专利名称：一种生产共轭亚油酸的方法及其专用菌株的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生产共轭亚油酸的方法及其专用菌株。
背景技术：
共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid，CLA)是由必需脂肪酸亚油酸(LinoleicAcid，LA)衍生的18碳共轭双稀酸的多种位置和几何异构体的总称。CLA的异构体十分丰富，其主要位置异构体有四种即C8，C10；C9，C11；C10，C12和C11，C13，而每种位置异构体又有四种几何异构体即cc，ct，tc和tt，其中c9，t11和t10，c12两种异构体被证实具有很强的生理活性，因为它们能够结合到动物细胞的磷脂层中，其结构见图1所示。
天然的CLA主要存在于反刍动物牛、羊等的乳脂及其肉制品中，山羊肉中CLA的含量是猪肉和鸡肉中的10倍。Dhiman等报道了牛奶中CLA的含量为7.3～9.0mg/g脂肪，其中90％为c9，t11-CLA，CLA的含量与奶牛饮食有关，通过调整奶牛的饮食，牛奶中CLA的含量能够得到明显的提高。奶制品中的CLA主要来源于以下四个方面(1)直接从饲料中吸收CLA；(2)瘤胃细菌在瘤胃中异构化作用形成CLA；(3)乳腺组织和脂肪组织中含有脱氢酶将生物氢化中间产物11t-18∶1转化成CLA；(4)直接利用脂肪组织中的CLA。
共轭亚油酸(Conjugated Linoleic Acid，CLA)是一种非常令人感兴趣的营养添加剂，大量的体内体外试验证明CLA能诱导能量利用并导致体重的下降，且不储存脂肪；能缓和如厌食、蛋白质分解等免疫反应的副作用；具有抗突变、抑制癌细胞中的蛋白质和核酸的合成，此外CLA还可提高人类某些生理状态，如提高体内维生素A的水平。由于CLA具有丰富的营养价值，同时食品中含量很低，所以如何低成本、高纯度地制备CLA成为研究焦点，CLA的商业化生产方法为亚油酸的碱异构化法。碱异构化法的原料是含有77％亚油酸的葵花籽油，经过KOH(或NaOH)强碱的作用转化成CLA，这种方法比较简单，且产物易于处理，在商业上应用较广，但其缺点是产生一系列具有位置和几何异构的CLA混合物。相比之下，利用乳酸菌中提取的亚油酸异构酶生产CLA具有重要意义。因为CLA的微生物异构化具有选择性，其亚油酸异构酶能专一地作用于脂肪酸的12C双键，而不是9C双键，因而能把亚油酸主要转化为c9，t11-CLA，而且微生物在培养方面较为灵活、方便。而乳酸菌兼性厌氧，培养条件易于控制，是人体益生菌，可直接用于食品、保健品和药品。同时乳酸菌含有的亚油酸异构酶对作用底物具有很强的专一性。
微生物生成CLA的机理是微生物能够利用自身的酶将LA转化成CLA，Jiang等认为细菌产生CLA是为了消除亚油酸对细胞的危害作用。1969年Kepler等采用亚油酸异构酶催化亚油酸得到c9，t11-CLA，亚油酸异构酶可来源于多种微生物如乳酸杆菌(Lactobacillus)、丁酸弧菌(Butyrivibrio)、丙酸杆菌(Propionibacterium)、真杆菌属(Eubacterium)等，其中Lactobacillus、Eubacterium、Butyrivibrio的微生物具有c9，t11亚油酸异构酶的活性，而Propionibacterium有tl0，c12亚油酸异构酶的活性。因此自20世纪90年代末国内外开始了乳酸菌发酵生产CLA的培养条件的研究，目前，国内外乳酸菌合成CLA的研究尚处在筛选和转化条件研究阶段。研究表明在MRS培养基中，嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳杆菌(L.casei)Bs5、Bs7等具有将亚油酸转化为CLA的能力有差别，L.acidophilus产量最高。产生CLA的最佳条件为亚油酸加量0.1％(m/v)，培养时间24 h，CLA的含量达8.247μg/mL，即使增加亚油酸量，延长培养时间也不能提高CLA的产量。培养基的成分对不同的乳酸菌发酵亚油酸生成CLA也有影响，在MRS培养基中亚油酸含量大于0.5mg/mL时，乳酸乳球菌(Lactobacillus lactis)停止生长。
发明内容
本发明的目的是提供一种生产共轭亚油酸的方法及其专用菌株。
