专利名称：干细胞分泌因子及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种干细胞分泌因子及其制备方法和在化妆品、保健品以及再生医学中的应用。
背景技术：
干细胞分泌因子取自人胚胎干细胞以及多种胚胎组织分离纯化获得的成体干细胞(包括造血干细胞、神经干细胞、肝脏干细胞、皮肤干细胞、肌肉干细胞等等)，经数十代至上百代的培养传代而建成不同的干细胞系，或经基因修饰(包括Hoxb-4、端粒酶活性亚单位等)而建立的干细胞来源的永生细胞系，在干细胞增殖分化过程中会分泌出多种生长因子、蛋白质、活性多肽、微量元素等促进细胞生长、活化、再生等的物质。
干细胞分泌因子中含有各种生理作用极强的生长因子，其作用备受瞩目。生长因子是指“细胞分裂活化因子”，能够促进细胞增殖、分化，防止细胞衰老。结果，新陈代谢旺盛，老旧细胞不断被新细胞替换，同时使细胞活化。将此类干细胞分泌因子应用于化妆品、保健品及再生医学领域的研究未见报道。
发明内容
本发明的目的是1、提供一种促进细胞增殖分化、抗衰老的物质干细胞分泌因子；2、提供干细胞分泌因子的制备方法；3、提供干细胞分泌因子的用途。
本发明是这样实现的
干细胞米源的永生细胞系或经数十代至上百代的培养传代而建成的成体干细胞系，在干细胞增殖分化过程中分泌了大量的干细胞分泌因子，这是—种包含了生长因子、蛋白质、活性多肽、微量元素等多种促进细胞生长、活化与再生的物质。经过包括分离、纯化等现代生物技术的精密加工制成的精制干细胞分泌因子，能够促进细胞增殖、分化，防止细胞衰老。
将干细胞分泌因子以10～100μg/ml的比例加入到化妆品中可增强皮肤细胞的活力，对健康的皮肤具有抗衰老，增强皮肤弹性的功能，对损伤的皮肤能自动地进行护理、调养与修复，使皮肤变得更柔嫩、更富有弹性；同时由于干细胞分泌因子含有多种细胞因子，能够促进细胞的新陈代谢，是一种新的维持干/祖细胞增殖与分化的细胞因子来源。因而精制的干细胞分泌因子能够促进细胞的新陈代谢、增强机体免疫力以及抵抗细胞的衰老，在化妆品、保健品以及再生医学中具有极佳的应用前景，并将产生巨大的社会效益和经济效益。
具体实施例方式
实施例1、成体干细胞系的建立首先分离从多种胚胎组织来源的成体干细胞，经纯化后在体外无血清条件下传代20～40代培养，建立包括造血干细胞、神经干细胞、肝脏干细胞、皮肤干细胞、肌肉干细胞等成体干细胞系。或采用基因修饰手段，将Hoxb-4基因、端粒酶活性亚单位等转入成体干细胞，建立干细胞来源的永生细胞系。
细胞要求生长状态良好，每3～4天传代一次，无细菌、支原体等污染；传代细胞需经细胞遗传学、克隆形成实验、裸鼠致瘤实验等的检测，证实其为正常生长状态的细胞。
实施例2、干细胞分泌因子的获得与纯化在成体干细胞系或干细胞来源的永生细胞系培养过程中，干细胞的增殖、分化过程会分泌出许多生长因子、蛋白质、活性多肽、微量元素等等促进细胞生长、活化、再生的物质，通过分离、纯化等分子生物学手段，可获得精制的干细胞分泌因子。
干细胞分泌因子主要包括肝细胞生长因子(HGF)、神经生长因子(NGF)、表皮生长因子(EGF)、纤维母细胞生长因子(FGF)、胰岛素样成长因子(IGF)、造血干细胞剌激物质等。此外，干细胞分泌因子中还含有提高免疫力的因子，如各种集落刺激因子(CSFs)、多种白介素(IL-1、2、3、4、11、等)。
