专利名称：：抑制致癌细胞转移的基于檄树的制剂的制作方法抑制致癌细胞转移的基于檄树的制剂
背景技术：
：1.发明领域本发明涉及抑制致癌细胞的转移。尤其是，本发明涉及医药产品以及保健食品，而且尤其是涉及设计用来抑制、阻断和/或预防致癌细胞从原发癌部位转移的医药产品或保健食品。2.背景及相关技术转移是癌细胞从原发癌部位到身体另一部位的扩散或移动。尤其是，转移是指恶性癌细胞从它们原发部位到远处器官的移动或扩散。除了某些白血球细胞外，这是绝大多数正常细胞不能做的事情，并且这是癌症最致命的特征。尽管大量研究集中在这一领域，但是可用于转移性的癌症疾病病人的药物或治疗措施非常稀少而且对于研究科学家和内科的医生来说，寻找克服这种致命疾病的新的实体已成为近几十年来一项紧急的任务。超过50%的癌症病人死于转移。在转移过程中，肿瘤细胞穿透通常将一种组织另一种组织隔离的纤维界限。肿瘤也能够浸润血管或淋巴管壁并将癌细胞脱落进入循环系统。在血液中，这些肿瘤细胞被携带到下游并固定在下一个毛细血管床。例如从结肠癌脱落的肿瘤细胞经循环被携带到肝脏，在该处出现继发肿瘤。来自身体其他部位的肿瘤细胞可以由血液携带经过心脏并到达肺部，在该处它们引发转移性的肺肿瘤。脱落入淋巴系统的肿瘤细胞常常在最近的淋巴结组群固定下来，在扩散到身体更远的部位前它们在该处生长。从原发肿瘤脱落的细胞存活下来的不足1/10000，但是这足以在体内的其他部位产生继发肿瘤。大约30°/。的实性肿瘤新病人可检测到转移。大约一半的其余病人通过单独地对肿瘤进行治疗而治愈。其余的病人出现未能检测到的最终发展成为肿瘤的转移。肿瘤分期包括检测恶性肿瘤生长是否扩散超过原发肿瘤。这是决定病人预后的主要因素。早期检测的目标是在转移发生前除去原发肿瘤。不幸的是，一些肿瘤在它们足够大到得以发现之前已经发生转移。这种微转移的扩散可以解释为什么许多妇女甚至在早期检测到她们的原发肿瘤之后依然死于乳腺癌。因此转移是恶性癌细胞从它们的原发部位到远处器官的移动或扩散。超过50%的癌症病人死于转移。尽管大量研究集中在这一领域，但是可用于转移性的癌症疾病病人的药物或治疗措施非常稀少而且对于研究科学家和内科的医生来说，寻找克服这种致命疾病的新的实体已成为近几十年的一项紧急的任务因此，因此有效地抑制转移会成为一种技术上的进步。发明概述本发明涉及抑制致癌细胞的转移。尤其是，本发明涉及医药产品以及保健食品，而且尤其是涉及设计用来抑制、阻断和/或预防致癌细胞从原发癌部位转移的医药产品或保健食品。本发明的实施与包含用于治疗致癌细胞转移特别是用于转移的抑制、阻断和/或预防应用的一种或多种形式的加工的檄树制剂有关。至少本发明的一些实施方案包括治疗转移的一种营养制剂，其中该制剂包含有重量含量在大约0.01%与100%之间的一种或多种加工的檄树产品。在一些实施方案中，檄树产品包含檄树果汁或果汁浓缩品。在其他的实施方案中，檄树产品包含果泥汁或果泥浓縮品。同样地，这些物质一同和/或与其他的自然成分混合的化合物也正在设计之中。本发明另外的特色是抑制和预防致癌的细胞的转移并且破坏早期转移的致癌细胞的方法。该方法包括将一种加工的檄树产品加到基于醇的溶液中，从该溶液中分离和提取檄树的活性成分，将提取的活性成分引入遭受致癌细胞累及部位，其中提取的活性成分抑制和预防致癌细胞的进一步生长并且破坏早期转移的致癌细胞。至少一些实施方案中涉及来自檄树L果汁中乙醇不溶性的沉淀物抑制肿瘤的转移。檄树("檄树-PPT")的乙醇不溶性的沉淀物(聚糖)在黑色素瘤B16-F0细胞同系肿瘤转移模型中用来提供抗转移的活性。小鼠的研究结果发现每只小鼠0.8mg檄树-PPT显示22%的抑制效果(PO.005)。GPC(凝胶渗透色谱法)分析证明所述檄树-PPT包括四种分子量分别为879,2045、14，461及84,076道尔顿的不同分子。利用阴离子交换色谱法，MW84，076级分通过用0.1NNaCl洗脱檄树-PPT而获得。檄树-PPT和MW84，076的级分分别在10mg/ml和lmg/ml水平时使NRK2细胞对包被有粘连蛋白的孔显示36%与37%的粘附抑制。尽管对粘连蛋白的粘附抑制可能是檄树-PPT抗转移效果的一种机制，在粘连蛋白介导的粘着实验中相对较弱的粘附效果提示可能涉及的机制不止一种。碳水化物含量分析表明通过紫外线分光光度计测出檄树-PPT含有70%的半乳糖醛酸。这一发现暗示檄树-PPT通过与肺内皮表面分子，Lu-ECAM-l-半乳糖苷(galacoside)结合蛋白结合抑制黑色素瘤B16-F0对肺组织的粘着。同样也提示通过阻断细胞与细胞以及细胞与基质结合与许多恶性细胞表面表达的催乳激素(galectin)-半乳糖苷结合蛋白的结合，檄树-PPT发挥抗转移效果。至少在某些本研究中，檄树-PPT并没有显示对内皮细胞管柱的形成有任何的抑制作用。因此，檄树-PPT的抗转移效果是作为一种防粘附剂起作用来抑制瘤细胞栓子的形成和肿瘤细胞间的相互作用。本发明的这些和其他特征和优点在随后的描述中和附属权利要求中进行阐述或将变得更加显而易见。所述特征和优点可以通过在附属权利要求中特别指出的装置与组合物而被认识到并获得。此外，本发明的特征和优点可以从本发明的实践中了解或将从下文阐述的描述中显而易见。