本发明所提供的生产共轭亚油酸的菌株是植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)SY，已于2007年03月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为北京市海淀区中关村北一条13号)，保藏登记号为CGMCC No.1974。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，是从市售发酵乳制品中分离得到的。其分离方法如下取10g发酵乳制品加入内装100ml无菌水和玻璃珠的三角瓶中，于100转/min摇床上振荡20min，取0.5ml加入4.5ml无菌水中，再依次稀释10-2，10-3，10-4，10-5，10-6倍，分别取以上细菌悬液0.1ml在M R S培养基平板上均匀涂布，超净工作台内吹至略干；每浓度3个重复，置于37℃恒温箱中培养1-2天，挑取单菌落进行稀释划线分离纯化。接种于含有CaCO3的M R S培养基中，37℃培养24h，挑取具有溶钙圈的单菌落，进行革兰氏染色和触酶实验。对初筛获得的具有触酶阳性和G+的菌株进行发酵培养，最终筛选出性状优良菌种，接种API 50CHL试纸条观察糖代谢情况，鉴定结果如表1所示表1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974的生理生化特性
注“+”表示阳性结果，即可利用该产物进行代谢；“-”表示阴性结果，即不可利用该产物进行代谢。“对照”为API50 CHL V.5.0乳酸菌鉴定系统中自带的对照。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974呈革兰氏阳性，短杆状，能在中性和偏酸的环境中生长。结合形态特征和生理生化特性，将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。
本发明所提供的生产共轭亚油酸的方法，是在发酵培养基中培养植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，得到共轭亚油酸。
所述发酵培养基可为含有植物油乳化液的脱脂乳培养基。
所述植物油可为现有的植物油，优选为亚油酸含量较高的葵花籽油。
当所述植物油乳化液为葵花籽油乳化液时，所述发酵培养基中所述葵花籽油的终浓度为6～10mg/ml。
所述葵花籽油乳化液按照如下方法配制将300-600mg葵花籽油与0.2-0.5ml吐温-80(Tween-80)混合乳化，得到葵花籽油乳化液。
所述脱脂乳培养基按照如下方法配制将12g脱脂奶粉溶解于100ml水中。
所述方法中，培养温度为37℃，培养时间8-24小时。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974能产生较高酶活力的亚油酸异构酶。本发明利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCCNo.1974生产共轭亚油酸的方法，使用葵花籽油替代纯亚油酸，原料来源广泛，价格便宜，降低了生产成本，并具有较高的共轭亚油酸转化率。
图1为实施例1的DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析洗脱图谱图2为实施例1的酶活检测3为实施例1的凝胶过滤层析洗脱及酶活检测图谱图4为实施例2的DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析洗脱图谱图5为实施例2的酶活检测6为实施例2的凝胶过滤层析洗脱及酶活检测图谱图7为实施例3的DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析洗脱图谱图8为实施例3的酶活检测9为实施例3的凝胶过滤层析洗脱及酶活检测图谱具体实施方式
本发明研究了植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974在培养基质中转化葵花籽油生成CLA的方法，从培养基种类，葵花籽油浓度，培养时间，氧气浓度等多方面综合考虑，优化出了适宜的反应条件，确定发酵生产CLA的影响因素，获得CLA高产菌株，以保证CLA的高转化率。
本发明中设定个组分设定及含量分别如下培养基MRS培养基、脱脂乳培养基葵花籽油浓度0～12mg/ml培养时间0～36h氧气条件微氧、未充N2驱除空气条件在以上各个组分设定的含量范围内，通过试验进行优化。优化指标为CLA生成量，采用紫外分光光度法测定CLA。优选出的各个组分别为培养基脱脂乳培养基葵花籽油浓度6～10mg/ml培养时间8～24h氧气条件微氧(充N2驱除空气)下面结合实施实例对本发明的内容作进一步的说明下述实施例中的种子培养基为MRS培养基蛋白胨10.0g，肉浸膏10.0g，酵母抽提物5.0g，葡萄糖20.0g，三水醋酸钠晶体5.0g，Tween 80 1ml，柠檬酸二铵2.0g，K2HPO42.0g，琼脂15 0g，MgSO4·7H2O 0.2g，MnSO4·2H2O 0.05g，蒸馏水1000ml。
