专利名称：农药残毒快速检测用液体酶试剂及其制备方法与使用方法
技术领域：
本发明涉及一种组合物，尤其涉及一种液体组合物试剂，特别涉及一种快速检测有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒用含酶的液体组合物试剂。
背景技术：
残留农药对人类健康的危害是食品安全问题中举世瞩目的热点之一，世界范围内由于有机磷及氨基甲酸酯类农药残留超标而引起的中毒事件屡有发生，其中有69.5％是由有机磷农药所致。因此对食品、环境中农药残毒进行监测是一件非常重要的工作。目前对于有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测通常采用酶抑制法，利用酶被抑制的程度，借助农药残毒速测仪通过酶催化动力学光度法测量，或者通过颜色变化，或者通过酸度测量等方法进行检测。在上述酶催化动力学反应体系中，涉及了酶试剂、底物、显色剂等，而酶试剂在检测中具有关键性作用。一般而言，酶在室温(20～25℃)或冰箱冷藏(0～4℃)下储存易于失活(酶在室温保存不得超过2天，在冰箱冷藏不得超过1周)直接影响农药残毒检测的准确性。在农副产品的产销过程中，因酶试剂稳定性得不到保证，从而影响测量的准确性，使得绝大多数的农产品在进入餐桌之前，食用的安全性难以得到保证，无公害农产品的品质得不到有效的控制。
发明内容
本发明的目的是提供一种有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂及其制备方法与使用方法。本发明有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂可在室温下20～25℃稳定储存，从而克服了目前使用的酶存在的缺点，解决了目前有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测存在的问题，本发明有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂的组分及配比为胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶之一 30-100μL、缓冲溶液0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸盐缓冲溶液或0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl缓冲溶液之一 2-10mL、稳定剂牛磺酸钠 5-20mg。
本发明有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂的组分及优选配比为胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶之一 50-80μL、缓冲溶液0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸盐缓冲溶液或0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl缓冲溶液之一4-8mL、稳定剂牛磺酸钠 8-16mg。
进行有机磷及氨基甲酸酯类农药残留毒的快速筛选检测，酶试剂在检测中具有关键性作用，一般而言，酶在室温(20～25℃)或冰箱冷藏(0～4℃)下储存易于失活(酶在室温保存不得超过2天，在冰箱冷藏不得超过1周)，直接影响农药残毒检测的准确性。常见的酶试剂保存方法，一般是将酶溶液进行分装后于在-20℃下冷冻储存的方式以增加酶的储存周期。但该方法存在着多次溶冻所带来的酶活性易于降低的问题，如果溶冻次数超过2次则酶活性降低显著，使测量结果不稳定，因此该方法也不便于实际应用。
为了便于现场快速、准确地检测农药残毒，其分析用化学试剂必须在室温下具有足够的稳定性、容易保存，反应条件温和，反应完全、速度快，操作简单，携带方便等特点，只有具备这些特点才能有效地检测与控制食品中农药残毒、真正确保食用安全性。
本发明有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂选择了适当的稳定剂、缓冲溶液；并与酶合理配比；使液体酶试剂在室温(20～25℃)下稳定储存15天以上，而保持酶的活性损失不超过10％。因此本发明有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂配合使用底物试剂、显色剂试剂及缓冲溶液，可以满足蔬菜、水果、环境水或粮食中农药残毒现场快速分析的应用并保证测试结果的准确性。
