专利名称：杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法
技术领域：
本发明杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法涉及一种通过选择适当的外植体并利用合理的激素配比和培育方法，获得大量杨树胚性细胞的方法。
背景技术：
胚性细胞(embryogenic cell)是一类与分生细胞相似，通常较小、近圆形，具较大的核和核仁并能够高度染色、胞质浓厚，可直接发育成为体细胞胚的独特细胞。
胚性细胞发生是细胞工程中植株细胞全能性表达形成的重要途径之一，对于进行体细胞融合、突变体筛选、种质资源保存、人工种子研制、基因转化技术及优良杂交组合扩繁等都具有重要的意义。随着细胞生物学和分子生物学等理论与技术的发展，胚性细胞发生技术将在植物抗病、抗虫、抗逆、改良性状以及基因工程育种等方面发挥更大的作用。
杨树(poplar)是世界上分布最广、适应性最强的树种，具有速生、优质、适应性强等特点，主要分布于北纬22°～70°的北半球温带和寒温带。我国有丰富的杨树资源，天然林面积约300万公顷，并且越来越受到人们的重视。但林木的生活周期长，限制了传统的常规育种的进展。通过研究杨树胚性细胞发生技术，以期为杨树育种等工作提供帮助。
发明内容
本发明杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法的目的在于为杨树育种提供一种新的方法。
为达上述目的，本发明提供一种杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法，即通过组培技术达到杨树胚性细胞发生最多时期，包括下述步骤第一步，以苗龄30～50天、苗高4～5cm的杨树组培苗茎段切成1～2mm作为外植体；第二步，接于XF培养基上脱分化100～140小时；第三步，第二步所得的愈伤组织转接至Y-2培养基上，进行再分化72～96小时。
所述的XF培养基为MS+2，4D 0-0.5mg/L+NAA 0-0.2mg/L+ZT 0-0.1mg/L+蔗糖25-35g/L+琼脂4-8g/L。
所述的Y-2培养基为MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA 0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂4-8g/L。
本发明的优点是通过培养基培养，克服了林木生活周期长，个体大的劣势，获得大量的，具有细胞全能性的杨树胚性细胞，为杨树育种提供帮助。
具体实施例方式
实施例1一种杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法，即通过组培技术达到杨树胚性细胞发生最多时期，包括下述步骤
第一步选择组培日龄40天，苗高4～5cm的瓶苗欧美杨(黑杨派)组培苗，将茎段切成1mm作为外植体；第二步接于XF培养基，即MS+2，4D 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4gg/L上脱分化120小时；第三步第二步所得的愈伤组织转接至Y-2培养基，即MS+6-BA0.2mg/L+KT 0.2mg/L+IAA 0.05+蔗糖30g/L+琼脂4g/L上，进行再分化72小时，此时即为胚性细胞发生最多的时期。
实施例2一种杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法，即通过组培技术达到杨树胚性细胞发生最多时期，包括下述步骤第一步选择苗龄30天，苗高4～5cm的毛白杨组培苗，将茎段切成1.5mm作为外植体；第二步接于XF培养基，即MS+NAA 0.1mg/L+ZT 0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4g/L上脱分化140小时；第三步第二步所得的愈伤组织转接至Y-2培养基，即MS+KT 0.2mg/L+ZT 0.1mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂4g/L上，进行再分化96小时，此时即为胚性细胞发生最多的时期。
权利要求
1.一种杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法，即通过组培技术达到杨树胚性细胞发生最多时期，包括下述步骤第一步以苗龄30～50天、苗高4～5cm的杨树组培苗茎段切成1～2mm作为外植体；第二步接于XF培养基上脱分化100～140小时；第三步第二步所得的愈伤组织转接至Y-2培养基上，进行再分化72～96小时。
2.根据权利要求1所述的杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法，其特征在于所述的XF培养基为MS+2，4D 0-0.5mg/L+NAA 0-0.2mg/L+ZT 0-0.1mg/L+蔗糖25-35g/L+琼脂4-8g/L。
3.根据权利要求1所述的杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法，其特征在于所述的Y-2培养基为MS+6-BA 0-0.4mg/L+KT 0.05-0.4mg/L+IAA 0.05-0.2mg/L+蔗糖20-30g/L+琼脂4-8g/L。
全文摘要
一种杨树胚性细胞发生技术体系的建立方法，即通过组培技术达到杨树胚性细胞发生最多时期，包括下述步骤第一步以苗龄30～50天、苗高4～5cm的杨树组培苗切成1～2mm的茎段作为外植体；第二步接于XF培养基上脱分化100～140小时；第三步第二步所得的愈伤组织转接至Y－2培养基上，进行再分化72～96小时。本发明的优点是通过培养基培养，克服了林木生活周期长，个体大的劣势，获得大量的，具有细胞全能性的杨树胚性细胞，为杨树育种提供帮助。
文档编号C12N5/04GK1962853SQ20061011868
公开日2007年5月16日 申请日期2006年11月23日 优先权日2006年11月23日
发明者苏敏, 宋学孟, 董举文, 张艳, 庞瑞华, 许雄山, 章振华, 王凌健, 张承妹 申请人:上海光兆植物速生技术有限公司