聚甘油、及聚丙二醇组成的组中的至少一种的方法。
(d)如21项或25项任何一项所述的方法，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质，特别是香味成分，为疏水性物质。
(e)如21项所述的方法，其中，包含于微生物的菌体内的外源性物质为选自由香料、着色料、苦味料、酸味料、调味料、香辛料、甜味料、脂质、脂肪酸、氨基酸类、酶、维生素类、动植物提取物及生理活性物质组成的组中的至少一种。
(f)如22项至25项任何一项所述的方法，其中，包含于微生物的菌体内的香味成分为选自由香料、苦味料、酸味料、调味料、香辛料、甜味料、脂质、脂肪酸、氨基酸类、酶、维生素类、动植物提取物及生理活性物质组成的组中的至少一种。
另外，本发明包含下述形态。
26项、在菌体内包含外源性物质的微生物表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊作为香料、甜味料、着色料、调味料、苦味料、香辛料或酸味料的应用。
27项、在菌体内包含有香味成分的微生物表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊在制备香味的显现速度、强度或持续性得到改善的香料、甜味料、调味料、苦味料、香辛料或酸味料任何一种中的应用。
28项、在菌体内包含外源性物质的微生物表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊在制备经口组合物中的应用。
29项、在菌体内包含有香味成分的微生物表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种微囊在制备香味的显现速度、强度或持续性得到改善的经口组合物中的应用。
30项、在菌体内包含有香味成分的微生物表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊在提高经口组合物的香味显现速度、强度或持续性中的应用。
发明实施方式(1)微囊本发明的微囊特征在于，在菌体内包含有外源性物质的微生物表面上，附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种。
作为本发明中用于将外源性物质包含在菌体内的微生物，只要包含细胞壁，并且可以确保人体的安全，不管藻类、酵母、真菌类、或细菌等的种类，可以使用任何一种微生物。优选酵母。在此所述酵母可以任意使用麦酒酵母菌、发面酵母菌、及圆酵母等适合人体摄取的酵母。具体地例如有酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、酱胶酵母菌(Saccharomyces rouxii)、以及卡氏酵母菌(Saccharomyces carlsbergensis)等属于酵母菌属的酵母菌；产朊假丝酵母(Candida flaveri)、热带假丝酵母(Candida tropicalis)、解脂假丝酵母(Candida lipolytica)、Candidaflaveri等属于假丝酵母的酵母菌。这些微生物可以单独使用，也可以2种以上任意混合使用。另外，这些微生物没有特别限定，优选直径范围为1μm～20μm的那些。
这些微生物在内含外源性物质时，不考虑生菌还是死菌类、或者湿润和干燥状态、以及有无溶出除去内源性的菌体内成分的差别等，可以使用任意状态的。特别适合采用预先使内源性的菌体内成分溶到菌体外的微生物。另外，在此作为内源性菌体内成分例如有氨基酸、肽、蛋白质(包括酶)、糖质、核酸、以及脂质等。通过这样地处理，可以将更多的外源性物质添入微生物的菌体内，而且可以显著防止内源性菌体内成分由来的不希望的味道或气味产生，或者由内源性菌体内成分产生的内包的外源性物质的分解或变质等。
将内源性菌体内成分(内源性成分)溶出至菌体外的方法没有特别限定，可以任意选用通常的方法或将来开发的方法。例如通常的方法有加温处理，pH处理和细胞壁破碎处理等物理处理法；溶出促进剂添加法等化学处理法；使用菌体内成分溶出酶或细胞壁溶解酶等的酶的酶处理法；或者这些方法的组合(参照特开平4-4033号等)。
这里，可以通过将目标微生物的悬浊液通常升温至30～100℃，优选升温至30～60℃，搅拌数分钟到数小时，进行加温处理。这时为了更加有效地溶出菌体内成分，也可以并用溶出促进剂添加法。这里使用的溶出促进剂例如有乙醇或丙醇等低级醇、醋酸乙酯及丙酮等极性有机溶剂；无机盐类、糖类、季铵盐、各种防菌·抗菌·杀菌剂、以及氢氧化钠或氢氧化钾等碱类等。例如具体的方法是在微生物的水分散液中添加丙酮等溶剂，在温度40℃左右的条件下振荡24小时左右。
可以通过使用超声波粉碎机或磨机等破坏细胞壁进行细胞壁破碎处理。例如具体的方法是用珠磨机处理微生物的水分散液10分钟。
另外，菌体内成分溶出酶处理法中，包括利用微生物具有自消化酶的方法(Babayan，T.L.和Bezrukov，M.G.，1 Acta Biotechnol.0，5，129-136(1985))和酶处理法，该酶处理法通过单独使用蛋白酶，或将核酸酶、β-葡聚糖酶、酯酶或脂肪酶中的至少一种和蛋白酶组合，处理酵母。可以通过使具有自消化酶的微生物的水分散液或添加有上述酶的微生物的水分散液，在30～60℃的温度下温育1～48小时予以实施。
细胞壁溶解酶处理法包括如下方法，使用分解微生物细胞壁构成成分(葡聚糖或甘露聚糖等多糖类、这些多糖类和蛋白质的复合体、甲壳质等)的酶，例如葡聚糖酶(β-1，3葡聚糖酶)、甘露聚糖酶或甲壳质酶中的至少一种酶处理酵母的方法。具体地可以在通常pH4～9的条件下、30～60℃的温度范围内将添加了上述酶的微生物的水分散液温育数分钟～10小时左右，进行细胞壁溶解酶处理。
如上得到的处理物再利用离心分离除去上清液，根据需要对得到的残渣(菌体)进行洗净、加热、pH调整处理，由此可以得到除去菌体内成分的微生物菌体。
另外，使本发明中使用的内源性菌体内成分溶出的微生物不受上述所列的溶出方法或溶出程度的限制，广泛地包括溶出除去了菌体内成分的微生物。优选溶出成分的绝对干燥重量相对于未处理微生物的绝对干燥重量100重量％的比例(溶出率)为10～80重量％，优选30～70重量％这样将内源性菌体内成分溶出的微生物。