发明详述本发明涉及抑制致癌细胞的转移。尤其是，本发明涉及医药产品以及保健食品，而且尤其是涉及设计用来抑制、阻断和/或预防致癌细胞从原发癌部位转移的一种医药产品或保健食品。本发明以下的说明书分为题目为"檄树的一般性描述"与"抑制转移"的两个副标题。副标题的使用仅仅是为了方便读者，而并不能将其理解为在某种意义上对本发明进行限制。檄树的一般性描述本发明的实施方案包括含有用于治疗致癌细胞转移并且尤其是用于抑制、阻断和/或预防转移应用的一种或多种形式的加工的檄树的制剂。因此，以下是檄树包括其起源、处理技术、及健康益处的一般说明。下文中提供了用于治疗转移的基于檄树的制剂与组合物以及对受试对象的施用方法，包括实验研究的实施例和获得的结果在内的更加详细的说明。印度桑树或檄树植物，学名为檄树(MorindaCitrifoliaL)("檄树(Morindacitrifolia)")，是一种灌木或高达10米的小树。树叶从椭圆形到卵圆形相对排列。小白花包含在肉质的、球形的头状簇中。果实为大的、肉质并且卵圆形。成熟期他们呈乳白色并可食用，但是具有一种令人不快的味道和气味。该植物原产于东南亚，并且很早以前传播到从印度到东波利尼西亚的广大地区。它在野外随机生长，并且可在种植园和小的个体种植苗圃中栽培。檄树的花小，白色，3到5个裂片、管状的花瓣，有香味，并且大约有1.25厘米长。花朵发育成由许多融合成卵形，椭圆或者圆块状体的小核果组成的复合果，蜡状，白色或者浅绿色-白色浅黄色半透明的外壳。果实在其表面有"眼儿"类似于马铃薯。果实多汁，味苦，暗-黄色或者浅黄色-白色并且含大量红-褐色，硬的长方形-三角形的有翼2-室果核，每个含四颗种子。完全成熟的果实具有类似腐败乳酪的明显臭味。虽然一些国家的人将果实作为食物食用，檄树植物最普遍的应用是作为红以及黄色染料来源。近来，己经有人开始对檄树植物的营养以及健康价值感兴趣，下面将进一步进行描述。因为檄树果实的应用都不是食用的应用，果实必须经过加工使其适于人食用的口味并且包含在营养剂中用于提供雌激素的作用抑制芳香酶以及治疗各种癌细胞。加工的檄树果汁可以通过将种子以及果皮与成熟檄树果汁以及果肉分离；由果汁过滤果肉；并且包装果汁进行制备。或者，不用包装果汁，可以将果汁立即作为另一食品的成分，冷冻或者经巴氏灭菌。在一些实施方案中，果汁以及果肉可以煮成浓汤成为匀质的混合物与其它成分混合。其它过程包含冷冻干燥果实以及果汁。果实以及果汁可以在产生最终的果汁产品期间重新组成。其它过程包含在食用之前风干果实以及果汁。本发明的实施方案包括来自檄树叶子的檄树产品的提取物以及将所述产品用于组合物中以胶囊或者片剂形式用于食用，从而抑制雌激素产生以及提供体内的雌激素作用。本发明的实施方案还包括应用提取自檄树植物的果汁和/或果泥果汁的应用。在目前产生檄树果汁的优选过程中，果实或者经过手工挑选或者通过机械设备挑选。果实可以在当其直径为至少一英寸(2-3cm)直至12英寸(24-36cm)时采集。果实优选地具有深绿到黄绿色直至白色的色域并且具有中间的彩色层次。收获以后并且在进行任何加工之前彻底地清洁果实。从0到14天使果实陈化或者老化，果实最适合保藏2到3天。通过将果实置于设备中使其不接触地面进行陈化或者老化。优选地用布或者网状材料在陈化期间覆盖，但是不经覆盖也可以陈化。当准备进一步加工时，果实颜色较淡，为淡绿，淡黄，白色或者半透明颜色。检查果实的破损或者是否太过绿并且坚硬。从合格的果实中分离破损以及坚硬的绿果实。陈化并且老化的果实优选置入塑料衬里的容器中用于进一步加工以及运输。老化果实的容器可以保藏0到30天。大多数果实容器加工之前保藏7到14天。在进一步的加工之前容器可以任选地储藏在冷藏条件下。果实从贮藏容器取出并通过人工或者机械分离器加工。将种子以及果皮与果汁和果肉分离。果汁和果肉可以被包装进容器用于储藏和运输。或者，果汁和果肉可以立即加工成果汁终产品。容器可以储藏在冷藏，冷冻或者室温条件下。檄树果汁和果肉优选地混合成匀质混合物，然后可以与其它成分混合，诸如调味品，甜味剂，营养成分，植物性药材和颜料。果汁终产品优选地加热并且在至少18TF(83。C)或者高212T(10(TC)的温度进行巴氏灭菌。将每一产品填充并且密封到塑料，玻璃或者可以经受加工温度的另一适合材料的容器中。容器维持在填充温度或者可以迅速冷却然后置于运输容器中。运输容器优选地用材料包装并且包装方式可以保持或者控制最终容器中产品的温度。果汁以及果肉可以经由通过过滤设备将果肉与果汁分离而进行进一步加工。过滤设备优选地包括但是不局限于，离心滗析器，具有从1微米直至2000微米大小的网孔，更优选地小于500微米的网式滤器，压滤机，反渗透过滤器，以及任何其它标准商用过滤装置。操作过滤压力优选地为从0.1psig直至约1000psig。流速优选地为从0.1g.p.m.直至1000g.p.m.，更优选地在5以及50g.p.m之间。洗涤以及过滤湿果肉至少一次并且直至10次从果肉除去所有的果汁。湿果肉通常具有10到40重量百分数的纤维含量。湿果肉优选地在最小181°F(83°C)的温度下巴氏灭菌然后包装铁桶装用于更进一步的加工或者制成高纤维含量的产品。