专利名称：油菜花粉发酵破壁新方法
技术领域：
本发明涉及一种油菜花粉发酵破壁新方法。
背景技术：
花粉(pollen)是植物雄性配子体，植物高度浓缩的“微型营养库”，其不仅含有人体生存所需的多种营养物质，而且含有多种生物活性物质，对肌体的各种生理功能具有奇妙的调节作用，可以增强体质、提高免疫力、延缓衰老、降低血压等，被誉为“完全营养品”。花粉是由花粉壁和内含物(或原生质，花粉主要营养物质)所组成，花粉壁可分为外壁与内壁，外壁主要由孢粉素和纤维素组成，内壁主要由纤维素和果胶组成；由于组成壁成分性质的独特性导致花粉细胞壁难于破损。这既影响了营养成分的吸收利用，也阻止了提取时营养物质的释放。据统计，我国目前花粉资源利用率仅是一般资源量的1/24，为最高资源量的1/240。因此花粉的破壁十分重要。许多研究都证明了破壁后花粉的营养效果较破壁前好的多。
迄今为止，有关油菜花粉破壁的工艺有过很多报道，目前常用的破壁方法多为物理法(如高压气流碰撞法、超声波法、冷冻加热法、膨化法等)，主要存在的问题有1)对设备和工作条件要求高，投入大，不宜推广和实施产业化；2)破壁率低；3)利用温差法时，由于温度的变化过大，导致花粉营养物质的极大破坏。
发明内容
本发明目的是提供一种油菜花粉发酵破壁新方法。
油菜花粉破壁的步骤如下1)培养基制备(1)豆用粉碎机碾碎，按1∶8-12的比例加水，在高压锅中蒸煮60-80min，用纱布过滤，或将黄豆包在纱布中蒸煮，提取黄豆汁，按黄豆∶蔗糖∶琼脂＝8-12∶2-4∶3-5的比例制备培养基；(2)虎红培养基按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g，葡萄糖8-12g，磷酸二氢钾1-2g，硫酸镁0.3-0.6g，琼脂18-22g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解后，再加入1/3000虎红水溶液80-120ml，分装后，高压灭菌；
(3)霉菌培养基按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g，酵母浸出液1-3g，磷酸氢二钾0.5-1.5g，硫酸镁0.3-0.6g，琼脂18-20g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解(微温)，调pH为6.5-7.0，煮沸，加18-20g葡萄糖，溶解后，过滤调pH为6.0±0.5，使灭菌后pH为6.4±0.2，高压灭菌；(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基将马铃薯去皮切块，加蒸馏水，煮沸10-20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml，加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌；2)灭菌、接种将刚制备的培养基趁热分装于培养皿中(10-15ml)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌15-20min，冷却至室温，在超净工作台上接种试管菌种，置28-30℃的恒温培养箱中培养；3)曲子制备采用麦麸培养基，每100g原料加水40-45g，搅拌均匀后，分装于的三角瓶(每瓶30-40g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌10-20min，冷却至室温，在超净工作台将培养皿中30-40％的菌种接入三角瓶，在28-30℃的恒温培养箱中发酵；4)酶液制备将已发酵完全的曲子方入适量的温水，约为原料的70-100％，浸泡3-4小时，然后用外力积压曲子，收集发酵液，得酶液；5)发酵酶液将油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝1-3∶1)按9-12∶14-16的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37±0.5℃发酵11-14小时，pH为4-5，即可得破壁花粉。
本发明的优点是1)需要的设备简单，成本低，易实现产业化；2)生产工艺简捷、易操作；3)破壁率高，达98％以上，对营养成分破坏较小；4)能够改良花粉的脱敏、脱苦、脱涩等。
具体实施例方式
2)虎红(孟加拉红)培养基将蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g，琼脂20g，1/3000虎红水溶液100ml，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液，分装后，高压灭菌(121℃，20min)。
3)霉菌培养基将蛋白胨5g，酵母浸出液2g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g，琼脂20g，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解，调pH为6.8，煮沸，加20g葡萄糖，溶解后，过滤调pH为6.6，使灭菌后pH为6.5，高压灭菌(115℃，20min)。