另外，除去了涉及的内源性菌体内成分(内源性成分)的微生物菌体，可以使用商业上容易简便得到的那些。其没有限制，例如从东方酵母工业株式会社、田边制药株式会社、アサヒフ一ドアンドヘルスケア株式会社及キリンビ -ル等株式会社(都是日本公司)等出售的酵母细胞壁。
除去了该内源性菌体内成分的微生物(菌体残渣)为了尽可能多地在该菌体内部封入外源性物质，在上述处理的基础上，也可以再进行酸性处理(特开平8-2433378号公报)、碱性处理(特公平7-32871号公报)、醇处理(特公平8-29246号公报)等任意处理。所述方法都是公知的方法，以制备的微生物的细胞壁具有作为微囊的膜所容许的化学和物理性质为限度，不限于所述的方法。
具体地，作为酸性处理方法，可以列出将由酶处理法等上述处理法得到的菌体残渣悬浊于盐酸、磷酸或硫酸等无机酸、或乳酸、柠檬酸、醋酸或抗坏血酸等有机酸等的酸性水溶液(优选pH不高于2)中，在规定时间内边搅拌边加热(优选50～100℃)的方法。
另外，可以在碱性水溶液、优选pH9～13，特别优选pH10～12的水溶液中，用数分到数小时搅拌由酶处理法等上述处理法得到的菌体残渣，进行碱处理。该水溶液的温度没有特别限定，通常使用范围为20～100℃，优选30～100℃，特别优选50～80℃的加热状态。另外为调整碱性水溶液，可以使用氢氧化钠、氢氧化钙、氢氧化钾或硅酸钠等无机盐；或者氨、单乙醇二胺、乙二胺、或二乙撑三胺水溶液等有机氮系化合物。
可以在通过酶处理法等上述处理法得到的菌体残渣中添加例如一元醇等醇类或含水醇，通过数分到数小时的搅拌，进行醇处理。该处理溶液的温度只要醇不挥发就可以，没有特别限定。通常使用范围为20～80℃。优选30～60℃，特别优选在40～50℃加热状态下进行搅拌。这里一元醇例如有甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、己醇等碳数1～6的低级醇。优选使用乙醇。
内含于微生物菌体内部的外源性物质只要是液状就可以，不管亲水性、疏水性和两亲性。优选疏水性物质。另外所述的外源性物质是指需要封入微生物的菌体内的人为添加的物质。包含例如以下两种，即不是微生物成分(内源性成分)由来的物质；以及即使本来是微生物由来的，一旦浓缩从微生物取出的物质，或者与其它成分混合等，就可以人为地进行任何处理的物质。在所述限度内，人为处理的物质即使再混入菌体内，也相当于本发明所述的外源性物质。
例如，作为前者实例，广泛涉及的有食品添加剂、食品组合物、医药组合物、医药品添加剂、准医药组合物、及化妆品组合物等。后者实例例如有酵母提取物等微生物提取物，或者由微生物由来的(或由微生物产生的)生理活性物质制备的例如抗生物质和免疫抑制剂等。优选食品添加剂、食品组合物(含食品材料)、经口的医药组合物、及经口用医药添加剂等可食性物质。
外源性物质具体地例如有香料(包括香料成分)、着色料(包括色素、颜料、染料)、甜味料(包括糖类)、酸味料、调味料、苦味料、香辛料、脂质、脂肪酸、氨基酸类、酶、维生素类、动植物提取物、生理活性物质等。优选香料、甜味料、酸味料、调味料、苦味料、香辛料、脂质、氨基酸类、维生素类、及动植物提取物等可形成香味的成分(香味成分)、着色料、维生素类以及生理活性物质。更优选香味成分，特别是香料、甜味料、酸味料、调味料、苦味料、及香辛料。
关于所述的外源性物质，外源性物质本身(有效成分)可以是本来具有亲水性、疏水性或两亲性的任意性状、优选具有疏水性的那些，也可以是通过加热、或者和其它的溶剂等物质混合，制备成具有上述性状、优选具有疏水性的调制物。
所述香料例如有在食品或医药领域、以及化妆品领域一般使用的香料，优选食品等可食性制品中适用的香料。所述香料具体有橙、柠檬、酸橙、柚、桔、以及橘等柑橘系香料；苹果、香蕉、樱桃、葡萄、瓜、桃、凤梨、李子、覆盆子、草莓等水果系香料；香草、咖啡、可可、以及巧克力等ビンズ系香料；薄荷油、绿薄荷等薄荷系香料；多香果粉、肉桂、肉豆蔻等调味品系香料；杏仁、花生、以及胡桃等坚果系香料；螃蟹、虾、以及其它的鱼类等水产系香料；其它的蔬菜、谷物、海草等的各种香料。另外香料成分例如有薄荷醇、d1-薄荷醇、薄荷酮、香子兰醛、乙基香子兰醛、桂皮酸、胡椒醛、d-冰片、麦芽醇、乙基麦芽醇、樟脑、氨茴酸甲酯、桂皮酸甲酯、肉桂醇、N-甲基氨茴酸甲酯、甲基β-萘酮、萜二烯、沉香醇、以及异硫氰酸烯丙酯等。另外上述物质可以单独使用，也可以2种以上任意进行混合后使用。
着色料可以使用任何天然色素和合成色素。优选使用食品等可食性制品中使用的色素。天然色素例如有类胡萝卜素色素、辣椒色素、胭脂树橙色素、橙色素、白薯色素、金盏花橙黄色素、等类胡萝卜素色素；紫甘薯色素、红卷心菜色素、接骨木莓、色素、葡萄果汁色素、葡萄果皮色素、紫玉米色素、红萝卜色素、苏紫色素、红米色素、越橘色素、醋栗色素、酸果蔓色素、粉红色素、スイムグル一ベリ一色素、草莓色素、暗甜樱桃色素、樱桃色素、芙蓉属色素、黑果越桔色素、红醋栗色素、黑莓色素、越橘色素、梅红色素、欧洲越桔色素、博伊森树莓色素、深紫色色素、紫山药色素、树梅色素、红葡萄色素、及罗甘梅色素等花色苷系色素、胭脂红色素、光荣花色素、茜草色素、以及虫胶色素等醌系色素；罗望子果色素、ク一ロ一色素、高粱色素、紫檀色素、洋葱色素、罗望子色素、牡蛎色素、カロブ色素、甘草色素、苏木色素、花生色素、美洲山核桃色素、红花红色素、红花黄色素等类黄酮系色素；红曲色素、红曲红色素等的アザフイロン色素；并且其它的色素例如有红曲黄色素、酱色、姜莞属色素、草红色素、栀子兰色素、栀子黄色素、栀子红色素、叶绿酸、叶绿素、以及螺旋藻属兰色素等。另外合成类的焦油色素例如有食用红色2号、食用红色3号、食用红色40号、食用红色102号、食用红色104号、食用红色105号、食用红色106号、食用黄色4号、食用黄色5号、食用兰色1号、食用兰色2号及食用绿色3号等。而且天然色素衍生物有降胭脂树素钠、降胭脂树素钾、铜叶绿素、铜叶绿素钠及铁叶绿素钠等；合成天然色素有β-胡萝卜素、芦丁、虾青素、鸡油菌素、核黄素、核黄素铬酸酯及核黄素5’-磷酸酯钠等。其中，优选β-胡萝卜素、类胡萝卜素色素、辣椒红色素、胭脂树色素、茜草色素、橙色素、栀子色素(栀子兰色素、栀子黄色素、栀子红色素)、叶绿素、紫色素、食用红色3号、食用黄色4号、洋葱色素、西红柿色素、橙黄色素、叶黄色素等。
