专利名称：水稻叶形态建成调控基因rlal1及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于植物基因工程领域。具体的说，本发明涉及一种利用图位克隆技术克隆水
稻及W丄7 (i ew/w^ """i^ge^"g/e丄ea/7 )基因，以及利用转基因互补实验鉴定该基因的 功能；同时还涉及利用该基因物对水稻叶片反向巻曲及叶倾角大调控，用以获得农作物的 理想株型，提高水稻的产量。
背景技术：
水稻是我国第一大粮食作物，也是单子叶植物的理想模式植物。从叶片形态构造分析， 叶片的发育包括叶原基的起始，叶片近远轴、基顶轴和中侧轴三个轴向的极性分化，在此 过程中的任何改变都会导致叶片的不正常发育，直接影响到叶片的形态。如叶片在近远轴 发生极性的反转，会导致叶异常，如正巻、反巻，甚至辐射状叶的出现。目前已分离出多 个与叶近轴面特征决定相关的基因家族，其中研究较多的是HD-ZIPIII家族、MYB家族 和LOB-Domain家族。而YABBY基因家族和04i P家族也已经确定与叶远轴面分化有关。
水稻的前四叶的叶原基在胚中已经形成，极性分化时基顶轴的基部分化为叶鞘(双子叶 植物中分化为叶柄)，顶部分化为叶片；叶片基部存在着缺少叶绿素的白色带状部分为叶枕。 在幼叶中，叶枕部分主要由薄壁组织组成；当叶片和叶鞘完全伸展后，叶枕的上部细胞开 始伸长，其基部垂直水平的角度为叶倾角。目前的研究表明油菜素内酯和生长素均能影响 叶倾角的大小。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种能影响水稻叶片巻曲及叶倾角大小的蛋白质及 其基因，以及由此获得的转基因植物细胞，和利用所述基因对水稻叶片进行改造的方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种水稻叶形态建成调控基因i i^4丄7编码的蛋白 质，其具有SEQIDNO: 2所示的氨基酸序列。
作为本发明的蛋白质的改进上述氨基酸序列还包括在Seq ID No: 2所示的氨基酸 序列中添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸或其他物种的同源序列而生成的氨基酸
序列或衍生物。
本发明还提供一种编码上述两种蛋白质的基因，其具有SeqIDNo: 1所示的核苷酸序列。
作为本发明的基因的改进上述核苷酸序列还包括在Seq ID No: 1所示的核苷酸序 列中添加、取代、插入或缺失一个或多个核苷酸生成的突变体、等位基因或衍生物。 本发明还提供一种包含上述基因的质粒。 本发明还提供一种包含上述基因的植物表达载体。
本发明还提供一种含有上述基因序列的宿主细胞(即转基因植物细胞)，该细胞可为 大肠杆菌细胞、农杆菌细胞或植物细胞。
本发明还提供一种改良水稻叶片巻曲及叶倾角大小的方法，包括用具有SeqIDNo: 1
所示的核苷酸序列的基因转化水稻细胞，再将转化后的水稻细胞培育成植株。 对本发明作如下的进一步具体说明
本发明的目的是提供一种从水稻突变体仏w/We ""J/arge朋g/e /ea//中克隆的新基因 i ^4丄/，如SeqIDNo: 1所示的DNA序列，也包括与Seq ID No: 1所示的DNA序列 至少有70%同源性的基因序列。本发明中的Seq ID No: 2所示的蛋白质属于春化类似蛋 白，其中进行一个或几个替换、插入或缺失所获得的功能类似物。另外，也包括在SeqID No: 1中添加、取代、插入或缺失一个或多个核苷酸而生成的突变体、等位基因或衍生物， 具有相同功能的序列也能达到本发明的目的。
本发明的另一个目的是提供一种用i 丄A^基因进行高效的植物转化的方法，具体地 说，本发明提供了具有Seq ID No: 1所示的序列的基因或基因部分片段的载体，其中， 如图4所示的pCAMBIA130(K/ W丄7，该载体可以表达有上述核苷酸序列编码的多肽或其 同源类似物。
本发明还提供了一种利用植物表达载体转化植物细胞影响水稻叶巻曲及叶倾角的方 法，具体地是利用植物表达载体转化植物细胞以影响农作物叶片形态及叶倾角的方法。 实现本发明的具体技术步骤如下