实施例1、植物乳杆菌(Lactobaciilus plantarum)SY CGMCC No.1974生产共轭亚油酸及亚油酸异构酶的提取纯化一、共轭亚油酸的生产该实施例中所用的发酵培养基按照如下方法配制(1)葵花籽油乳化液的配制葵花籽油(上海佳格食品有限公司，多力牌100％纯正葵花籽油)300mg，吐温-80(Tween-80)0.36ml，去离子水5ml，超声波乳化(25℃，超声频率40KHz)10min，0.22μm微孔过滤膜过滤除菌，得到葵花籽油乳化液。
(2)脱脂乳培养基的配制将12g脱脂奶粉(三元乳品股份有限公司)溶解于100ml水中，115℃、10min灭菌备用。
(3)发酵培养基的配制将(1)的葵花籽油乳化液加入到(2)的脱脂乳培养基中，使葵花籽油的终浓度为10mg/ml，得到发酵培养基。
将经活化的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974用接种环挑取2环于种子培养基中，37℃培养8h后，取2％(体积比)种子培养液转接至装有4L发酵液的5L发酵罐中，37℃培养24小时。其中，发酵罐的通风量(通氮气)0-24小时，0.5vvm(即2L氮气/min)。
发酵结束后，采用紫外分光光度法测定CLA异构体的总量，具体方法如下1、将CLA标准品用正己烷配成不同浓度梯度溶液，测定233nm处吸光度值，以CLA浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。2、10ml发酵液中加入20ml V(氯仿)/V(甲醇)＝2∶1，4500r/min(2000g)离心5min，收集下层液体，用无水Na2SO4干燥，并真空干燥脱除有机溶剂。将上述脂肪酸提取物用10ml正己烷溶解，待测。3、紫外分光光度计在200～350nm范围内扫描，并读取233nm处的吸收值，参比为不接种的培养基加入于样品同量的葵花籽油，其他步骤同样品。
结果表明在发酵培养基中37℃培养24小时CLA异构体的总生成量为109.235μg/mL发酵液。
二、亚油酸异构酶的提取纯化1、亚油酸异构酶的提取将步骤一得到的发酵液进行10 000×g，15min的离心，收集细胞。向收集的细胞中加入0.1M磷酸钾缓冲液(pH6.0)和溶菌酶，使菌体的最终含量为2×1011CFU/ml，溶菌酶的终浓度为40g/L。用纳米NCJJ0.005/150型超高压均质机(河北廊坊通用机械有限公司)进行细胞破碎。其中，超高压均质的均质工作压力为140MPa，均质阀片直径0.1mm，重复四次，每次处理10分钟，处理温度为0℃。均质液经10000×g离心60min，取上清液部分，作为进一步纯化的粗酶液。
2、亚油酸异构酶的纯化a.(NH4)2SO4分级沉淀在冰水浴条件下，向步骤1得到的粗酶液中加入(NH4)2SO4至饱和度为80％(在冰浴中将研磨细的(NH4)2SO4边搅拌边缓慢的加入到粗酶液中，每升粗酶液加入(NH4)2SO4516克)4℃静置过夜、离心(10 000×g，30min)收集沉淀(蛋白)，将每次所得沉淀用2-3倍体积的磷酸钾缓冲液(0.1M，pH6.0)悬浮，用聚乙二醇浓缩，得到酶液。
b.离子交换层析所得的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的DEAE-Sepharose FastFlow层析柱(1.0cm×20cm)(Pharmacia公司)，用0～0.8mol/L NaCl的缓冲液以3ml/min流速进行线性洗脱每管收集5mL，NaCl线性洗脱出4个蛋白峰，如图1。其中峰III为酶活力峰，如图2所示，即NaCl摩尔浓度为0.3-0.5mol/L洗脱峰具有亚油酸异构酶活性。
其中，亚油酸异构酶酶活，以在最适条件(30℃，5h，pH6.0)下，以亚油酸为底物进行反应，每小时生成1μg共轭亚油酸的酶量定义为一个酶活力单位。其中，共轭亚油酸采用紫外分光光度法测定，具体方法如下1)将CLA标准品用正己烷配成不同浓度梯度溶液，测定233nm处吸光度值，以CLA浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。2)5ml洗脱液中加入10ml V(氯仿)/V(甲醇)＝2∶1，4500r/min(2000g)离心5min，收集下层液体，用无水Na2SO4干燥，并真空干燥脱除有机溶剂。将上述提取物用10ml正己烷溶解，待测。3)紫外分光光度计在200～350nm范围内扫描，并读取233nm处的吸收值，参比为正己烷溶液，其他步骤同样品。