甜味料(包括糖类)例如有单糖类、二糖类、低聚糖、糖醇类、高甜度甜味料。具体的例如有阿戊糖、半乳糖、木糖、葡萄糖、山梨糖、果糖、鼠李糖、核糖、异性化液糖、N-乙酰氨基葡萄糖等单糖类；异海藻糖、蔗糖、トレハルロ-ス、海藻糖、新海藻糖、帕拉金糖、麦芽糖、蜜二糖、二蔗酮糖、乳糖等二糖类；α-环糊精、β-环糊精、低聚异麦芽糖(异麦芽糖、异麦芽三糖、6-α-葡萄糖基麦芽糖等)、低聚-N-乙酰氨基葡糖胺、半乳糖蔗糖、半乳糖乳糖、吡喃半乳基(β1-3)吡喃半乳基(β1-4)吡喃葡萄糖、吡喃半乳基(β1-3)吡喃葡萄糖、吡喃半乳基(β1-6)吡喃半乳基(β1-4)吡喃葡萄糖、吡喃半乳基(β1-6)吡喃葡萄糖、低聚木糖(木三糖、木二糖)、低聚龙胆糖(龙胆二糖、龙胆三糖、龙胆四糖)、木苏四糖、テアンデオリゴ、低聚黑曲霉糖(黑曲霉糖)、低聚帕拉金糖、帕拉金糖糖浆、岩藻糖、低聚果糖(蔗果三糖、蔗果四糖(ニスト一ス)等)、呋喃果糖基蔗果四糖、葡聚糖、麦芽糖基β-环糊精、低聚麦芽糖(麦芽三糖、四糖、五糖、六糖、七糖等)、棉子糖、蔗糖结合的糖稀(偶合糖)、大豆低聚糖、转化糖、糖稀等的低聚糖类；异麦芽糖醇、赤藻糖醇、木糖醇、甘油、山梨醇、还原帕拉金糖、麦芽糖醇、麦芽四糖醇、麦芽三糖醇、甘露醇、乳糖醇、还原低聚异麦芽糖、还原低聚木糖、还原低聚龙胆糖、还原麦芽糖稀、还原糖稀等的糖醇；α-葡糖基转移酶处理的甜菊、阿斯巴甜、安赛蜜、阿力甜、甘草提取物(甘草甜素)、甘草酸三铵、甘草酸三钾、甘草酸三钠、甘草酸二铵、甘草酸二钾、甘草酸二钠、仙茅甜蛋白、糖精、糖精钠、环己磺酸盐、三氯蔗糖、甜菊提取物、甜菊末、甜精、索马甜、甜叶悬钩子提取物、ナイゼリアベリ一提取物、新甜(ネオテ一ム)、新橙皮二氢查耳酮、果糖基转移酶处理的甜菊、巴西甜草提取物、神秘果提取物、罗汉果提取物、酶处理的甘草、酶分解的甘草等的高甜度甜味料；其他蜂蜜、果汁、果汁浓缩物等。
脂质例如有大豆油、玉米油、米糠油、红花油、棉籽油、橄榄油、蓖麻油、鱼油、猪油、牛油、羊油、马油、及卵磷脂等。
脂肪酸例如有二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、亚油酸、亚麻酸、十六烷酸、及油酸等。
维生素类例如有维生素A、维生素B群(维生素B1、B2、B6、B12、、B13、BC及BT等)、维生素C、维生素D、维生素E、维生素H、维生素K、维生素M、维生素P、维生素U及它们的衍生物。
动植物提取物一般可广泛列举在食品或医药品领域、及化妆品领域使用的动植物提取物，优选可在食品等可食用性制品中使用的那些。例如小麦提取物、香草提取物、皂树提取物、巴巴多芦荟提取物、甘茶提取物、麦芽提取物、土当归提取物、野茉莉提取物、塔花属植物提取物、魔芋提取物、桉树叶提取物、金鸡纳树皮提取物、酸橙提取物、黄金枪鱼提取物、龙胆提取物、葡萄种子提取物、茶提取物等植物提取物；牛肉提取物、鸡肉提取物、猪肉提取物、蟹提取物、鲣提取物、牡蛎提取物、动物胶、骨胶原、酵母提取物等动物提取物。另外，这些动植物提取物也包括象鲣节提取物等动植物的加工处理物的提取物、以及明胶加水分解物等的动植物提取物的再处理产物。
生理活性物质一般可广泛列举在食品或医药品领域、及化妆品领域使用的生理活性物质，优选可适用于食品或口服用药品等这样的可食用性制品的物质。例如乙柳酰胺、水杨酸钠、乙酰氨基苯、布洛芬、非那西订、丁子香粉、安替比林、儿茶酸、皂角苷类、硫酸软骨素以及等神经酰胺等的磷脂质等。
香辛料一般可广泛列举在食品或医药品领域、及化妆品领域使用的香辛料，优选可适用于食品或口服用药品等这样的可食用性制品的物质。没有限制，例如大蒜制剂、洋葱、柠檬草、香菜、龙藁、月桂、迷迭香、欧洲甜罗勒、辣椒属、百里香、肉桂、桂皮、牛至、姜黄属、球状物、胡椒属、及芫荽等。
在上述各种同类组(例如着色料或甜味料等组)中所有的成分可以单独使用，也可以2种以上任意混合使用。
上述各种类的外源性物质可以单独使用1种，也可以2种以上任意混合使用。而且也可以在上述列出的外源性物质中配合分散剂、抗氧剂、防腐剂、矫味剂、乳化剂或强化剂等。例如使菌体内部包含外源性物质的香味成分，特别是含有香料时，可以在该香味成分中，混合使用选自提取的维生素E、d1-α维生素E、d-α-维生素E、d1-γ-维生素E、混合维生素E、迷失香提取物、杨梅提取物、芦丁提取物、芦丁酶分解物、茶提取物和生育三烯酚组成的组中的至少1种抗氧剂。
上述外源性物质通过与所述微生物菌体(菌体残渣)混合，可以使其内包于菌体内。具体的是在所述微生物菌体(菌体残渣)的分散液中添加外源性物质，根据需要调整pH或温度，搅拌规定的时间，可以使外源性物质内包于菌体内。pH没有特别限定，通常可以在pH5～9的范围内进行适当选择，优选在Ph6～8的范围内进行适当选择。另外，温度没有特别限定，通常可以在40～80℃范围内进行适当地选择，优选在50～70℃的范围内适当选择。
另外，是否搅拌也没有特别限定。搅拌时，可以使用具有搅拌翼的混合机、乳化机、分散剂、或匀质器等各种搅拌装置，使外源性物质更加有效地内包于微生物菌体内。这时，搅拌速度或搅拌旋转数等也没有特别限定，通常可以在1,000～10,000rpm的范围进行适当地选择调整。
另外在使外源性物质和所述微生物菌体(菌体残渣)混合时，也可以在混合有外源性物质和微生物菌体的体系中配合硬膜剂、抗氧剂、稳定剂、分散剂、乳化剂、pH调整剂、防腐剂、或防劣化剂等。
本发明这样处理得到的物质，其特征在于，在微生物菌体内部包含外源性物质的微囊(内含外源性物质的微生物)的至少表面上，附着糖类、高甜度甜味料、蛋白质类以及多元醇。