4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)将马铃薯去皮切块，加蒸馏水，煮沸20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml，加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌(121℃，20min)。
2、灭菌、接种将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中，每个培养皿中10ml，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌15min，冷却至室温，在超净工作台上接种试管菌种，置29℃的恒温培养箱中培养48小时。
3、曲子制备采用麦麸培养基，每100g原料加水40g，搅拌均匀后，分装于250ml的三角瓶(每瓶35g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌15min，冷却至室温，在超净工作台将培养皿中35％的菌种接入三角瓶，在30℃的恒温培养箱中发酵36小时。
4、酶液制备将已发酵完全的曲子方入适量的温水，约为原料的90％，浸泡3小时，然后用手积压曲子，收集发酵液，得酶液。
5、发酵酶液将油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝2∶1)按10∶15的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵12小时，pH为4.5，即可得破壁花粉。
6、破壁效果破壁率为100％。
2)虎红(孟加拉红)培养基将蛋白胨6g，葡萄糖12g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.6g，琼脂22g，氯霉素0.2g，加入1000ml蒸馏水中溶解后，再加1/3000虎红水溶液120ml，分装后，高压灭菌(121℃，30min)。
3)霉菌培养基将蛋白胨6g，酵母浸出液3g，磷酸氢二钾1.5g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.6g，琼脂20g，氯霉素0.2g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解，调pH为6.8，煮沸，加20g葡萄糖，溶解后，过滤调pH为6.8，使灭菌后pH为6.4，高压灭菌(115℃，30min)。
4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)将马铃薯去皮切块，加蒸馏水，煮沸20min。用纱布过滤，用蒸馏水定容至1000ml，加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌(121℃，30min)。
2、灭菌、接种将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中，每个培养皿加入15ml，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌30min，冷却至室温，在超净工作台上接种试管菌种，置30℃的恒温培养箱中培养48小时。
3、曲子制备采用麦麸培养基，每100g原料加水45g，搅拌均匀后，分装于250ml的三角瓶(每瓶40g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌20min，冷却至室温，在超净工作台将培养皿中40％的菌种接入三角瓶，在30℃的恒温培养箱中发酵36小时。
4、酶液制备将已发酵完全的曲子放入适量的温水，约为原料的100％，浸泡4小时，然后用手积压曲子，收集发酵液，得酶液。
5、发酵酶液将油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝3∶1)按11∶16的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵14小时，pH为5.0，即可得破壁花粉。
6、破壁效果破壁率为99.1％
6、破壁效果破壁率为98.5％。
权利要求
1.一种油菜花粉发酵破壁新方法，其特征在于它的破壁步骤如下1)培养基制备(1)豆用粉碎机碾碎，按1∶8-12的比例加水，在高压锅中蒸煮60-80min，用纱布过滤，或将黄豆包在纱布中蒸煮，提取黄豆汁，按黄豆∶蔗糖∶琼脂＝8-12∶2-4∶3-5的比例制备培养基；(2)虎红培养基按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g，葡萄糖8-12g，磷酸二氢钾1-2g，硫酸镁0.3-0.6g，琼脂18-22g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解后，再加入1/3000虎红水溶液80-120ml，分装后，高压灭菌；(3)霉菌培养基按每1000ml蒸馏水中加入蛋白胨4-6g，酵母浸出液1-3g，磷酸氢二钾0.5-1.5g，硫酸镁0.3-0.6g，琼脂18-20g，氯霉素0.1-0.2g的比例溶解(微温)，调pH为6.5-7.0，煮沸，加18-20g葡萄糖，溶解后，过滤调pH为6.0±0.5，使灭菌后pH为6.4±0.2，高压灭菌；(