提取并加工油料的方法描述在1999年8月27日递交的未决申请09/384,785中，此处引入作为参考。檄树油通常包含若干不同脂肪酸，诸如棕榈酸，硬脂酸，油酸以及亚油酸脂肪酸的甘油三酯，及其他较少量存在的脂肪酸的混合物。此外，油优选地包含抗氧化剂，从而抑制油的腐败。优选使用传统的食用级抗氧化剂。檄树富含天然的成分。例如，天然的成分包含来自叶子:丙氨酸，蒽醌，精氨酸，抗坏血酸，天冬氨酸，钙，P-胡萝卜素，半胱氨酸，胱氨酸，甘氨酸，谷氨酸，糖苷，组氨酸，铁，亮氨酸，异亮氨酸，甲硫氨酸，烟酸，苯丙氨酸，磷，脯氨酸，树脂，核黄素，丝氨酸，e-谷甾醇，硫胺素，苏氨酸，色氨酸，酪氨酸，熊果酸以及缬氨酸；来自花朵:金合欢素-7-邻-P-d(+)吡喃葡萄糖苷,5,7-二甲基-扦菜甙元—4'-邻-e-d(+)-吡喃半乳糖苷，以及6,8-二甲氧基-3-甲基蒽醌-1-邻-e-鼠李糖基吡喃葡萄糖苷；来自果实:乙酸，车叶草苷，丁酸，苯甲酸，苯甲醇，l-丁醇，辛酸，癸酸，(E)6-十二碳烯-Y-内酯，(Z，Z,Z)-8,11,14-eicosatrienoic酸，反油酸，癸酸乙酯，己酸乙酯，辛酸乙酯，棕榈酸乙酯，(Z)-6-(乙基硫代甲基)苯，丁香酚，葡萄糖，庚酸，2-庚酮，己醛，己酰胺，已二酸，己酸，l-己醇，3-羟基-2-丁酮，月桂酸，苧烯，亚油酸，2-甲基丁酸，3-甲基-2-丁烯-l-醇，3-甲基-3-丁烯-l-醇，癸酸甲酯，反油酸甲酯，己酸甲酯，甲基-3-甲基硫代-丙酸酯，辛酸甲酯，油酸甲酯，棕榈酸甲酯，2-甲基丙酸，3-甲基硫代丙酸，肉豆蔻酸，壬酸，辛酸，油酸，棕榈酸，钾，东莨菪素，十一烷酸，(Z,Z)-2,5-H^—碳二烯-l-醇，以及vomifol;来自根部:蒽醌，车叶草甙(rubichloric酸)，虎刺素，糖苷，morindadiol，morindine，桑酮，粘性物质，nor-danmacanthal，茜根定，茜根定一甲基醚，树脂，柚木醌二酚，甾醇，以及三羟基甲基蒽醌一甲基醚；来自根树皮:茜素，chlororubin，糖苷(戊糖，己糖)，morindadiol，morindanigrine，morindine，桑酮，丰对月旨状物质，茜根定一甲基醚，以及柚木醌二酚；来自木头:蒽掊酚-2,3-二甲基醚；来自组织培养:虎刺素，光泽汀，光泽汀-3-樱草糖苷，以及桑酮-60-樱草糖苷；来自植物:茜素，茜素-a-甲基乙醚，蒽醌，车叶草甙，己酸，morindadiol，桑酮，morindogenin，辛酸以及熊果酸。近来，如提到的，已经发现许多健康价值源于使用含檄树产品。檄树的一个好处是它能够分离并且产生赛洛宁(Xeronine)，其是体内具生理活性的相对小的生物碱。赛洛宁实际上存在于植物，动物以及微生物所有健康的细胞中。即使檄树具有可忽略量的游离赛洛宁，但是它含显著量的赛洛宁前体，称作前赛洛宁。更进一步的，檄树含惰性形式的酶前赛洛宁酶，其从前赛洛宁释放赛洛宁。夏威夷大学的R.M.Heinicke名为"ThePharmacologicallyActiveIngredientofNoni"的文章指出檄树是用于分离赛洛宁的最好原料，因为前赛洛宁以及前赛洛宁酶的结构阻断。这些结构阻断有助于体内分离以及产生赛洛宁。必需营养赛洛宁的功能增强四倍。首先，赛洛宁用来活化小肠中存在的休眠酶。这些酶对有效的分解，平稳神经以及全部的身体以及情绪活力至关重要。第二，赛洛宁保护并且保持蛋白质分子的形状以及柔软度以便使其通过细胞壁并且用来形成健壮组织。没有这些养分进入细胞，细胞不能有效地进行工作。没有前赛洛宁产生赛洛宁，细胞并且随后身体将会受损害。第三，赛洛宁有助于细胞膜气孔的扩大。这种扩大可以使大链肽(氨基酸或者蛋白)被吸收入细胞中。如果这些链不被利用，他们将变成废物。第四，由前赛洛宁制成的赛洛宁有助于气孔扩大从而更好吸收养分。每一组织具有含具有吸收赛洛宁受体位点的蛋白的细胞。某些蛋白是惰性形式的酶其需要吸收赛洛宁活化。因此通过将体内原胶原酶系统转化成特异性蛋白酶，赛洛宁迅速地并且安全地从皮肤除去死亡的组织。其它蛋白与赛洛宁反应后成为可能的激素受体位点。因此檄树使人体感觉良好的作用可能是由于赛洛宁将某些大脑受体蛋白转化成用于幸福激素即内啡肽吸收的活性位点引起的。其它蛋白通过肠中，血管及其他身体器官的膜形成气孔。这些蛋白吸收赛洛宁改变气孔的形状因此影响分子通过膜。因为它的许多好处，檄树已经己知可以对患癌症，关节炎，头疼，消化不良，恶性肿瘤，骨裂，高血压，糖尿病，疼痛，感染，哮喘，牙痛，生理缺陷，免疫系统衰竭等的个体提供大量的有益作用。除许多的保健益处之外，檄树对皮肤同样有显著的益处。檄树富含抗氧化剂，所述抗氧化剂有助于对抗由太阳及其他环境条件和因素改变所引起的自由基的损害。为了保持健康，皮肤面对这些因素和情况并且修复当时所造成的损害。皮肤始终处于从其表面脱落坏死细胞并且由下层细胞来补充的修复状态。檄树还特别富含对滋养皮肤健康有特殊能力的必需脂肪酸的亚油酸。抑制转移正如上面所提供的，本发明的实施方案涉及抑制致癌细胞的转移。尤其是，本发明的实施方案涉及医药产品以及保健食品，而且尤其是涉及设计用来抑制、阻断和/或预防致癌细胞从原发癌部位转移的一种医药产品或保健食品。