c.酶液透析脱盐将步骤b中收集的具有亚油酸异构酶活性的酶液装入透析袋中，浸入1000ml磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)中，4℃下磁力搅拌12h，用10mM的NaCl缓冲液(pH6.0)检查脱盐情况，至无沉淀产生时，达到透析平衡。
d.凝胶过滤层析将步骤c中到达到透析平衡的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的Sephacryl 200HR凝胶层析柱(1.6cm×100cm) (Pharmacia公司)，以0.3ml/min流速，用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)洗脱，每管收集3mL，对每管洗脱液进行酶活检测，收集具有亚油酸异构酶活性的部分。结果如图3所示，第30-37管洗脱液具有亚油酸异构酶活性。该具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液的酶比活力为246.24U/mg洗脱峰酶液。经换算，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCCNo.1974菌体的亚油酸异构酶活性为241.32U/108CFU。其中，亚油酸异构酶活性的测定方法同步骤b。
实施例2、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974生产共轭亚油酸及亚油酸异构酶的提取纯化一、共轭亚油酸的生产该实施例中所用的发酵培养基按照如下方法配制(1)葵花籽油乳化液的配制葵花籽油(上海佳格食品有限公司，多力牌100％纯正葵花籽油)400mg，吐温-80(Tweenum 80)0.44ml，去离子水5ml，超声波乳化(25℃，超声频率40KHz)10min，0.22μm微孔过滤膜过滤除菌，得到葵花籽油乳化液。
(2)脱脂乳培养基的配制将12g脱脂奶粉(北京三元乳品股份公司提供)溶解于100ml水中，115℃、10min灭菌备用。
(3)发酵培养基的配制将(1)的葵花籽油乳化液加入到(2)的脱脂乳培养基中，使葵花籽油的终浓度为8mg/ml，得到发酵培养基。
将经活化的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974用接种环挑取2环于种子培养基中，37℃培养8h后，取2％(体积比)种子培养液转接至装有4L发酵液的5L发酵罐中，37℃微氧(充N2驱除空气)培养12小时。其中，发酵罐的通风量(通氮气)0-12小时，0.5vvm(即2L氮气/min)。
发酵结束后，采用紫外分光光度法测定CLA异构体的总量，测定方法同实施例1的步骤一。
结果表明在发酵培养基中37℃微氧培养12小时CLA异构体总生成量为118.336μg/mL发酵液。
二、亚油酸异构酶的提取纯化1、亚油酸异构酶的提取将步骤1中的发酵液进行10000×g，15min的离心，收集细胞。向收集的细胞中加入0.08M磷酸钾缓冲液(pH5.5)和溶菌酶，使细胞的最终含量为5×1010CFU/ml，溶菌酶的终浓度为20g/L。用纳米NCJJ0.005/150型超高压均质机(河北廊坊通用机械有限公司)进行细胞破碎。其中，超高压均质的均质工作压力为130MPa，均质阀片直径0.05mm，重复四次，每次处理10min，处理温度为0℃。均质液经10000×g离心60min，取上清液部分，作为进一步纯化的粗酶液。
2、亚油酸异构酶的纯化a.(NH4)2SO4分级沉淀在冰水浴条件下，向步骤1得到的粗酶液中加入(NH4)2SO4至饱和度为90％(在冰浴中将研磨细的(NH4)2SO4边搅拌边缓慢的加入到粗酶液中，每升粗酶液加入(NH4)2SO4603克，4℃静置过夜、离心(10000×g，30min)收集沉淀(蛋白)，将每次所得沉淀用2-3倍体积的磷酸钾缓冲液0.08M pH5.5悬浮，用聚乙二醇浓缩，得到酶液。
b.离子交换层析所的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.08M pH5.5)预平衡的DEAE-Sepharose FastFlow层析柱(1.0cm×20cm)(Pharmacia公司)，用0～0.8MNaCl的缓冲液以3ml/min流速进行线性洗脱每管收集5mL，NaCl线性洗脱出4个蛋白峰，如图4。其中峰III为酶活力峰，如图5所示，即NaCl摩尔浓度为0.3-0.5mol/L洗脱峰具有亚油酸异构酶活性。