本发明有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂的制备方法，其步骤如下1)将所需的胆碱酯酶、缓冲溶液、稳定剂放入烧杯中，搅拌均匀，制成液体酶试剂；2)将上述液体酶试剂0.1mL、0.2mL或0.3mL放入2mL的安碚瓶中，抽成真空后封口；平时于4℃的冰箱中保存。
本发明有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂的使用方法1)配酶试剂使用时将所需酶试剂转移至塑料滴瓶中，加入缓冲液稀释，每0.3mL酶试剂稀释至10mL刻度处，一般0.3mL酶试剂为一个试剂包；2)底物试剂将所需底物用水稀释，每0.4g.底物稀释至100mL刻度处，每个试剂包内装10mL；底物为碘化硫代乙酰胆碱、溴化硫代乙酰胆碱、氯化硫代乙酰胆碱、碘化硫代丁酰胆碱、溴化硫代丁酰胆碱胆碱、氯化硫代丁酰胆碱、氯化乙酰胆碱、2，6-二氯靛酚乙酯、2，6-二溴靛酚乙酯、2，6-二氯靛酚丙酯或2或6-二溴靛酚丙酯之一；3)显色剂试剂仅酶催化动力学光度法测量时使用；将所需显色剂用缓冲溶液稀释，每0.5g显色剂稀释至100mL刻度处，每个试剂包内装10mL；显色剂为5，5’-二硫代-2，2’-二硝基苯甲酸(DTNB)；将上述3种试剂包各一个、用1个塑料洗瓶盛装500mL缓冲液、塑料滴瓶3-5个放入检测箱中。每个检测箱中的试剂可检测待测样品为0.2～1.0g或待测样品汁0.1～0.5mL的样品125组。缓冲溶液使用时也转入塑料滴瓶中，方便取用。这样，在进行现场检测操作时，便不需要很多玻璃器皿，使得操作方便快捷，可靠性高；4)检测使用检测箱中的试剂，用农药残毒速测仪通过酶催化动力学光度法测量、通过颜色变化，或者通过酸度测量方法之一，进行有机磷及氨基甲酸酯类农药残留毒性的快速筛选检测。
具体实施例方式
根据检测工作的需要，检测箱中的试剂包中的试剂量可按比例缩小或扩大，以便于工作，减少浪费。由于缓冲溶液还用于提取样品或空白提取液，需要量大，可根据需要适时补充。
实施例1将30μl乙酰胆酯碱酶、2mL0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl缓冲溶液、5mg牛磺酸钠放入烧杯中搅拌均匀，制成液体酶试剂；将液体酶试剂0.1mL放入2mL的安碚瓶中，抽成真空后封口；平时于4℃的冰箱中保存。
需要对机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测时，按上述使用方法配制试剂包，用农药残毒速测仪通过酶催化动力学光度法测量进行检测。
实施例2将100μl丁酰胆碱酯酶、10mL 0.1M的pH＝7.8-8.2的磷酸盐缓冲溶液、20mg牛磺酸钠放入烧杯中搅拌均匀，制成液体酶试剂；将液体酶试剂0.3mL放入2mL的安碚瓶中，抽成真空后封口；平时于4℃的冰箱中保存。
需要对机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测时，按上述使用方法配制试剂包，用农药残毒速测仪通过酶催化动力学光度法测量进行检测实施例3将50μl乙酰胆碱酯酶、4mL 0.1M pH＝7.8-8.2的Tris-HCl缓冲溶液、8mg牛磺酸钠放入烧杯中搅拌均匀，制成液体酶试剂；将液体酶试剂0.2mL放入2mL的安碚瓶中，抽成真空后封口；平时于4℃的冰箱中保存。
需要对机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测时，按上述使用方法配制试剂包，通过颜色变化进行检测。
实施例4将80μl丁酰胆碱酯酶、8mL 0.1MpH＝7.8-8.2的磷酸盐缓冲溶液，16mg牛磺酸钠放入烧杯中搅拌均匀，制成液体酶试剂；将液体酶试剂0.3mL放入2mL的安碚瓶中，抽成真空后封口；平时于4℃的冰箱中保存。
需要对机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测时，按上述使用方法配制试剂包，用农药残毒速测仪通过酶催化动力学光度法测量进行检测实施例5将70μl乙酰胆碱酶、7mL 0.1MpH＝7.8-8.2的Tris-HCl缓冲溶液、13mg牛磺酸钠放入烧杯中搅拌均匀，制成液体酶试剂；将液体酶试剂0.3mL放入2mL的安碚瓶中，抽成真空后封口；平时于4℃的冰箱中保存。