接下来对常用来治疗转移的基于檄树的制剂与组合物，与对受试对象的施用方法并包括实验研究实施例及其所的结果提供更加详细的说明。转移是恶性癌细胞从它们的原发的部位向远处器官的移动或扩散。超过50%的癌症病人死于转移。尽管大量研究集中在这一领域，但是可用于转移性的癌症疾病病人的药或治疗措施非常稀少而且对于研究科学家和内科的医生来说，寻找克服这种致命疾病的新的实体已成为近几十年的一项紧急的任务。至少本发明的一些实施方案包括檄树-PPT的转移效果。正如下文将要论述的那样，至少一些实施方案的研究包括使用C57B1/6J小鼠的B16-F0黑色素瘤细胞的同系肿瘤转移模型以确定檄树-PPT是抗转移的。为了试图发现预防作用所涉及的可能机制，通过GPC(凝胶渗透色谱法)对檄树-PPT进行研究并用紫外分光光度计测定其半乳糖醛酸含量。进行了两个体外试验来检验关于檄树-PPT的抗转移效果、抑制粘连蛋白附着和抑制内皮管柱形成的可能途径。基于试验数据和其他的研究，我们可以提出檄树-PPT的抗转移效果的几个可能的机制。下文涉及用于获得抗转移效果的代表性方法和材料。本领域技术人员将认识到下文是本发明的一个或多个代表性的实施方案。首先，制备檄树-PPT。挑选檄树的黄绿色果实、包裹并将其置于太阳下的折叠桌上大约一星期或者直到可以收获。通过果实加工机将粗糙的残渣和种子筛掉从而将收获的果实加工成果泥。所得的果泥进行离心以获得澄清的果汁。将等体积的乙醇(99.9%纯度，Sigma)加入到果汁中，并将内容物混合。混合物进行离心并且除去残渣。将另一等体积的乙醇(99.9%纯度，Sigma)加入到所获得的液体中并且进行混合。混合物进行离心并且保留沉淀的残渣并行空气干燥。干燥残渣就是檄树-PPT。进行一个体内转移试验，其中6只(阳性对照)，6只(檄树-PPT试验组)，和9只(介质对照)的免疫活性(6-8周龄)，无病原体(SPF)的C57BL/6雄性小鼠组用于本研究，并且在23士rC温度下，不含特异性病原体(SPF)条件下在动物隔离箱(IVC架)中进行饲养。将有活力的B16-F0鼠源黑色素瘤细胞(ATCCCRL-6322，0.2ml中6X104)通过尾部静脉静脉接种到实验小鼠体内。在肿瘤细胞植入前一周和之后三周将1。/。的檄树-PPT的无限制饮用水溶液给予小鼠。此外，在肿瘤细胞植入后连续21天对每只小鼠通过腹膜内(IP)0.8mg的檄树-PPT。同时，在肿瘤细胞植入后将参照试剂丝裂霉素按lmg/Kg每周两次共6个剂量IP施用。在介质对照组中，蒸馏水以10ml/Kg连续三周进行IP施用。在肿瘤细胞植入后的第1天、第8天、第15天，及第22天记录所有鼠的体重。在肿瘤接种后21天切除肺并固定。在解剖显微镜下对肺表面的转移瘤进行计数。t检验(student'st检验)用来确定治疗组和介质对照组之间在统计分析中的统计学差异。对檄树-PPT进行了阴离子交换层析，其中将IO克的檄树-PPT溶于1升的蒸馏水中并且通过0.4UM的滤纸(FisherScientific)进行过滤。用蠕动泵(AmershamPharmaciaBiotech)将制备的200微升檄树-PPT溶液以0.5ml/min的速度上样到阴离子交换柱(HiLoad26/10Q琼脂糖凝胶HP,AmershamPharmaciaBiotech)。在应用檄树-PPT溶液之前，通过流过5倍柱体积的lNNaCl和蒸馏水流生成所述交换柱。五倍柱提及的蒸馏水与0.1NNaCl连续地流经交换柱并且收集0.1NNaCl级分。该级分在99.9%氮气压力下在微孔搅拌池(FisherScientific)中通过PES-50超滤膜滤过来除去Na+Cr。在冷冻干燥前用蒸馏水冲洗滤液三次。进行一个分析检测NRK2(正常大鼠肾细胞，ATCCCRL-6509)细胞对包被有粘连蛋白的孔的粘附力。檄树-PPT，O.lNNaCl檄树-PPT级分，GRGDSP肽(SIGMA)，以及0.4%DMSO(SIGMA，介质对照)在pH7.4(Hyclone)的改性MEM-HEPES缓冲液中在温度为37'C条件下在单独的孔中孵育30分钟。通过加入NRK2细胞(2X106/ml)开始反应并且持续30分钟。然后每一孔用Dulbecco'sPBS(Hyclone)冲洗6次，接着加入5liMl丐黄绿素AM(SIGMA)并再进行2小时的孵育。由钙黄绿素AM与附着于包被有粘连蛋白孔的平板的细胞的相互作用而产生的荧光强度的定量通过SpectrFluorPlus平板读取器(AGFlwith485纳米激发光，535纳米发射光)来读取。将1毫克檄树-PPT与0.1NNaCl檄树-PPT级分溶于DDI水中进行GPC分析。用分子量从5,200至410,000的葡聚糖(葡聚糖标准试剂盒，Waters)绘制标准曲线。GPC条件仪器一WatersAlliance分离组件2690和2410折光率检测器；柱一Ultrahydrogel500与Ultrahydrogel线性6-13uM;7.8X300mm串联；柱温—40°C;流动相—0.1M硝酸钠。