专利名称：一种提高细胞内ros检测灵敏度的方法
技术领域：
本发明涉及一种提高细胞内ROS检测灵敏度的方法。
背景技术：
细胞内ROS(活性氧)的检测是医学科研实验中的常用检测指标，ROS的产生通过DCFH-DA(2’，7’二氯荧光素二乙酸酯)荧光染料进行检测。但由于ROS产生后存在时间较短而且不稳定，而且在各种研究中采用的细胞种类不同，所以在检测中结果经常不理想。本发明提供一种提高细胞内ROS检测灵敏度的方法。
技术方案本发明是以下技术方案进行的1、培养细胞长满单层后，用胰蛋白酶消化并混悬于含100mL/L FCS的DMEM培养液中，调整细胞数为2×107/L，以每孔100μL加入96孔培养板中。
2、置于37℃、50mL/L CO2/950mL/L空气的培养箱，24h后加入不同浓度的刺激物，并设对照组加入等量DMEM，继续孵育1小时。
3、去掉刺激物，加入DCFH-DA，再孵育1-2小时，孵育时间根据细胞种类进行调整。
4、去掉DCFH-DA，用PBS洗涤2次，检测细胞荧光强度。激发波长488nm，发射波长530nm。
特征孵育时间根据细胞种类进行调整。
权利要求
1.一种提高细胞内ROS检测灵敏度的方法。其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行(1)培养细胞长满单层后，用胰蛋白酶消化并混悬于含100mL/L FCS的DMEM培养液中，调整细胞数为2×107/L，以每孔100μL加入96孔培养板中。(2)置于37℃、50mL/L CO2/950mL/L空气的培养箱，24h后加入不同浓度的刺激物，并设对照组加入等量DMEM，继续孵育1小时。(3)去掉刺激物，加入DCFH-DA，孵育时间根据细胞种类进行调整。(4)去掉DCFH-DA，用PBS洗涤2次，检测细胞荧光强度。激发波长488nm，发射波长530nm。
2.根据权利要求1所述的改良的细胞内活性氧检测方法，其特征在于去掉刺激物后加入DCFH-DA孵育时间根据细胞种类进行调整。
全文摘要
一种提高细胞内ROS检测灵敏度的方法。培养细胞长满单层后，置于37℃、50mL/L CO
文档编号C12Q1/02GK1818621SQ200610049810
公开日2006年8月16日 申请日期2006年3月14日 优先权日2006年3月14日
发明者刘慧刚, 徐立红 申请人:浙江大学