其中，亚油酸异构酶酶活的测定方法同实施例1。
c.酶液透析脱盐将步骤b中收集的具有亚油酸异构酶活性的酶液装入透析袋中，浸入1000ml磷酸钾缓冲液(0.08M pH5.5)中，4℃下磁力搅拌12h，用10mM的NaCl缓冲液(pH5.5)检查脱盐情况，至无沉淀产生时，达到透析平衡。
d.凝胶过滤层析将步骤c中到达到透析平衡的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的Sephacryl 200HR凝胶层析柱(1.6cm×100cm) (Pharmacia公司)，以0.3ml/min流速，用磷酸钾缓冲液(0.08M pH5.5)洗脱，每管收集3mL，对每管洗脱液进行酶活检测，收集具有亚油酸异构酶活性的部分。结果如图6所示，第30-36洗脱液具有亚油酸异构酶活性。该具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液的酶比活力235.11U/mg洗脱峰酶液。经换算，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCCNo.1974菌体的亚油酸异构酶活性为228.05U/108CFU。其中，亚油酸异构酶活性的测定方法同实施例1。
实施例3、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974生产共轭亚油酸及亚油酸异构酶的提取纯化一、共轭亚油酸的生产该实施例中所用的发酵培养基按照如下方法配制(1)葵花籽油乳化液的配制葵花籽油(上海佳格食品有限公司，多力牌100％纯正葵花籽油)600mg，吐温-80(Tween-80)0.5ml，去离子水5ml，超声波乳化(25℃，超声频率40KHz)10min，0.22μm微孔过滤膜过滤除菌，得到葵花籽油乳化液。
(2)脱脂乳培养基的配制将12g脱脂奶粉(三元乳品股份有限公司)溶解于100ml水中，115℃、10min灭菌备用。
(3)发酵培养基的配制将(1)的葵花籽油乳化液加入到(2)的脱脂乳培养基中，使葵花籽油的终浓度为6mg/ml，得到发酵培养基。
将经活化的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974用接种环挑取2环于种子培养基中，37℃培养8h后，取2％(体积比)种子培养液转接至装有4L发酵液的5L厌氧发酵罐中，37℃微氧培养(充N2驱除空气)培养8小时。其中，发酵罐的通风量(通氮气)0-8小时，0.5vvm(即2L氮气/min)。
发酵结束后，采用紫外分光光度法测定CLA异构体总量，测定方法同实施例1的步骤一。
结果表明在发酵培养基中37℃微氧(充N2驱除空气)培养8小时CLA的生成量为100.895μg/mL发酵液。
二、亚油酸异构酶的提取纯化1、亚油酸异构酶的提取将步骤1中的发酵液进行10000×g，15min的离心，收集细胞。向收集的细胞中加入0.15M磷酸钾缓冲液(pH7.0)和溶菌酶，使细胞的最终含量为2×1012CFU/ml，溶菌酶的终浓度为50g/L。用纳米NCJJ0.005/150型超高压均质机(河北廊坊通用机械有限公司)进行细胞破碎。其中，超高压均质的均质工作压力为150MPa，均质阀片直径0.15mm，重复四次，每次处理10min，处理温度为0℃。均质液经10000×g离心60min，取上清液部分，作为进一步纯化的粗酶液。
2、亚油酸异构酶的纯化a.(NH4)2SO4分级沉淀在冰水浴条件下，向步骤1得到的粗酶液中加入(NH4)2SO4至饱和度为60％(在冰浴中将研磨细的(NH4)2SO4边搅拌边缓慢的加入到粗酶液中，每升粗酶液加入(NH4)2SO4361克，4℃静置过夜、离心(10000×g，30min)收集沉淀(蛋白)，将每次所得沉淀用2-3倍体积的磷酸钾缓冲液(0.15M pH7.0)悬浮，用聚乙二醇浓缩，得到酶液。
b.离子交换层析所的酶液上样上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的DEAE-SepharoseFast Flow层析柱(1.0cm×20cm)(Pharmacia公司)，用0～0.8MNaCl的缓冲液以3ml/min流速进行线性洗脱每管收集5mL，NaCl线性洗脱出4个蛋白峰，如图7。其中峰III为酶活力峰，如图8所示，即NaCl摩尔浓度为0.3-0.5mol/L洗脱峰具有亚油酸异构酶活性。