在此使用的糖类有阿拉伯糖、半乳糖、木糖、葡萄糖、山梨糖、果糖、鼠李糖、鼠李糖、核糖、异性化液糖、N-乙酰氨基葡萄糖等单糖类；异海藻糖、蔗糖、麦芽酮糖、海藻糖、新海藻糖、帕拉金糖、麦芽糖、蜜二糖、二蔗酮糖、乳糖等二糖类；麦芽三糖等三糖类；麦芽四糖等四糖类；α-环糊精、β-环糊精、低聚异麦芽糖/麦异芽低聚物糖(异麦芽糖、异麦芽三糖、6-α-葡萄糖基麦芽糖等)、低聚-N-乙酰氨基葡萄糖、半乳糖蔗糖、半乳糖乳糖、吡喃半乳基(β1-3)吡喃半乳基(β1-4)吡喃葡萄糖、吡喃半乳基(β1-3)吡喃葡萄糖、吡喃半乳基(β1-6)吡喃半乳基(β1-4)吡喃葡萄糖、吡喃半乳基(β1-6)吡喃葡萄糖、低聚木糖(木三糖、木二糖)、低聚龙胆糖(龙胆二糖、龙胆三糖、龙胆四糖)、木苏四糖、テアンデオリゴ、低聚黑曲霉糖(黑曲霉糖)、低聚帕拉金糖、帕拉金糖糖浆、岩藻糖、低聚果糖(蔗果三糖、蔗果四糖等)、呋喃果糖基蔗果四糖、葡聚糖、麦芽糖基β-环糊精、低聚麦芽糖(麦芽三糖、四糖、五糖、六糖、七糖等)、棉子糖、蔗糖结合的糖稀(偶合糖)、大豆低聚糖、转化糖、糖稀、糊精、阿拉伯树胶、黄原胶、瓜尔胶粉、角叉菜胶、热凝多糖(カ一ドラン)、罗望子胶、结冷胶(ジエランガム)、淀粉、改性淀粉等的低聚糖类及多糖类；异麦芽糖醇、赤藻糖醇、木糖醇、甘油、山梨醇、还原帕拉金糖、麦芽糖醇、麦芽四糖醇、麦芽三糖醇、甘露醇、乳糖醇、还原低聚异麦芽糖、还原低聚木糖、还原低聚龙胆糖、还原麦芽糖稀、还原糖稀等的糖醇。优选葡萄糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、果糖等的单糖类；麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖等的二糖类；麦芽三糖等的三糖类；麦芽四糖等的四糖类；低聚麦芽糖等的低聚糖；糊精、阿拉伯树胶、黄原胶、瓜尔胶粉、结冷胶、淀粉、改性淀粉、及环糊精等的多糖类；还原帕拉金糖、山梨糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、及赤藓糖醇等的糖醇。更优选乳糖、海藻糖等的二糖类。另外，这些糖类可以单独使用，或者两种以上任意组合使用。
高甜度甜味料例如有α-葡萄糖基转移酶处理的甜菊、阿斯巴甜、安赛蜜、阿力甜、甘草提取物(甘草甜素)、甘草酸三铵、甘草酸三钾、甘草酸三钠、甘草酸二铵、甘草酸二钾、甘草酸二钠、仙茅甜蛋白、糖精、糖精钠、环己磺酸盐、三氯蔗糖、甜菊提取物、甜菊末、甜精、索马甜、甜叶悬钩子提取物、ナイゼリアベリ一提取物、新甜(ネオテ一ム)、新橙皮二氢查耳酮、果糖基转移酶处理的甜菊、巴西甜草提取物、神秘果提取物、罗汉果提取物、酶处理的甘草、酶分解的甘草等的高甜度甜味料；优选阿斯巴短甜、三氯蔗糖、安赛蜜、索马甜、甜菊、阿力甜、新甜、及木糖醇。另外，这些高甜度甜味料可以单独使用一种或者两种以上任意组合使用。
蛋白质类例如有明胶、明胶加水分解物、玉米蛋白质、酪蛋白、酪素钠、胶原。特别优选明胶、玉米蛋白质、酪素钠。这些多元醇可以单独使用1种，也可以2种以上任意混合使用。
多元醇例如有丙三醇、丙二醇、及作为这些聚合物的聚丙二醇及聚丙三醇。优选丙二醇、丙三醇。另外，这些多元醇可以单独使用1种，也可以2种以上任意混合使用。
这些糖类、高甜度甜味料、蛋白质类、及多元醇可以单独使用也可以2种以上任意混合使用。
对上述微囊上附着高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇(下面也统称其为“糖类等”)的方法没有特别限定。例如有如下方法，即通过喷雾干燥机等使采用所述方法制备的微囊(内包外源性物质的微生物)干燥，利用流动层造粒机等使“糖类等”溶解或分散于水等的溶剂的溶液或分散液喷雾的方法；向附着“糖类等”的床(流化床)喷雾微囊(内包外源性物质的微生物)的分散液滴，然后分别取由“糖类等”覆盖表面的微囊的分散液滴，进行干燥的方法；向微囊(内含外源性物质的微生物)的分散液中添加“糖类等”，使其均匀地溶解，之后进行冷冻干燥的方法；利用喷雾干燥等使微囊(内含外源性物质的微生物)进行干燥，用高速搅拌混合机等向其中粉体混合“糖类等”的方法；以及在微囊(内含外源性物质的微生物)的分散液中添加“糖类等”，使其均匀溶解之后，喷雾干燥该分散液的方法等。优选向微囊(内含外源性物质的微生物)的分散液中添加“糖类等”，使其均匀地溶解，之后喷雾该分散液进行干燥的方法。
这里所述微囊(内含外源性物质的微生物)和“糖类等”(糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇)的比例，例如为以干燥固体成分的重量比计算，相对于100重量份微囊(内含外源性物质的微生物)“糖类等”为1～90重量份，优选10～50重量份，特别优选20～40重量份。
所述方法中，在微囊(内含外源性物质的微生物)分散/悬浊于溶液的状态下使用时，该分散液/悬浊液中的微囊的配合比例为5～80重量％、优选10～50重量％、特别优选20～40重量％，另外在“糖类等”处于溶解液或分散液/悬浊液的状态下使用时该溶液中的配合比例为1～60重量％、优选10～50重量％、特别优选30～40重量％。
如上所述得到的微囊在至少一部分表面上附着有“糖类等”(糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇)。优选在微囊的表面上部分或全部地包敷(覆盖)“糖类等”。另外只要是在表面的至少一部分附着“糖类等”，也可以在微囊的膜中(细胞壁中)或微囊内部浸透侵入“糖类等”。
所述的“糖类等”附着于表面的微囊优选用“糖类等”包敷表面的微囊(本发明的微囊)可以作为食品、医药品、准医药品、化妆品、或饲料的成分使用。理想的是，本发明的胶囊可以作为经口使用的经口组合物(食品组合物、经口用的医药或准医药组合物、及饲料组合物)的成分使用。另外，经口组合物中包含所有的可摄食体内的可食性组合物和无论是否摄食，但在口腔内使用的口腔用组合物。
本发明的微囊[“糖类等”附着(包敷)的微囊]根据其中内含的成分的种类，可以有各种用途。分别进行如下制备，例如内含香料的微囊作为香料(微囊化香料)、内含甜味料的微囊作为甜味料(微囊化甜味料)、内含调味料的微囊作为调味料(微囊化调味料)、内含酸味料的微囊作为酸味料(微囊化酸味料)、内含苦味料的微囊作为苦味料(微囊化苦味料)、内含香辛料的微囊作为香辛料(微囊化香辛料)、内含着色料的微囊作为着色料(微囊化着色料)，可以有各种用途。