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基将马铃薯去皮切块，加蒸馏水，煮沸10-20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml，加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌；2)灭菌、接种将刚制备的培养基趁热分装于培养皿中(10-15ml)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌15-20min，冷却至室温，在超净工作台上接种试管菌种，置28-30℃的恒温培养箱中培养；3)曲子制备采用麦麸培养基，每100g原料加水40-45g，搅拌均匀后，分装于的三角瓶，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌10-20min，冷却至室温，在超净工作台将培养皿中30-40％的菌种接入三角瓶，在28-30℃的恒温培养箱中发酵；4)酶液制备将已发酵完全的曲子方入适量的温水，约为原料的70-100％，浸泡3-4小时，然后用外力积压曲子，收集发酵液，得酶液；5)发酵酶液将油菜花粉真空烘干，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用；将粉碎均匀的花粉和酶液按9-12∶14-16的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37±0.5℃发酵11-14小时，pH为4-5，即可得破壁花粉。
2.根据权利要求1所述的一种油菜花粉发酵破壁新方法，其特征在于它的破壁步骤如下1)培养基制备(1)黄豆用粉碎机碾碎，按1∶10的比例加水，在高压锅中蒸煮65min，用纱布过滤，提取黄豆汁，按10mg黄豆，3mg蔗糖，4mg琼脂的比例制备培养基，pH自然状态。(2)虎红(孟加拉红)培养基将蛋白胨5g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g，琼脂20g，1/3000虎红水溶液100ml，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液，分装后，高压灭菌(121℃，20min)。(3)霉菌培养基将蛋白胨5g，酵母浸出液2g，磷酸氢二钾1g，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.5g，琼脂20g，氯霉素0.1g，加入1000ml蒸馏水中，微温溶解，调pH为6.8，煮沸，加20g葡萄糖，溶解后，过滤调pH为6.6，使灭菌后pH为6.5，高压灭菌(115℃，20min)。(4)马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)将马铃薯去皮切块，加蒸馏水，煮沸20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml，加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，高压灭菌(121℃，20min)。2)灭菌、接种将刚制备的培养基趁热分装于Φ9cm的培养皿中，每个培养皿中10ml，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌15min，冷却至室温，在超净工作台上接种试管菌种，置29℃的恒温培养箱中培养48小时。3)曲子制备采用麦麸培养基，每100g原料加水40g，搅拌均匀后，分装于250ml的三角瓶(每瓶35g原料)，在1.4Kg/cm2，121℃条件下灭菌15min，冷却至室温，在超净工作台将培养皿中35％的菌种接入三角瓶，在30℃的恒温培养箱中发酵36小时。4)酶液制备将已发酵完全的曲子方入适量的温水，约为原料的90％，浸泡3小时，然后用手积压曲子，收集发酵液，得酶液。5)发酵酶液将油菜花粉真空烘干(含水量＜5％)，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液(黑曲霉酶液∶米曲霉液＝2∶1)按10∶15的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37℃发酵12小时，pH为4.5，即可得破壁花粉。
全文摘要
本发明公开了一种油菜花粉发酵破壁新方法。油菜花粉破壁的步骤如下1)培养基制备2)灭菌、接种；3)曲子制备；4)酶液制备将已发酵完全的曲子放入温水，约为原料的70－100％，浸泡3－4小时，然后用外力积压曲子，收集发酵液，得酶液；5)发酵酶液将油菜花粉真空烘干，粉碎过筛，得均匀花粉粒，用无水酒精喷洒灭菌，放入Φ20cm的培养皿中真空烘干备用。将粉碎均匀的花粉和酶液，按9－12∶14－16的比例多次混合均匀，置培养皿中于恒温培养箱中37±0.5℃发酵，即可得破壁花粉。本发明的优点是1)需要的设备简单，成本低，易实现产业化；2)生产工艺简捷、易操作；3)破壁率高，达98％以上，对营养成分破坏较小；4)能够改良花粉的脱敏、脱苦、脱涩等。
文档编号A23L1/076GK1452888SQ0311599
公开日2003年11月5日 申请日期2003年3月24日 优先权日2003年3月24日
发明者沈生荣, 于海宁, 白骅 申请人:浙江大学