一、 水稻反巻横生叶突变体Wa〃的分离和遗传分析
本发明的水稻反巻横生叶的突变体^^//来自云稻32自然突变。通过与野生型水稻的 正反交实验，证明该突变体受隐性单基因控制，如图1所示。
二、 图位克隆控制水稻叶形的/ i^i:7基因
1、 i 丄^L7基因的初步定位
为了分离/ i^丄7基因，本发明首先组建了两个定位群体，由/"/ /7分别与籼稻品种南京6
号和明恢63(/mfca)杂交组配成两个F2定位群体，再通过图位克隆的方法，利用STS、 SSR 等分子标记对/ 丄^丄7位点进行初步定位，将其初步定位在第2染色体的短臂上，并介于HSll 和HS17两STS标记之间，见图2。
2) 、 / 丄v4丄7基因的精细定位
通过对STS11和STS17两个标记之间的BAC序列分析，发展新的SSR、 STS标记将 i ^4丄7精确定位于BACAP005412和AP007224之间重叠的区段上HS37和HS52标记之 间64kb范围之内，并且与分子标记HS45共分离(图3)，通过分析此区段开放阅读框(ORF) 推测候选基因。
3) 、 i i^丄/基因的鉴定和功能分析
通过转基因技术，结果表明本发明获得了使突变体恢复正常表型的转基因水稻(图5、 6、 7)，证明了本发明正确克隆了 基因(SeqIDNo: 1)，氨基酸序列分析表明i 丄^L
编码一个春化不敏感类似蛋白(SeqIDNo: 2)。
叶片形态是水稻"理想株型"的重要组成部分，也是当前超高产水稻育种关注的重点。 高产育种通常采用大叶、长叶来提高生物合成量而实现产量的提高，但大型叶片容易引起 披垂，导致下部叶片光照不足，并诱发病虫害的发生。i Z^L7基因的克隆和应用，使稻株 能够保持叶片挺直，减小叶倾角，改善植株的受光姿态，提高光能利用效率。因而，本发 明能对叶形态及叶倾角进行改良，最终能提高水稻产量。
本发明利用水稻叶形态突变体变体，通过图位克隆技术首次在水稻中克隆到了 i ^L4丄7 基因，该基因编码一类春化不敏感类似蛋白，在水稻中控制了叶巻曲与叶角的大小，其它 物种的同源基因主要功能是春化和调控开花。通过对i i^丄/基因的功能解读，进一步阐明 了植物特别是禾本科植物叶形态建成的遗传机制及其作用机理，为理想株型育种，创建水 稻新种质打下基础。
下面结合附图对本发明的具体实施方式
作进一步详细说明。
图1是水稻反巻横生叶与野生型材料的表型；左图为突变体，右图为野生型； 图2是i i^4"基因在水稻第2染色体上的初步定位图； 图3是i ^4"基因的精细定位图4是pCAMBIA1300- i 丄^4"载体图谱；
图5是功能互补实验To转基因水稻植株的表型；
图6是rto/7与To转基因水稻植株的叶片横切面表型；左图为突变体叶片，右图为转 基因叶片；
图7是Wfl〃与To转基因水稻植株的叶倾角表型；左图为突变体叶倾角，右图为转基 因叶倾角。
具体实施例方式
实施例l:
1、 水稻材料
水稻(Oyza sa"va丄.)突变体Wa〃 (mvo/j^ /arge朋g/e /ea/7)，原始野生材料为粳稻 品种"云稻32"。其等位突变体为粳稻品种"日本晴"。
2、 分析和定位群体-
纯合的r/fl〃突变体和野生型品种明恢进行杂交，F!代自交，得到F2群体，并从中选 出1652株Wa/7突变个体作为定位群体。在分蘖期每株取1克左右的嫩叶，用来提取总 DNA。
3、 SSR和STS标记定位W^4"基因 采用水稻微量DNA的快速提取方法从水稻叶片中提取用于基因定位的基因组DNA。 取大约0.2g水稻叶片，经液氮冷冻，在直径5cm的小研钵中磨成粉状，转移到1.5 ml离 心管里提取DNA，获得的DNA沉淀溶解于150 pl超纯水中。每一个PCR反应用2 pl DNA样品。
i i^Z7基因的初步定位在/^//与南京6号组合的F2群体中选取91个隐性个体， 组成的小群体进行SSR分析，根据公布的粳稻和籼稻创建的分子遗传图谱，选取近似均匀 分布于各条染色体上的SSR引物，根据已知的反应条件进行PCR扩增，经5%琼脂糖凝 胶电泳分离和溴化乙啶(EB)染色，检测PCR产物的多态性，将7 ZA^初步定位在第2号 染色体短臂HS11和HS17标记之间。