实施例3、干细胞分泌因子生物活性测定将人干细胞分泌因子注射剂按120μg/孔/天加入小鼠骨髓细胞中37℃培养，第2天计细胞数，并镜下观察细胞形态变化，与对照组相比给干细胞分泌因子组能够促进细胞的贴壁并刺激小鼠骨髓细胞的增殖。
实施例4、干细胞分泌因子在化妆品中的应用将干细胞分泌因子以10～100μg/ml的比例加入到化妆品的配方中，均质处理后制成化妆品。含有干细胞分泌因子的化妆品具有抗衰老，增强皮肤弹性的功能，对损伤的皮肤能自动地进行护理、调养与修复，使皮肤变得更柔嫩、更富有弹性。
实施例5、干细胞分泌因子在保健品中的应用将干细胞分泌因子与部分食品结合，可制成保健品。含有二者的保健品具有抗衰老、增强机体免疫力、促进损伤或衰老组织再生以及改善组织器官功能的作用。
实施例6、干细胞分泌因子在再生医学中的应用将干细胞分泌因子以10～200μg/ml的比例加入体外干/祖细胞培养体系中，发挥其促进细胞增殖与分化的功能。
权利要求
1.一种干细胞分泌因子及其制备方法与应用，其特征是干细胞来源的永生细胞系在干细胞增殖分化过程中分泌的，包含了生长因子、蛋白质、活性多肽、微量元素等多种促进细胞生长、活化、再生等的物质，其制备方法为干细胞来源的永生细胞系→增殖分化→培养上清→各种分泌物的分离，其用途为制造化妆品、保健品和应用于再生医学中。
2.根据权利要求1所述的干细胞来源的永生细胞系，其特征是取自人胚胎干细胞以及多种胚胎组织分离纯化获得的成体干细胞，经数十代至上百代的培养传代或经基因修饰而建立的不同的干细胞系。
3.根据权利要求2所述的成体干细胞，其特征是包含了造血干细胞、神经干细胞、肝脏干细胞、皮肤干细胞、肌肉干细胞等等在内的组织干细胞。
4.根据权利要求2所述的经基因修饰的干细胞来源的永生细胞系，其特征是经过包括Hoxb-4、端粒酶活性亚单位等在内的基因修饰而建立的干细胞系。
5.根据权利要求1所述的干细胞分泌因子的制备方法，其特征是对干细胞来源的永生细胞系在增殖分化过程中分泌的各种活性物质，应用分子生物学的各种手段将其精密加工而得。
6.根据权利要求1所述的干细胞分泌因子的化妆品用途，其特征是干细胞分泌因子以1∶50～1∶100的比例配入化妆品中，均质处理后，制成化妆品。
7.根据权利要求1所述的干细胞分泌因子的保健品用途，其特征是制备抗衰老、增强机体免疫力、促进损伤或衰老组织再生以及改善组织器官功能的保健品。
8.根据权利要求1所述的干细胞分泌因子的再生医学用途，其特征是应用干细胞分泌因子中促进细胞新陈代谢以及增殖分化的因子，并将其引入到再生医学的应用中。
全文摘要
本发明提供了干细胞分泌因子及其制备方法和在化妆品、保健品及再生医学中的应用。干细胞分泌因子，是一种干细胞来源的永生细胞系在干细胞增殖分化过程中所分泌的，包含了生长因子、蛋白质、活性多肽、微量元素等多种促进细胞生长、活化、再生等的物质，经过多步现代生物技术的精密加工而制成，能够促进细胞增殖、分化，防止细胞衰老。精制的干细胞分泌因子在化妆品、保健品以及再生医学中具有极佳的应用前景，并将产生巨大的社会效益和经济效益。
文档编号A23L1/305GK1618981SQ20031011501
公开日2005年5月25日 申请日期2003年11月20日 优先权日2003年11月20日
发明者裴雪涛, 闫舫, 王冬梅, 陈琳, 王韫芳, 岳 文, 白慈贤 申请人:中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所