本发明的微囊适合作为以在口腔内保持，或在口腔内咀嚼摄取的形态的经口组合物的配合成分。涉及的经口组合物例如有口香糖、粘糖或牛轧糖等软糖果等、通过咀嚼而摄取的点心或嗜好品(食品组合物)、以及象咀嚼锭、咀嚼剂、颗粒剂、糖锭、口腔锭、以及洁齿剂等一样，在口腔内长时间保持，或者边咀嚼边摄取的医药组合物和准医药组合物。优选象口香糖一样通过在口腔内长时间咀嚼而摄取。另外所述的口香糖的概念包括属于广泛所指口腔内咀嚼摄取的糖的球糖。
本发明提供一种含有所述的表面包敷“糖类等”的微囊(“糖类等”附着(包敷)的微囊本发明的微囊)的经口组合物。如前所述，本发明综合在口腔内使用的物质(口腔内组合物)以及经口摄入体内(摄食)的物质，称作经口组合物，其中包含食品组合物、经口用医药或准医药组合物，以及饲料组合物。
同样具体的经口组合物例如有如前所述的口香糖、粘糖或牛轧糖等软“糖果等”，通过在口腔内长时间咀嚼而摄取的点心或嗜好品(食品组合物)、以及象咀嚼锭、咀嚼剂、颗粒剂、糖锭、口腔锭、以及洁齿剂等一样，不管是否咀嚼，在口腔内长时间保持的医药组合物或准医药组合物等。优选食品组合物，特别优选口香糖。
本发明的经口组合物特别是食品组合物，尤其是口香糖，除含有上述“糖类等”附着(包敷)的微囊作为成分这点之外，可以包括公知的经口组合物、特别是食品组合物，尤其是口香糖的成分，或可以利用公知的制造方法进行制造。
最终得到的口香糖100重量％中所含的本发明的微囊(“糖类等”附着(包敷)的微囊)的比例没有限制，通常为0.05～10重量％、优选0.1～5重量％、特别优选0.5～3重量％。
配合于口香糖等经口组合物中的本发明的微囊对其用途没有特别限定，优选其内部含有香料、甜味料(含糖)、着色料、酸味料、维生素类、香辛料、动植物提取物、生理活性物质、调味料、苦味料、脂质、脂肪酸、氨基酸类、或酶中的至少一种。对于口香糖来说，特别优选的是可形成香味的成分(香味成分)、特别是香料、甜味料、酸味料、调味料或苦味料。内部含有这些香料、甜味料、酸味料、调味料或苦味料的本发明的微囊(经口组合物)可以分别作为微囊化香辣、微囊化甜味料、微囊化酸味料、微囊化调味料或微囊化苦味料，配合于口香糖(经口组合物)中。
这些外源性物质(香料、甜味料、着色料等)的具体成分例如有同样所述的物质，但是没有特别限定。例如，对于香料也可以使用上述例举的成分之外的香料成分。
在口香糖中配合的本发明的微囊以外的成分例如有胶基、甜味料(包括糖类)、色素、增稠剂、酸味料、软化剂。通常在口香糖中含有的胶基的比例为10～35％，优选20～30％重量％。另外甜味剂例如有蔗糖、果糖、液糖、葡萄糖、以及低聚糖等糖类；阿斯巴甜、三氯蔗糖、安赛蜜、索马甜、甜菊、阿力甜、新甜、木糖醇、糖精盐、以及甘草甜素等高甜度甜味料。
另外，口香糖的制备按照[胶基和胶产品技术(Gum Base andProducts Technology)以及美国口香糖大手册(The Great AmericanChewing Gum Book)](ロバ一ト·ヘンドリクソン著、カフオサ·ガムS/A公司发行(1974年))所述的方法和操作进行。这种情况，本发明的微囊的各成分可以任何工序进行配合，该微囊在内包象香料成分(特别是香料)或着色料等一样容易受热影响的外源性物质时，特别是为了防止加热导致的外源性物质变质(例如香味或颜色消失、劣化等)，优选在制造工序接近结束时配合。
(2)微囊的制造方法本发明涉及前述的本发明的微囊[“糖类等”附着(包敷)的微囊]的制造方法。该方法基本含有下述工序。
1)在微生物的菌体内加入外源性物质的工序在得到的菌体内含外源性物质的微生物的表面，附着选自由糖、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇构成的组中的至少一种的工序。
根据需要，在上述工序1)和2)之间，也可以包含微生物的分离、洗净、脱水、或干燥等任何处理工序，使菌体内含有外源性物质。
在上述1)工序中使用的微生物也可以使用预先从微生物的菌体内溶出内源性菌体内成分的物质。
在上述制造方法中使用的微生物、外源性物质、糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇的种类、以及从微生物的菌体内溶出内源性菌体内成分的方法、向菌体内添加外源性物质的方法、在微生物表面附着糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇的方法在前述(1)项中有记载，按照所述方法进行。
(2)香味显现的控制方法本发明涉及一种控制微生物菌体内含有外源性物质的微囊(内含外源性物质的微囊)中其外源性物质的释放速度、强度或持续性的方法，特别是提高外源性物质的释放速度、强度或持续性的方法。
所述方法基本上是通过在菌体内包含有外源性物质的微生物的表面上，附着选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇组成的组中的至少一种而实现的，在此用于包含外源性物质的微生物例如有所述的藻类、酵母、菌类或细菌，优选酵母。特别优选预先内源性菌体内成分被溶出的酵母。
上述方法中使用的酵母、外源性物质、糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇的种类、以及使内源性成分从微生物的菌体内溶出的方法、向菌体内添加外源性物质的方法、在微生物表面附着糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇的方法都在前述(1)项中有记载，本发明也按照所述方法进行。另外，糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇(“糖类等”)的附着程度没有特别限定，可以在内含外源性物质的微生物的一部分表面上附着也可以在整体上覆盖。另外，这种情况下，对“糖类等”侵入或浸润微生物的细胞壁或菌体内部的程度没有任何限制。在内含外源性物质的微生物的表面上附着(包敷)的“糖类等”的比例没有特别限定。以干燥固体成分的重量比计算，相对于包含外源性物质的微生物100重量份，“糖类等”为1～90重量份，优选10～50重量份，特别优选20～40重量份的比例。通过这样得到的微囊[“糖类等”附着(包敷)的微囊]可以控制内部所含的外源性物质的释放速度、强度或持续性。特别是[“糖类等”附着(包敷)的微囊]在水存在下，特别是通过置于口腔内充分显现所述的效果。因此本发明的方法适用于控制口腔内的香味显现速度、强度或持续性。