i 丄v4丄/基因的精细定位:在r/W7与明恢63组合的F2群体中共选取1741株隐性个体， 在初定位的基础上继续设计SSR和STS标记，最终将i i^4ZJ精确定位于BAC号为 AP005412和AP007224之间重叠的区段上共64kb的范围之内，两边的分子标记为HS37 和HS52，并且与分子标记HS45共分离。引物序列为HS37: F: ACAGACAAGGGAAGGAAACC， R: ACGAGCAACAGGTGGTAGC; HS52: F: GCACATGGGAAGAAGTAAG， R: CCAACATCAGAAAGAAGACAG; HS45: ACTCTCCCCTCCTCTTCCA， R: AGGCTAGGAGTTAACCTCGC; 4、基因预测和比较分析-
根据精细定位的结果，在64kb范围内根据Rice Automated Annotation System (http://RiceGAAS.dna.affrc.go.ip)的预测，发现在此区间内共有10个候选基因，根据两标记 剩余的重组个体数及共分离标记，我们设计了各基因的测序引物，采用PCR方法分别从
和野生型品种基因组中扩增出这两个候选基因进行测序分析。发现其中1个基因的1 个DNA片段中，突变体Wa/7扩增的产物与野生型品种比较有两个碱基缺失。将这结果重 复验证两次，发现突变体r/fl〃基因与野生型比较都有这两个碱基缺失。根据BAC克隆 P0463E12序列的基因注释信息(NCBI)，预测此基因编码一个螺旋巻曲蛋白，该基因与拟 南芥上的纤连蛋白m和锌指蛋白及小麦中的OsVIL2 (VIN3-like)春化不敏感类似蛋白基因 同源性很高。
实施例2:
植物转化
将BAC克隆P0463E12用BglII和Sail完全酶切，电泳分离后，割取7.4kb的DNA片 段连接到pCAMBIA1300中，该克隆覆盖了整个ORF的基因组区域，包括ATG上游还包 括ATG上游1.84KB启动子序列。这个质粒通过电击的方法转入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)株系EHA105中转化水稻。我们利用突变体幼胚诱导的愈伤组织，经过诱导 培养基培养3周后，挑选生长旺盛愈伤用作转化的受体。用含有双元质粒载体的EHA105 菌株侵染水稻愈伤，在黑暗、25'C条件下共培养3天后，在含有40mg/LHygromycin的筛 选培养基上培养。筛选抗性愈伤在含有50mg/L预分化培养基上培养10天左右。将预分化 的愈伤转至分化培养基上在光照条件下培养。 一个月左右得到抗性转基因植株。对植株进 行鉴定和连续的观察，发现植株叶片恢复了正常形态。与同时期的突变体比较，转基因植 株叶片平展而不反向巻曲，同时叶倾角变小。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明 不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直 接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
序列表
SEQIDNO: 1
1 ATGGATCCAC CCTACGCAGG TCGGTCAGCG CCGCCCCCGC ATCCGCGGTT TTCGCXTTGT
61 TTTTTTTTTT TGTTGTTGTT GTTGCGTGTG TGTGGTGGTG GTGATGGCTC AGGTCTCGCG
121 GCGGCGTCGG GGGGAGCTCG ATCTGTTTGT TCCGGCGACG AATCCGCTGT TCCGGCGGTG
181 TAATTGCGGG CTTGGTGGTG GAGGAGGAGG AATTTGTGGG CGTGGATTTT AGGGTGGGAG
241 GCGGTTTTTT TTTTTTTGGG GGGGGGGTGG TGTAGTGTTC GTCGAGATTT AGACTTTTTG
