专利名称：鹿茸组织细胞简易培养方法
技术领域：
本发明属于生物技术范畴的鹿茸组织细胞简易培养方法。
自从国家授予第2523号发明专利“鹿茸组织细胞培养方法”受到权利保护以来，我与从业者经14年努力鹿茸细胞培养已发展到细胞工程阶段，像生产疫苗与某些生化产品一样利用Gmp车间大规模培养鹿茸细胞的梦想已经实现。能以工业化生产鹿茸物质并开发药用，为人类保健做贡献。
鹿茸这种特殊的生物体及细胞培养技术和自然界生物物种及相应的生物技术、同样在遵循自身的个性向前发展着。鹿茸每日生长1-2公分以上，增重10余克，是哺乳动物中生长最快的细胞，由于其细胞体内含有大量促生长物质，代谢旺盛，优存劣汰种原细胞新老交替较快，故在鹿茸细胞大规模生产过种中需要不断培育和优化种原，第2523号原法已不能完全满足培育种原所需。
将天然鹿茸转化为离体生长，任何方法都需经过取材与驯化静止培养两个重要步骤。权利要求1所述特征，表明鹿茸组织细胞简易培养法比原法更为新颖，有更大的创造力，且简易实用可行，成本低、成功率高，与大规模生产相适应。其特征是1、第2523号专利原法，利用锯下的鹿茸送往试验室取材，血液循环至少已终止2小时，鹿茸组织已进入窒息亚健康状态。简易培养法用套管针在养鹿场从活体、活茸取材，组织细胞处于完全健康状态进入人工培养，细胞体内细胞器和分子结构没有受到损害。
2.培育优良细胞种原，必须选择优良种公鹿取材，每年锯茸一次，第2523号原法只能得到一次优质种原，而简易法活鹿穿剌可在生茸期阶段(60天左右)随机选取，一次多点有可重复性，一年多次，重复采取优质种原细胞。这对获得宝贵的生物材料非常重要。
3.原法必须将鹿茸剖开，取材所余鹿茸便由一等降至等外贬值千元以上。施行简易法取材穿剌后，以压迫法止血封闭鹿茸创孔，损伤在七日内完全修复，并不减慢生长速度，几乎无代价获得材料，将成本降至最低程度。
4.第2523号原法操作程序多，鹿茸表皮消毒、取材剖开以及材料处理接种培养等等操作往往造成污染，培养中途几乎全部痛心弃掉。简易培养法很少出现污染，培养成功率高达80％以上，可以顺利完成试验取得结果。
5.培养瓶单层瓶帽只能在室内接种材料，简易法将培养瓶在瓶口处多加一层胶塞，双层封闭，确保室外接种材料取得成功。
6.培养液是创造体外环境的关键，原法除牛血清外，主要由MEM构成，简易法增添了乳白蛋白水解物，鹿茸细胞得到充分的营养供应。
7.第2523号因种原来源有限，往往仅可限量培养。扩展种原培育种原时间长，难度较大。简易培养法种原广阔，时间短便于大量培育优质种源细胞，全面提升产品质量，满足生产需要，充分发挥生物技术的优越性。
权利要求
本发明是属于细胞工程方面的鹿茸组织细胞简易培养方法。在此项专利申请前14年，利用生物技术于Gmp超净试验室中用试管培养鹿茸组织细胞取得成功，获得第2523号发明专利。自此摆脱了养殖动物，以工业化方式生产鹿茸物质已经成为现实。我们在大规模生产过程中，须要经常不断的扩展和培养更加优良的细胞种原。此前发明的培养方法因成本高、技术烦琐、现从生产实践中独创了鹿茸组织细胞简易培养方法其特征是
1.在养鹿场操作，于生茸期选择优良种公鹿，做好术前准备，用套管针对活鹿、活茸定点穿刺。采取鹿茸生产带种母细胞，将针头贯穿到对侧，刺入装有细胞培养液的封闭式培养瓶，注入组织细胞，送入培养间37℃培养。连传至15代左右即可用于细胞种原，进入大规模培养。
2.根据专利要求1所述，优良种公鹿应为3-7岁健康壮龄鹿，年产茸量在4.5公斤以上，来自高产优质公鹿的种原细胞将决定细胞株系的质量和产量。
3.根据专利要求1所述，穿刺取茸法所用套管针长10公分(梅花鹿用)或15公分(马鹿用)、外径2.0毫米，内径1.2毫米，硬质不锈钢质材制成，外加塑质软套，针尾连接10毫升金属注射器。
4.根据专利要求1所述，针刺部位选茸尖生长点，茸顶向下1-3公分，沿同心圆周边选点，平行刺入贯穿至对侧。每次可多点取茸，每隔一周可重复一次。
5.根据专利要求1所述培养瓶系选自聚乙烯质材容量500毫升的扁形瓶，在超净间内加入80毫升培养液，于瓶口增加一层胶塞，在现场将其穿入针头注入组织细胞，外加瓶帽。送恒温室37℃培养，连续传代生产稳定形成细胞系即可用于种原。
6.根据专利要求1所述细胞培养液组成1％E-MEM 45％0.5乳白蛋白水解物 45％犊牛血清 10-20％调PH7.0-7.2
7.根据专利要求1、2、3、4、5、6所述特征，从鹿茸取材至完成培养形成细胞系(株)构成一套完整独特的鹿茸组织细胞简易培养法。
全文摘要
本发明是关于鹿茸组织细胞简易培养方法。在养鹿场对壮龄优良高产种公鹿正在生长的鹿茸，施以套管针穿刺、采取生长点鲜活的鹿茸母细胞，直接注入双层封闭的培养瓶中，于1％E－MEM0.5％水解乳白蛋白等量混合的加入10％犊牛血清培养液中生长传代。优化培育细胞系(株)缩短了种原培育周期。本法简易实用，能为大规模生产充分提供种原。
文档编号C12N5/06GK1597934SQ0315960
公开日2005年3月23日 申请日期2003年9月15日 优先权日2003年9月15日
发明者梁国坚 申请人:梁国坚, 张桂珍