流速—0.6ml/min;注射体积—50uL;折射率检测器内部温度--50°C;标准曲线用Waters软件(Empower,l.O版)调整并且用这个曲线来分析檄树-PPT与O.iNNaCl级分的分子量。在碳水化物含量分析中，称量0.015克的成粒的檄树-PPT并且平铺开。加入10.0毫升的蒸馏水并且用力振荡直到檄树-PPT溶解。量取1.0毫升的样本加入试管中并加入3.5毫升的冷的浓硫酸。该溶液50'C加热10分钟，冷却至室温，转移入10.0毫升的容量瓶，用蒸馏水冲洗并稀释至所述体积。将0.6毫升的该溶液移入冷的试管，加入3.6毫升冷的0.0125M四硼酸钠(SIGMA)试剂并充分混合。试管的内容物在沸水浴器中加热IO分钟，然后冷却至室温，并加入60"L的0.15%m-羟基二苯基试剂。内容物迅速混合，放置3分钟，并用紫外线分光光度计(Varian)读取520纳米处的吸光度。用在浓度分别为0.05mg/ml、0.10mg/ml、0.15mg/ml与0.2mg/ml的半乳糖醛酸(VWRScientific)来绘制标准曲线。对于血管生成而言，HUVECs(I.OXIOV孔，ATCCCRL-1730)加在事先制备的96-孔matrigel。檄树-PPT以lOOOug/ml、100"g/ml、10ug/ml、liig/ml，和O.lyg/ml加样。紫杉醇用作阳性对照并且分另lJ以0.1]iM、0.01UM、0.001UM、0.0001uM、禾口0.00001uM力口样。然后孔在5%(:02环境中37。C下孵育18小时。用光显微镜来评估类似于毛细管网的内皮细胞管的形态结构。对每一孔的管断裂情况都进行评分。可以确定最低抑制浓度(MIC)并可用来评价檄树-PPT是否抑制血管生成(angiogensis)。每一浓度检测两次。下表和图阐明了檄树-PPT的抗转移效果表1<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>参见上述表1，有活力的B16-F0鼠的黑色素瘤细胞接种到C57B1/6J小鼠体内。在植入前一周与整个实验中无限制给小鼠施用1%的檄树-PPT。在小鼠接种后连续21天给小鼠I.P.注射10ml蒸馏水/小鼠(介质对照)、0.8mg/小鼠的檄树-PPT及4mg/小鼠的檄树-PPT。丝裂霉素用作阳性对照并且以lmg/Kg每周注射两次总共注射6剂量。在实验结束时切下肺、固定，并在解剖显微镜下对肺表面转移瘤进行计数。这个实验用来确定治疗组和介质对照组之间的显著性差异(SEM二平均数的标准误差；bp<0.006;ep<0.005)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>参见表2，在植入后记录鼠的体重。与介质对照组相比，檄树-PPT治疗组的体重增加了。(ap<0.05;bp<0.05)表3粘连蛋白介导的粘附抑制百分比<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>参见表3，使NRK2细胞粘附在包被有粘链蛋白的孔上。由钙黄绿素AM与附着于包被有粘连蛋白的平板的细胞相互作用而产生的荧光强度的定量通过SpectrFluorPlus平板读取器来读取。以下图涉及色谱法，其中图1A图示了檄树-PPTGPC分析的色谱图(数字代表每一相应峰的分子量道尔顿。)并且图IB图示了0.1MNaCl级分GPC分析的色谱图。图2图示了檄树-PPT、介质和阳性对照，紫杉醇的管柱形成的照片。如图2所示，在测试浓度的檄树-PPT(作为PPT)并不能破坏内皮细胞管柱的连续网络。在体内的转移试验中，利用C57B1/6J小鼠黑色素瘤B16-F0细胞的同系的肿瘤转移模型证明了檄树-PPT具有抑制转移效果。整个实验过程中与无限制饮水相结合每只小鼠施用0.8mg檄树-PPT显示22。/。的抑制(P<0.006)。没有观察到体重的增加(参见表l-2)。化疗药丝裂霉素用作阳性对照并且在lmg/Kg剂量时显示55。/。转移抑制。在阳性对照组也没有体重的增加。对于粘连蛋白介导的粘附力，10mg/ml的檄树-PPT显示出对NRK2细胞与包被有的粘连蛋白的孔36%的粘附抑制。lmg/ml的檄树-PPT的O.lNNaCl级分对粘连蛋白介导的粘附显示37%的抑制(参见表3)。对于通过使用凝胶渗透色谱法(GPC)对檄树-PPT组分进行GPC分析，发现四个主锋并且揭示了檄树-PPT分别由分子量为MW862、MW2,045、MW14，461、以及MW84，076道尔顿的四个不同分子量的分子组成(参见图1A)。0.1NNaCl级分通过GPC来分析，并且发现其分子量为90,127道尔顿(参见图1B)。这对应于檄树-PPT的MW84，058道尔顿的峰值，而且分子量的偏移是由于实验误差引起的。面积法分析表明MW84，058的峰值为四个峰值总面积的12.5%。对于碳水化物含量的分析而言，碳水化合物分析表明用紫外线分光光度计测定的檄树-PPT含有70%的半乳糖醛酸。对于血管生成而言，在体外管柱形成试验中，所有的试验浓度对于檄树-PPT都没有观察到管柱受到破坏(参见图2)。在上述研究中，已经证实在C57B1/6J小鼠中檄树-PPT可对抗黑色素瘤B16-F0细胞的转移。