301 TGTGGATGGA TGGATGGGTT AGATTATGCG CGCGTGGATT AGATTGCGGC GGTAGAGGGT
361 TTGTACTGTT CATTGATTGG TTTGTTGGGT TGATTTGGAG CTGTAGCTGA TGCGTGGTAG
421 AGGGGTGGAG GTGGAAGCGC GTTGGGGAGG GTGGATGGCG ATGCCGCTGG TGTCAGATTC
481 GCCGCTGCAT GCGGTGATGG GTACTCACAT TGCGCCCCCT CTCTACCGGG GGAGGTGGCA
541 GCGGAGTGGT TCCTGCGGCT TTACGTCGTT TTCGTGGGAT TTACGTCCGC GGGCGTTGGT
6〇1 AGCAGCAGCC TATCCTCTTT TGGGACGGGA AAATAATATG GCGTTAGGCT GTTTGAGGCC
661 TCCTGTTCGT GCGTTGGGTG TTGCATTGGT GCTGATTTGG TGGGATCACG GCTGCCGAAG
721 GCGGGTTTGT TTGCTGTTAG TTGATGGTAA GGATTGGCTG ATACGTCGAT TATATCTTCT
781 AGAGGAGCTG CGTCTACTTG CATGTCAAGG TTACCACGTT TAGGGGTTAT ATGATTGATG
841 M"AGTTTCTT TGTTTAGTGG TCCAAAATTA GAAAGACTCA TTTCTTTTTA GTTTTCTCGT
901 TTCCCTTAGA CAGTCTGTAG AGAGTTGACT TTCTGCGGCT CGTGCCAGCT TCGATAGCTC
961 TAGTTAACAT TGCGCCTTGT GGTATCACAA CTGTGCTTTG TAGTTCACAT TTAGTCCTAT
1021 ACAATATGGT ACATGTTGAT GAGCCTTTAA TTCTTAGATT ATTGACCGAA TCATCTTTTT
1081 TTTCCGAGGT TAAGACTTAT TCTGTTGCAA TGTGCTATAA TTATAATTTG ACTTCTACTC
1141 CAGTAAGACA GTGTGCTACT CACATTAATT TGATTCAGCA TGTCGAGAAT TTAATTTCCT
1201 TTGGAACGTC ATTCATTGAG TTTTTCCTTG CACGCTAAGT TACTCAGTAC CGTCTCATAG
12 61 TTGTTCTGAA GAAGAGAAAG AATGATGCCT TCAAAATATG TATTCTTCTA CTGGATCTAA
1321 TGAACTTTAA ACCTTTCCAT TCTGGACTGT AAATATGAAT GAACGTCTAA ATTTCCTTCG
1381 TTGTTTGCTT CTTGTCCGAC TGGATTTTGT AACTATTTCT GACTTTATCA AATTGATAAT
14 41 AATAGTTTCC AGTGTTCTCT TGTTTAGGAG TACCTATTGA TCCTGCTAAA TGCCGATTGA
1501 TGAGTGTGGA TGAAAAGCGG GAACTTGTCC GTGAATTATC GAAGCGGCCA GAAAGTGCTC
1561 CTGACAAACT GCAGTCTTGG AGTCGCCGTG AAATTGTAGA GATTCTTTGT GCTGATTTAG 1621 GAAGGGAAAG GAAGTACACT GGATTATCGA AGCAGAGAAT GTTGGAATAT CTCTTCAGAG
1681 TTGTGACTGG CAAATCATCT GGTGGTGGCG TTGTGGAGCA TGTGCAAGAG AAGGAGCCTA
1741 CCCCTGAACC CAACACAGCC AACCATCAGT CCCCTGCGAA ACGGCAGCGA AAGAGTGACA