其中，亚油酸异构酶酶活的测定方法同实施例1。
c.酶液透析脱盐将步骤b中收集的具有亚油酸异构酶活性的酶液装入透析袋中，浸入1000ml磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)中，4℃下磁力搅拌12h，用10mM的NaCl缓冲液(pH6.0)检查脱盐情况，至无沉淀产生时，达到透析平衡。
d.凝胶过滤层析将步骤c中到达到透析平衡的酶液上样到用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)预平衡的Sephacryl 200HR凝胶层析柱(1.6cm×100cm) (Pharmacia公司)，以0.3ml/min流速，用磷酸钾缓冲液(0.1M pH6.0)洗脱，每管收集3mL，对每管洗脱液进行酶活检测，收集具有亚油酸异构酶活性的部分。结果如图9所示，第31-36管洗脱液具有亚油酸异构酶活性。该具有亚油酸异构酶活性的洗脱峰酶液的酶比活力219.33U/mg洗脱峰酶液。经换算，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCCNo.1974菌体的亚油酸异构酶活性为210.92U/108CFU。其中，亚油酸异构酶活性的测定方法同实施例1。
权利要求
1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974。
2.一种生产共轭亚油酸的方法，是在发酵培养基中培养植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，得到共轭亚油酸。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述发酵培养基为含有植物油乳化液的脱脂乳培养基。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述植物油乳化液优选为葵花籽油乳化液，所述发酵培养基中所述葵花籽油的终浓度为4～10mg/ml。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述葵花籽油乳化液按照如下方法配制将300-600mg葵花籽油与0.2-0.5ml吐温-80混合乳化，得到葵花籽油乳化液。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述脱脂乳培养基按照如下方法配制将12g脱脂奶粉溶解于100ml水中，得到脱脂乳培养基。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述方法中，培养温度为37℃，培养时间8-24小时。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述方法中，所述发酵培养基中葵花籽油的终浓度为10mg/ml，培养温度为37℃，培养时间24小时，所述发酵的通风量为1.5-3L氮气/min。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述方法中，所述发酵培养基中葵花籽油的终浓度为6mg/ml，培养温度为37℃，培养时间12小时，所述发酵的空气流量为1.5-3L氮气/min。
10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述方法中，所述发酵培养基中葵花籽油的终浓度为4mg/ml，培养温度为37℃，培养时间8小时，所述发酵的空气流量为1.5-3L氮气/min。
全文摘要
本发明公开了一种生产共轭亚油酸的方法及其专用菌株。本发明所提供的用于生产共轭亚油酸的菌株是植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974。本发明所提供的生产共轭亚油酸的方法，是在发酵培养基中培养植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)SY CGMCC No.1974，得到共轭亚油酸。本发明生产共轭亚油酸的方法，使用葵花籽油替代纯亚油酸，原料来源广泛，价格便宜，降低了生产成本，并具有较高的共轭亚油酸转化率。
文档编号C12P7/64GK101092603SQ20071009965
公开日2007年12月26日 申请日期2007年5月25日 优先权日2007年5月25日
发明者吕加平, 王丽敏, 任星环, 江均平 申请人:中国农业科学院农产品加工研究所