檄树-PPT的抗转移效果涉及预防肿瘤细胞与粘连蛋白的粘附，因为本试验已显示檄树-PPT在10mg/ml时具有36%的粘附抑制。粘连蛋白在细胞外基质和体液中发现的一种大的粘着糖蛋白。在大多数细胞中由c^和P,亚基组成的粘连蛋白特异性整联蛋白是主要的粘连蛋白受体。这种整联蛋白与粘连蛋白的RGD位点结合并介导诸如粘附、迁移、细胞骨架的组织、及粘连蛋白细胞外基质的装配的细胞结合应答。研究表明抗-e,与抗-^5的抗体抑制包括HT-1080纤维肉瘤、5637膀胱癌、以及MDA-231乳癌的几种癌细胞在粘连蛋白上的迁移。不是RGD位点，而是粘连蛋白的PHSRN位点诱导小鼠前列腺转移癌细胞MLL的浸润。这一发现与其他研究相一致，因为只有当RGD和PHSRN两个部位共存于相对方位时细胞粘着的主要活性才能够实现，所以PHSRN位点被称为RGD的协同作用位点。上述实验中，檄树-PPT在10mg/ml显示对粘连蛋白介导的粘附力的36%的抑制。檄树-PPT的0.1NNaCl级分MW84，076道尔顿，在lmg/ml时显示有37%的粘附抑制活性。考虑到这种组分大约为檄树-PPT的12.5%,几乎完全担当总的抗粘附力活性。然而，檄树-PPT相对弱的活性也提示可能存在有关抗转移效果的其他机制。此处提出的的另一种机制是基于某些细胞类型倾向转移到特异的耙器官的理论与檄树-PPT包括70%的半乳糖醛酸的观察结果。越来越多的证据表明对于转移的靶器官的选择是由癌细胞和靶器官的内皮细胞之间的特异相互作用介导。这种相互作用涉及由在一或多个器官的血管中严格分布的不断表达的膜糖蛋白所组成的细胞表面分子。分离大一种内皮表面分子，源自肺的内皮细胞粘着分子-1(Lu-ECAM-1)并且发现其介导和阻止黑色素瘤细胞的肺转移。在静脉注射B16-F10细胞1小时前用抗Lu-ECAM-lmAb6D3免疫的同系小鼠与对照组相比显示肺集落数目减少超过90%。Lu-ECAM-l结构分析表明它是具有3%糖含量的一种糖蛋白。一系列碳水化合物用来测试B16-F10对Lu-ECAM-l的粘附抑制。结果证明Lacto-N-fucopentoseI最有效地阻断B16-F10对Lu-ECAM-l的粘附。这一发现暗示Lu-ECAM-l是一种半乳糖苷结合蛋白。在我们的糖分析中，我们发现檄树-PPT含有70%的半乳糖醛酸。因此檄树-PPT通过与Lu-ECAM-l分子结合并且阻断黑色素瘤B16-F0细胞对Lu-ECAM-l的粘附来发挥它的抗转移效果是可能的。已经发现与LU-ECAM-1蛋白同家族的类似蛋白，包括hCLCA3(Gruber等，1999)。hCLCA3表达在诸如肺、气管、脾、胸腺、以及乳腺的许多组织中表明在这些组织中檄树-PPT可能的抗转移效果。檄树-PPT的半乳糖醛酸含量提示其抗转移效果涉及抑制细胞与细胞以及细胞与基质的结合。许多恶性细胞能够结合外原性包含碳水化合物的配体。在人黑色素瘤、结肠直肠、胃、以及乳头状甲状腺癌中已经发现有催乳激素(galectin)-半乳糖糖苷结合蛋白的表达。这些细胞表面的催乳激素(galectin)诱导细胞聚集和细胞附着到基底层以及在肿瘤细胞的侵润中起关键作用。通过单克隆抗催乳激素(galectin)抗体与细胞表面的结合发现细胞的聚集与附着可以受到抑制。诸如右旋半乳糖和阿拉伯半乳糖的单糖抑制L-l肉瘤细胞的肝脏转移。在雄性哥本哈根鼠大中富含半乳糖醛酸的改性柑桔果胶证实可抑制大鼠MAT-LyLu前列腺肿瘤细胞的肺转移。同样的研究中发现，大鼠MAT-LyLu细胞中催乳激素(galectin)-3.的表达在体内的转移抑制和体外的粘连抑制之间存在浓度相关性。因为檄树-PPT对B16-F0肿瘤生长(在实验的过程中观察到体重没有增加)与血管内皮细胞生长(参见结果)没有影响，看起来它的抗转移效果是通过作为抗粘附剂来抑制瘤细胞栓子的形成和肿瘤细胞间的相互作用。因此，从所述研究和体内和体外试验可以看出檄树-PPT具有抑制效果并且这种抗转移效果可导致血管和肿瘤转移的减少。如上述提供的，先前的讨论涉及根据本发明的一或多个代表性的实施方案。本领域技术人员将认识到本发明包括涉及抑制致癌细胞转移的其他实施方案。因此，下文涉及本发明的另外的实施方案。化合物l成A力、重量百分比化合物2檄树果汁成分100%重量百分比化合物:檄树果汁水成分85-99.99%0.1-15%重量百分比化合物4檄树果汁其他果汁成分85-99.99%0.1-15%重量百分比檄树果汁水其他果汁50-90%0.1-50%0.1-30%在一个实施方案中，患有所述转移的病人早晨空腹至少服用一(1)盎司的制剂l，并且晚上空腹在上床休息之前也至少服用一(1)盎司。在一个并不限制任何方式的实例中，有益的檄树加工成由犹他州Orem公司的Morinda生产的Tahitian檄树⑤果汁。在另一优选的实施方案中，经历转移的病人至少服用1盎司的制剂2每天两次直到过度生长减缓。接下来的实施例阐述并显示檄树对致癌细胞转移的效果。这些实施例并不希望以任何方式来加以限制，而是在此处仅仅举例说明本发明加工和生产的檄树的有益的作用。本发明其他非限制实施例描述如下。实施例1在本实施例中，病人正遭受到致癌细胞从原始的或最初的癌症部位或位置的转移。