因而本发明提供一种适当地控制微生物菌体内含有外源性物质的微囊(内含香味成分的微囊)中，其香味的显现速度、强度或持续性的方法，特别是提高香味的显现速度、强度或持续性的方法。
所述香味成分只要是可以形成香味(香气或气味)的物质就可以，没有限制，具体例如香料、甜味料(包括糖类)、酸味料、调味料、苦味料、香辛料、脂质、维生素、氨基酸类、及动植物提取物等。优选使用香料、甜味料(包括糖类)、酸味料、调味料、苦味料、及香辛料，特别优选使用香料、甜味料，更优选香料。所述成分优选适合食品使用的任何可食性的成分。特别优选疏水性香料等的疏水性成分。
使内含香味成分的维生素(微囊)的表面上，附着“糖类等”而得到的[“糖类等”附着(包敷)的微囊]比内含香味成分的微囊本身，具有在口腔内香味显现速度快、并且适当强度的香味持续时间长的效果。
本发明的方法用于控制包在微囊(微生物菌体)的香味成分从胶囊释放，也就是本发明的方法作为提高香味成分(香料、甜味料、酸味料、调味料、苦味料、香辛料、脂质、维生素、氨基酸类、及动植物提取物等)的香味显现速度、强度及持续性的技术是有用的。
在此使用的本发明的微囊[“糖类等”附着(包敷)的微囊]，作为香味成分(例如香料、甜味料、酸味料、调味料、苦味料、香辛料、脂质、维生素、氨基酸类、及动植物提取物等)配合于食品等经口组合物中，由此可以控制该经口组合物中的香味显现速度、强度及持续性。
因此本发明提供一种控制食品等经口组合物的香味显现速度、强度或持续性的方法，特别是提高香味显现速度、强度或持续性的方法。在此所述的适合经口组合物例如是在口腔内长期保持，或者在口腔内长期咀嚼使用的组成物、例如口香糖或软糖等食品组成物、或者咀嚼片、咀嚼剂、口腔锭或洁齿剂等医药组成物或医药外部组成物。优选口香糖。制造方法是使用上述[“糖类等”附着(包敷)的微囊]作为选定的经口组合物的成分，换言之使用[“糖类等”附着(包敷)的微囊]作为1个成分，制备特定的经口组合物的。经口组合物、特别是口香糖的制备方法、以及制备中使用的[“糖类等”附着(包敷)的微囊]的比例等都在所述(1)项中有记载，按照所述方法进行。
实施例下面，利用实施例、比较例和试验例具体说明本发明的内容。但本发明不限于此。另外只要没有特别说明，下述所述的方法的单位中，份是指重量份，％是重量％。
实施例1～6内包有香料的糖类附着(包敷)的微囊[除去了菌体内成分]<微囊化香料>
(1)酵母菌体内的内源性成分的除去向啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)100g分散于水的泥状液2000g中添加蛋白酶2g，之后在温度50℃下振荡20小时，使菌体内成分溶至菌体外。得到的浆液以8000转旋转30分钟，离心分离，除去上清液，得到酵母菌残渣350g(干燥固体成分20％)。在其中添加水930g和浓盐酸120g，搅拌下在80℃加热10分钟(酸处理)，之后冷却。然后以8000转旋转30分钟，离心分离，除去上清液，得到酸处理酵母菌残渣500g(干燥固体成分10％)。然后，在其中添加水500g，以8000转旋转30分钟，离心分离，除去上清液，向得到的残渣500g(干燥固体成分10％)中添加10％氢氧化钠水溶液，调整pH为7.0。
(2)向酵母菌体内封入香料将如上制备的、含有除去了菌体内的内源性物质的酵母的水分散液(干燥固体成分10％)450g加热至70℃，向其中添加25g薄荷醇，以5000rpm搅拌2小时，使该酵母菌体内封入香料(薄荷醇)(内包香料的酵母)。
(3)向酵母菌体表面附着糖类(包敷)准备6种含有如上制备的内包香料的酵母的水溶液475g，分别向其中添加混合升温至60℃的含50％乳糖的水溶液60g(实施例1)、含50％糊精(DE＝10)的水溶液60g(实施例2)、含50％麦芽糖的水溶液60g(实施例3)、含50％还原帕拉金糖的水溶液60g(实施例4)、含25％明胶的水溶液120g(实施例5)、以及含有15％明胶和15％乳糖的水溶液100g(实施例6)。然后将这些混合溶液添加至喷雾干燥机中，在进口温度150℃，出口温度90℃的条件下进行干燥喷雾，得到粉末状的[糖类附着/内包香料的微囊[除去了菌体内成分]](实施例1～6)各90g。
实施例7内包有香料的糖类附着(包敷)的微囊[含有菌体内成分]<微囊化香料>
取代上述实施例1中使用的除去菌体内的内源性成分的酵母，使用含有内源性成分的啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，其余和实施例相同，(使用50％乳糖的水溶液)，得到粉末状的糖类附着/内包有香料的微囊[含有菌体内成分](实施例7)。
具体地按照上述实施例1中(2)的方法，将含有啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)45g的水溶液450g升温至70℃，向其中添加薄荷醇25g，以5000rpm搅拌2小时，向该酵母菌体内加入香料(薄荷醇)(内包香料的酵母)。按照上述实施例1中(3)的方法，添加混合升温至60℃的含50％乳糖的水溶液30g。然后将该混合溶液添加至喷雾干燥机中，在进口温度150℃，出口温度90℃的条件下进行干燥喷雾，得到粉末状的[糖类附着/内包香料微囊[含有菌体内成分](实施例7)90g。
实施例8～14口香糖用实施例1～7制备的内包香料的微囊作为香料成分(微囊化香料)，按照以下配方分别制备口香糖(实施例8～14)。另外利用通常的方法制备口香糖。
口香糖配方胶基 25份砂糖 62份玉米糖浆 10份甘油 1份微囊化香料2份合计 100份实施例15内包有香料的糖类附着(包敷)的微囊[除去菌体内成分]<微囊化香料>