需要对机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测时，按上述使用方法配制试剂包，通过酸度测量方法进行检测。
权利要求
1.一种有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂，其特征在于，其组分及配比为胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶之一 30-100μL、缓冲溶液0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸盐缓冲溶液或0.1M pH＝7.8-8.2Tris-HCL缓冲溶液之一2-10mL、稳定剂牛磺酸钠 5-20mg。
2.一种如权利要求1所述有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂，其特征在于，其组分及配比为胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶之一 50-80μL、缓冲溶液0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸盐缓冲溶液或0.1M pH＝7.8-8.2Tris-HCL缓冲溶液之一4-8mL、稳定剂牛磺酸钠 8-16mg。
3.一种如权利要求2所述有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂，其特征在于，其组分及配比为胆碱酯酶乙酰胆碱酯酶或丁酰胆碱酯酶之一 80μL、缓冲溶液0.1M pH＝7.8-8.2的磷酸盐缓冲溶液或0.1M pH＝7.8-8.2Tris-HCL缓冲溶液之一8mL、稳定剂牛磺酸钠 16mg。
4.一种有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂的使用方法，其步骤如下1)配酶试剂使用时将所需酶试剂转移至塑料滴瓶中，加入缓冲溶液稀释，每0.3mL酶试剂稀释至10mL刻度处，一般0.3mL酶试剂为一个试剂包；2)配底物试剂将所需底物用水稀释，每0.4g底物稀释至100mL刻度处，每个试剂包内装10mL；底物为碘化硫代乙酰胆碱、溴化硫代乙酰胆碱、氯化硫代乙酰胆碱、碘化硫代丁酰胆碱、溴化硫代丁酰胆碱、氯化硫代丁酰胆碱、氯化乙酰胆碱、2，6-二氯靛酚乙酯、2，6-二溴靛酚乙酯、2，6-二氯靛酚丙酯或2，6-二溴靛酚丙酯之一；3)配显色剂试剂仅酶催化动力学光度法测量时使用；将所需显色剂用缓冲溶液稀释，每0.5g显色剂稀释至100mL刻度处，每个试剂包内装10mL；显色剂为5，5’-二硫代-2，2’-二硝基苯甲酸；将上述3种试剂包各一个、用1个塑料洗瓶盛装缓冲液500mL、3-5个塑料滴瓶放入检测箱中；4)检测使用检测箱中的试剂，用农药残毒速测仪通过酶催化动力学光度法测量、通过颜色变化，或者通过酸度测量方法之一，进行有机磷及氨基甲酸酯类农药残留毒性的快速筛选检测。
5.一种有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂的制备方法，其步骤如下1)将所需的胆碱酯酶、缓冲溶液、稳定剂放入烧杯中搅拌均匀，制成液体酶试剂；2)将上述液体酶试剂0.1mL、0.2mL或0.3mL放入2mL的安碚瓶中，抽成真空后封口；平时于4℃的冰箱中保存。
全文摘要
本发明提供一种有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂及其制备方法与使用方法用。本发明有机磷及氨基甲酸酯类农药残毒快速检测用液体酶试剂的组分为胆碱酯酶；缓冲溶液；稳定剂。本发明的制备方法1)制液体酶试剂；2)将上述液体酶试剂放入安碚瓶中，抽成真空后封口，平时于4℃的冰箱中保存。本发明液体酶试剂在室温(20～25℃)下稳定储存15天以上，而保持酶的活性损失不超过10％，因此其配合使用底物试剂、显色剂试剂及缓冲溶液试剂，可以满足蔬菜、水果、环境水或粮食中农药残毒现场快速分析的应用，并保证测试结果的准确性。
文档编号C12Q1/00GK1731157SQ20051009038
公开日2006年2月8日 申请日期2005年8月16日 优先权日2005年8月16日
发明者邹明强, 王大宁, 张晓华, 邱月明, 王楠, 郭飞马 申请人:中国检验检疫科学研究院