遭受转移的病人需要用非处方、不需处方直接可以出售的制剂来治疗该病情。为了治疗感染，病人服用了处方规定剂量的含有加工的檄树果汁的食品组合物。病人间歇地服用了含有加工的檄树果汁的食品直到转移被抑制、阻断和/或预防或者转移的细胞被破坏并且感染减轻或消除。实施例2本实施例显示编码为MDA-4或PPT的檄树对致癌细胞转移的效果。具体地，接下来的实施例显示檄树(MDA-4)对C57BL/6J小鼠的鼠黑色素瘤B16-F0细胞的同系肿瘤模型的抗转移活性。在C57BL/6J小鼠的黑色素瘤B16-F0细胞同系肿瘤转移模型中，MDA-4通过饮用的方法以1。/。(10mg/ml)浓度施用l周进行预处理，并在肿瘤细胞植入之后施用三周，在研究和整个实验过程总共给予28次治疗。此外，在肿瘤细胞植入到鼠体内后MDA-4以每只小鼠0.8mg的剂量每日通过注入腹腔注射(IP)总共连续施用21天。检测肿瘤转移瘤作为转移指数，相对于介质对照组用MDA-4处理的动物的肺部瘤数据显示在表4中。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>检验被用于确定处理的试验物质与介质对照之间的显著性差异(组(**P<0.01))。基于所得的结果，MDA-4以每只小鼠0.8mg的剂量通过腹膜内与ly。的MDA-4无限制饮用的方法联用，显示了对肿瘤转移的轻微抑制(参见表5)。在研究过程中体重同样受到监测并且与介质对照组相比变化无显著性差异(参见表6)。在实验过程中也注意到施用试验化合物后动物没有显示中毒症状。在实验过程中，试验物质MDA-4由Morinda公司提供并用于体内抗转移研究。将MDA-4溶于无菌蒸馏水中并按照规定MDA-4通过饮用的方法以1%(10mg/ml)浓度施用进行1周的预处理，并在肿瘤细胞植入之后施用三周，在研究和整个实验过程总共施用28次治疗。此外，按照规定，在肿瘤细胞植入后MDA-4以每只小鼠0.8mg的剂量每日通过腹膜内(IP)施用总共连续21天。鼠黑色素瘤细胞系，B16-F0(ATCCCRL-6322)，购自美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)并且90%含10%胎牛血清的Dulbecco's改性Eale's培养基的用作培养基。肿瘤细胞在5%的二氧化碳环境中温度为37'C条件下进行孵育。该培养基添加有1%的抗生素-抗真菌剂。6-8周龄，重量在24-28gms的具体无病原体C57BL/6J小鼠由国立台湾大学动物中心提供。整个实验中动物在无特定病原体(SPF)条件下词养在单独通风的笼架中(IVCRacks,36微型隔离系统)。每一APEC⑤笼经高压灭菌并容纳3只小鼠(26.7cm长X20.7cm宽X14.0cm高)，然后维持在控制温度(22°(:-24'0与湿度(60%-80%)12小时昼夜周期的卫生环境中。动物允许随意自由地获取无菌蒸馏水。这个工作的所有方面，即住宿、试验以及动物的处理，通常按照涉及动物的生物医学研究的国际指导原则来进行(CIOMS出版号ISBN9290360194，1985)。所用的化学试剂为抗生素-抗真菌剂(GIBCOBRL,美国)、胎牛血清(HyClone，美国)、Dulbecco's改良的Eagle's培养基(HyClone，美国)以及丝裂霉素(Kyowa，日本)。某些所用设备包括5810R离心机(e卯endorf，德国)、二氧化碳孵育箱(FormaScientific公司，美国)、血细胞计数器(HausserScientificHorsham,美国)、单独通风笼架(IVCRacks,36微型隔离箱系统)(Techniplast，意大利)、CK-40倒置显微镜(Olympus,日本)、E-400系统显微镜(Nikon,日本)以及垂直层流通风系统(Tsao-Hsin，R.O.C)。根据评价的优选方法，各组使用三只或六只(6-8周龄)无特定病原体(SPF)的在温度23vrc无特定病原体条件下在动物隔离箱(IVC架)中饲养的C57BL/6J雄性小鼠。将有活力的B16-F0鼠黑色素瘤细胞(ATCCCRL-6322，0.2ml6X10r)通过尾部静脉静脉接种到实验鼠体内。1%的试验化合物MDA-4通过饮用的方法施用给动物，并且在肿瘤接种(作为0天)一周之前治疗开始并且在肿瘤细胞植入后每天施用连续治疗直到21天总共为21个连续工作日。同时，在肿瘤细胞植入后参照试剂丝裂霉素经腹膜内施用每周两次总共六个剂量。在肿瘤接种后21天肺被切除并固定。接着在解剖显微镜下计数肺表面的转移瘤。由此获得的结果为<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>在这个实施例或结果表格中，R代表转移性肿瘤的直径并且按如下方法计分a=(R<lmm)的瘤的数目，b=(lmm#R<2mm)的瘤的数目，c=(R32mm的瘤的数目。t检验(student'st检验)用于确定处理的试验物质和介质对照组间的显著性差异。表6檄树对B16-F0黑色素瘤实验转移的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>实施例3本研究集中在从檄树果汁中提取的乙醇不溶性沉淀物对肿瘤转移的抑制，并且表明或阐明了一种可能的机制。