将根据实施例1(1)的方法制备的除去了菌体内的内源性成分的酵母悬浊在水中制备了酵母溶液(干燥固体成分10％)，将该酵母溶液450g加热到70℃，在其中添加橙皮油25g并以5000rpm搅拌2小时。然后，在其中添加加热到60℃的含有50％乳糖的水溶液60g并混合，然后，将该混合溶液置于喷雾干燥机中，在入口温度150℃、出口温度90℃条件下进行喷雾干燥，得到“粉末状的糖类附着/包敷的微囊[除去了菌体内成分]”(实施例15)90g。
比较例1内包香料的微囊[除去了菌体内成分]根据与实施例1(1)的方法同样制备的、除去了菌体内的内源性成分的酵母悬浊在水中制备了酵母溶液(干燥固体成分10％)643g。将其加热到70℃，加入36g薄荷醇并在5000rpm搅拌2小时。然后，将该混合溶液置于喷雾干燥机中，在入口温度150℃、出口温度90℃条件下进行喷雾干燥，得到粉末状微囊(内包香料的微囊[除去了菌体内成分])(比较例1)90g。
比较例2内包香料的微囊[除去了菌体内成分]与乳糖的混合组合物在比较例1制备的粉末状微囊(内包香料的微囊[除去了菌体内成分])70g中配合30g粉末状乳糖并混合，得到了含有粉末状的微囊的组合物(内包香料的微囊[除去了菌体内成分]+乳糖)98g(比较例2)。
比较例3内包香料的微囊[含有菌体内成分]
将啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)75g悬浊在水中制备了酵母溶液(干燥固体成分10％)750g。将其加热到70℃，添加薄荷醇25g并在5000rpm搅拌2小时。然后，将该混合溶液置于喷雾干燥机中，在入口温度150℃、出口温度90℃条件下进行喷雾干燥，得到粉末状微囊(内包香料的微囊[含有菌体内成分])(比较例3)90g。
比较例4～6口香糖使用比较例1～3制备的微囊作为香料成分(微囊化香料)，与上述实施例8～14同样地制备了口香糖(比较例4～6)。
比较例7内包香料的微囊[除去了菌体内成分]将与实施例1的1(1)的方法同样制备的除去了菌体内的内源性成分的酵母悬浊在水中制备了酵母溶液(干燥固体成分10％)750g。将其加热到70℃，添加薄荷醇25g并在5000rpm搅拌2小时。然后，将该混合溶液置于喷雾干燥机中，在入口温度150℃、出口温度90℃条件下进行喷雾干燥，得到粉末状微囊(内包香料的微囊[除去了菌体内成分])(比较例7)90g。
比较例8微囊化香料(非微生物)将阿拉伯树胶30g和乳糖30g溶解于水中，制备了溶液(干燥固体成分30％)，将该溶液250g加热到50℃，添加薄荷醇25g并在5000rpm搅拌2小时。然后，将该混合溶液置于喷雾干燥机中，在入口温度150℃、出口温度90℃条件下进行喷雾干燥，得到粉末状的微囊化香料90g。
实验例1对于实施例1和比较例2制备的内包香料的微囊(微囊化香料)，评价了香味的显现和持续性(实施例1乳糖附着/内包香料的微囊[除去了菌体内成分]，比较例2内包香料的微囊[除去了菌体内成分]+乳糖)。具体地，对于使用微囊化的香料(实施例1、比较例2)作为香料成分制备的口香糖(实施例8，比较例5)，由6名专门参与者以每分钟75次的频率进行咀嚼。作为对照，同样地对使用比较例1的微囊(微囊化的香料内包香料的微囊[除去了菌体内成分])作为香料成分制备的口香糖(比较例4)进行咀嚼，与此时的香味的显现速度、强度及持续性相比，评价了其香味的显现速度、强度和持续性。另外，评价是以对照口香糖(比较例4)的香味的显现速度、强度和持续性作为3，根据表1所示的标准进行。
<表1>
<表2>
*表中，例如“实施例1/8”和“比较例2/5”分别表示实施例1和实施例8双方、比较例2和比较例5双方。下表同。
如实施例8的口香糖的结果所示，通过使用在内包香料的酵母(除去了菌体内成分)的表面包敷乳糖的微囊化香料(实施例1)作为香料成分，可以制备香味显现快、香味强、和香味持续性长的口香糖(实施例8)另外，仅将内包香料的酵母(除去了菌体内成分)与乳糖混合而制备的微囊化香料(比较例2)用作香料成分制造的口香糖(比较例5)的香味显现速度、强度和持续性均与对照口香糖(香味的显现速度、强度和持续性3.0)没有大的差别，比本发明实施例8的口香糖差得多。由此可以看出，通过在内包香料的酵母的表面附着或者包敷乳糖，与仅将该酵母与乳糖混合相比，可以得到本发明特有的效果。
实验例2对于未除去酵母菌体的内源性的菌体内成分制备的实施例7和比较例3的微囊化香料(实施例7乳糖附着/香料内包的微囊[含有菌体内成分]，比较例3香料内包的微囊[含有菌体内成分])，使用其作为香料成分制备了口香糖(实施例12和比较例6)，使用该口香糖，与实施例1同样地评价了香味的显现速度、强度和持续性。结果如表3所示。
<表3>
从该结果可以看出，使用未除去酵母菌体内的内源性成分而内包香料、并在该表面上附着乳糖而制作的微囊化的香料(使用实施例7乳糖附着/香料内包的微囊[含有菌体内成分])制备的口香糖(实施例14)与使用未附着糖类而制作的微囊化香料(比较例3内包香料的微囊[含有菌体内成分])制备的口香糖(比较例6)相比，显现速度、强度和持续性均显著优良。
实验例3使用糊精(DE10)(实施例2)、麦芽糖(实施例3)、或者还原帕拉金糖(实施例4)代替乳糖作为酵母表面的包敷成分，制备了微囊化香料(实施例2糊精附着/香料内包的微囊[除去了菌体内成分]，实施例3麦芽糖附着/香料内包的微囊[除去了菌体内成分]，实施例4还原帕拉金糖/香料内包的微囊[除去了菌体内成分])，使用这些微囊化香料，与实施例8同样地制备了口香糖(实施例9～11)。对于这些口香糖，与实施例1同样地评价了香味的显现(速度、强度)和持续性。结果与实施例8的口香糖(使用乳糖)的结果一并示于表4中。
<表4>
从实施例9和10的结果可以看出，表面包敷糊精(DE10)和麦芽糖的微囊化香料其香味显现的强度与对照(比较例4)相比几乎没有变化，但是香味的持续性显著提高。另外，从实施例11的结果可以看出，表面包敷还原帕拉金糖的微囊化香料，其香味显现的强度显著提高。
另外，实施例12和13的结果可以看出，表面包敷明胶+乳糖的微囊化香料其香味的显现强度比对照(比较例4)弱，但香味的持续性显著提高。
实验例4对于实施例15及比较例7、8的微囊，评价了其香味的强度、持续性(实施例15糖类附着/香料内包的微囊[除去了菌体内成分]，比较例7香料内包的微囊[除去了菌体内成分]，比较例8微囊化的香料(非微生物))。