在此研究发现从法属玻利尼西亚的塔希提岛檄树果实中提取的乙醇不溶性沉淀物(多糖)对C57B1/6J小鼠的黑色素瘤B16-F0细胞的同系肿瘤转移模型具有抗转移的活性。檄树-PPT在0.8mg/小鼠剂量时显示了22%的抑制效果(p<0.005)。檄树-PPT抗转移效果的可能机制进行了研究。凝胶渗透色谱法(GPC分析)证明该檄树-PPT由四个分子量分别为879,2045、14,461及84,076道尔顿的不同分子组成。利用阴离子交换色谱法，84，076MW级分通过用O.lNNaCl洗脱檄树-PPT而获得。檄树-PPT与84，076MW的级分分别在10mg/ml禾口lmg/ml水平时显示出使NRK-2细胞对包被有粘连蛋白的孔有36%和37。/。的粘附抑制。尽管抑制粘连蛋白的粘附可能是檄树-PPT抗转移效果的一种机制，在粘连蛋白介导的粘着实验中相对弱的粘着效果提示可能涉及的机制不止一种。碳水化物含量分析表明由紫外线分光计测得的檄树-PPT含有70%的半乳糖醛酸。这一发现暗示檄树-PPT可能抑制黑色素瘤B16-F0对肺组织的粘附，所述粘附通过与肺内皮表面分子，Lu-ECAM-l-半乳糖苷结合蛋白的结合进行。同样也提示由于许多恶性细胞表面表达的催乳激素(galectin)-半乳糖糖苷结合蛋白，檄树-PPT可能通过阻断细胞与细胞以及细胞与基质结合发挥抗转移效果。檄树-PPT对内皮细胞管柱的形成并没有显示任何的抑制效果。因此，檄树-PPT的抗转移效果更可能是通过作为防粘附剂来抑制瘤细胞栓子的形成和肿瘤细胞间的相互作用。研究的细节在此处进行阐述。因此，如上所述，本发明的实施方案包括抑制致癌细胞的转移。尤其是，本发明涉及医药产品以及保健食品，并且尤其是涉及一种设计用来抑制、阻断和/或预防致癌细胞从原发癌部位转移的医药产品或保健食品。本发明包含其它的具体形式只要不背离本发明的精神或实质特征。所述的实施方案在各个方面仅作说明性的而并非限制性的考虑。因此，本发明的范围是通过附属权利要求而不是通过上文的描述来进行说明的。在与权利要求等同的意义或范围内的所有变化包含在所述权利要求范围内。权利要求1.一种治疗、抑制、以及预防致癌细胞转移的营养制剂，所述营养制剂包含以重量计含量在大约0.01％至100％之间的加工的檄树产品。2.权利要求1所述的营养制剂，其中加工的檄树为加工的檄树果汁。3.权利要求2所述的营养制剂，还含有水。4.权利要求3所述的营养制剂，其中檄树果汁以重量计含量在大约85%到99.99%之间。5.权利要求3所述的营养制剂，其中檄树果汁以重量计含量在大约50%到90%之间。6.权利要求2所述的营养制剂，还含有另一种果汁。7.权利要求l所述的营养制剂，其中的檄树是檄树-PPT。8.—种抑制和预防致癌细胞转移并且破坏早期转移的致癌细胞的方法，所述方法包括下列步骤将加工的檄树产品添加到基于醇的溶液中；从所述溶液中分离和提取檄树的活性成分；并且将所述提取的活性成分导入所述致癌细胞感染的部位，其中所述提取的活性成分抑制和预防所述致癌细胞的进一步生长并且破坏早期转移的致癌细胞。9.权利要求8的方法，其中所述加工的檄树产品包含加工的檄树果汁。10.权利要求8的方法，其中所述加工的檄树产品包含加工的檄树果泥。11.权利要求8的方法，其中所述加工的檄树产品包括加工的檄树-PPT。12.权利要求11的方法，其中所述基于醇的溶液选自大体上由甲醇、乙醇和乙酸乙酯、以及其他基于醇的衍生物组成的组。13.权利要求12的方法，其中所述的活性成分是五羟黄酮。14.权利要求13的方法，其中所述的活性成分是与所述五羟黄酮协同起作用来抑制和预防所述的致癌细胞转移的芸香苷。15.—种抑制、预防、并破坏转移的癌细胞进一步生长的方法，所述方法包括下列步骤早晨空腹口服至少1盎司含有加工的檄树果汁的营养制剂；并且在晚上睡觉前口服至少1盎司所述的营养制剂。16.权利要求15的方法，其中的檄树包含檄树-PPT。17.权利要求16的方法，其中所述的营养制剂包含以重量计含量最多达100。/。的檄树-PPT。18.权利要求14的方法，其中所述的营养制剂包含以重量计含量大约在85-99.99%之间的加工的檄树果汁；以及以重量计含量大约在0.1%-15%之间的水。19.权利要求14的方法，其中所述的营养制剂包含-以重量计含量大约在85-99.99%之间的加工的檄树果汁；以及以重量计含量大约在0.1%-15%之间的其他果汁。20.权利要求14的方法，其中所述的营养制剂通过每日两次口服2盎司所述的食品进行服用。全文摘要本发明的特征在于用来抑制和预防致癌细胞的转移并且破坏转移的细胞的来自印度桑椹植物而且尤其是檄树果汁的加工成分。至少本发明某些实施方案包括服用食品或医药产品或含有加工的檄树的组合物。文档编号A23L1/212GK101443027SQ200480014462公开日2009年5月27日申请日期2004年5月3日优先权日2003年5月2日发明者克劳德·亚拉克·詹森,史蒂芬·斯托里,安·平住-金,布雷特·韦斯特,陈苏,阿法·帕卢申请人:诺丽公司