具体地，将上述得到的微囊各50g装入聚合物袋中密封，在50℃保存1个月。为调查微囊内包的香料的持续性，测定了保存1个月后的微囊的萜二烯的含量，以保存前的萜二烯含量为100％进行计算，求出了萜二烯(橙皮香料)的残存率。另外，实施例15和比较例7、8制备的微囊(保存前)中所含的萜二烯对于每100％微囊均为23％。
另外，为调查保存引起的香料变质，将在50℃保存1个月前与保存后的微囊各自制作了0.1％水溶液，由专门的参与者6名对于该香料的0.1％水溶液的香味进行了评价。结果如表5所示。
<表5>
从这些结果可以看出，通过用糖类包敷内包香料的酵母(微囊)(实施例15)，香味的持续性可以提高，并且可以显著防止内包的香料的变质。
工业实用性根据本发明，对于在菌体内包含外源性物质的微生物(微囊)而言，可以控制该外源性物质的释放速度、强度、或者持续性。该外源性物质的释放速度、强度、或持续性被控制、改善的微囊，根据其中包含的外源性物质，可以应用于食品、医药品、准医药品、化妆品、日用杂货等的各种制品中。例如，含有可食性香料的本发明的微囊，可以用作例如口香糖的香料成分，使用该微囊作为香料制备的口香糖，根据附着的糖类和多元醇的种类，可以发挥在口腔内迅速显现香味、在口腔内显现强的香味、或者香味长时间持续的效果。
权利要求
1.一种微囊，其中在菌体内包含外源性物质的微生物的表面上，附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种。
2.如权利要求1所述的微囊，其中在菌体内包含外源性物质的微生物是内源性的菌体内成分被溶出的微生物。
3.如权利要求1或2所述的微囊，其中，微生物为酵母。
4.如权利要求1～3任何一项所述的微囊，其中，糖类是选自由单糖类、二糖类、三糖类、四糖类、低聚糖、多糖类及糖醇组成的组中的至少一种。
5.如权利要求1所述的微囊，其特征在于，在微生物的表面附着有选自由乳糖、麦芽酮糖、海藻糖、还原帕拉金糖、糊精、甘油、丙二醇、聚甘油、及聚丙二醇组成的组中的至少一种。
6.如权利要求1所述的微囊，其中，在微生物的菌体内包含的外源性物质为疏水性物质。
7.如权利要求1所述的微囊，其中，包含于微生物的菌体内的外源性物质为选自由香料、着色料、酸味料、调味料、苦味料、香辛料、甜味料、脂质、脂肪酸、氨基酸类、酶、维生素类、动植物提取物及生理活性物质组成的组中的至少一种。
8.如权利要求1所述的微囊，其可以作为食品、医药品、准医药品、化妆品或饲料的成分使用。
9.一种微囊的制造方法，包括(1)使微生物的菌体内包含外源性物质的工序，(2)使工序(1)得到的微生物的表面上附着选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类和多元醇组成的组中的至少一种的工序。
10.如权利要求9所述的微囊的制造方法，其中(1)的工序是使用内源性菌体内成分被溶出的微生物，使该微生物的菌体内包含外源性物质的工序。
11.一种经口组合物，其中含有如权利要求1所述的微囊。
12.如权利要求11所述的经口组合物，其含有权利要求1所述的微囊作为香料、着色料、调味料、酸味料、苦味料、香辛料或甜味料。
13.如权利要求11所述的经口组合物，其是一种在口腔内长期保持，或者在口腔内长期咀嚼的物质。
14.如权利要求11所述的经口组合物，其为口香糖。
15.一种控制在微生物的菌体内包含外源性物质的微囊的外源性物质的释放速度、强度或持续性的方法，其特征在于，使所述微囊的表面上附着选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种。
16.如权利要求15所述的方法，其为控制在微生物的菌体内包含香味成分的微囊的香味的显现速度、强度或持续性的方法。
17.如权利要求16所述的方法，其中在微生物的菌体内包含香味成分的微囊是在内源性的菌体内成分被溶出的微生物的菌体内包含有香味成分的微囊。
18.如权利要求15所述的方法，其为提高香味的显现速度、强度或持续性的方法。
19.一种控制经口组合物的香味的显现速度、强度或持续性的方法，包括步骤将在菌体内包含香味成分的微生物的表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊，配合于经口组合物中。
20.如权利要求19所述的方法，其中在菌体内包含香味成分的微生物是内源性菌体内成分被溶出的微生物。
21.如权利要求19所述的方法，其为提高经口组合物的香味的显现速度、强度或持续性的方法。
22.在菌体内包含外源性物质的微生物表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊作为香料、甜味料、着色料、调味料、酸味料、香辛料或苦味料的应用。
23.在菌体内包含有香味成分的微生物表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊在制备经口组合物中的应用。
24.在菌体内包含香味成分的微生物表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊在制备香味的显现速度、强度或持续性得到改善的经口组合物中的应用。
25.在菌体内包含香味成分的微生物表面上附着有选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种的微囊在提高经口组合物的香味显现速度、强度或持续性中的应用。
全文摘要
本发明提供微生物的菌体内包含的外源性物质的释放速度、强度或持续性优良的微囊。另外，提供该微囊的制造方法、或者含有该微囊的经口组合物。通过使菌体内包含外源性物质的微生物的表面上附着选自由糖类、高甜度甜味料、蛋白质类及多元醇组成的组中的至少一种可以实施。
文档编号A23G4/00GK1589106SQ0282276
公开日2005年3月2日 申请日期2002年11月15日 优先权日2001年11月15日
发明者佐佐木泰司, 折越英介, 林英生, 前田荣彰 申请人:三荣源有限公司