1801 ACCCATCACG ACTACCAATT GTTGCAAGCA GTCCAACTAC AGAAATACCC AGGCCAGCAA
18 61 GTAATGCTCG CTTCTGCCAC AATTTAGCTT GCAGAGCGAC TCTTAATCCA GAAGATAAAT
1921 TTTGCAGACG CTGTTCATGC TGTATTTGTT TCAAGTACGA TGACAATAAG GATCCTAGCC
1981 TCTGGTTATT CTGTAGTTCA GATCAACCCT TGCAGAAAGA TTCTTGTGTA TTTTCGTGCC
2 041 ATCTTGAATG TGCTCTTAAG GATGGAAGAA CTGGCATCAT GCAGAGTGGG CAGTGCAAGA
2101 AACTTGATGG TGGTTATTAC TGCACTCGCT GTCGGAAACA GAATGATCTG CTTGGGTATT
2161 CTCCCTAAAC AACTTTATTA TTTGCACAGT TTTTTTTCCT GTTCTGTAAC TATACGAAAT
2221 TATGTTTTAA TTATTCCTAT GCCTCCAGTT TTTACTGCCT TAAGTAATGT TACCATTATT
2281 TATTGCAACG ATAACTACTA GAAATATGTT AGTTTGACTT TTGTGAGAGT TAGCTTTGAT
2341 AATTTGCATG CATTCTTGCT TTCCAGCCAC TTTGATTACC TTACTGATTC TGTTTTTAGG
2401 ATTCTTCGGT GAAGATCCTT GTAGTGTCAT CATCATTGGT CCAATCATAT GATGCATATT
24 61 TCTCAATTGT GTCTTAAGAA GTGGGTTGGC TGCTTTTGCC CTTCAGCTTC ATGCTTTGAG
2521 CTTGTGGTCT GTGTGCTTAC TTCTGCATTA AGCTGAATTA GTGTTGGATT CTTCCTTCTC
2581 CATCTGGAGT AAATTTGTTT GCTGGGATAA CCCTATTTTC ATAGGTTGCG AGCTGCGAAA
2 641 ACAGGCTTTC GACTGCATTT TGGTGTCTTT GTGTTGCATT CCATAGGGTT CTTGTAGTTC
2701 AAGTTTCAGG GTATGAACCA AGTTACTAAG CCAGTAAAAC TTGGTGAGGC ACTGAGGCCA
27 61 GGTGGATTCA ATATTTTCAA GGATGAATAG ATCATGGAGA AATGCTTAGA CTAGTATATG
2821 CAAGGAGTCT CTAATTTGTC TGTGCATGTT TATAAGCCAT TTGAGTAACC TGGGAAATAG
2881 GATTCATTTT GAAGTTTTGA ACTACAAGAC AAGTGATTAA TTGTCTTTCT CAAAAGAATC
2941 TGCTTGGCTA TTAGTATCTT GTAGTAGTAA GTTTTGAACC AGTTATATGT TATTTAGAGT
3001 TCAAGATTCT TTGGCCAGTC CAGCACAATG CACTTAAGTA ATTCAATCAA GTTTACTGGC
3061 CCATTTTCCA AAACTATGCT CCTTTCAAGA GTTTGGATAT TGAAACAGTA AATTAGCTTG
3121 CCGAGCAATA CTTGACTGTT TAATGCCTTG TTCAGGTCCT GGAAGAAACA ACTGGTGATA
3181 GCTAAAGATG CTCGCCGGTT GGATGTATTG TGTCATCGGA TTTTTTTGAG TCATAAGATT
3241 CTTGTCTCCA CGGAGAAGTA CTTGGTTTTG CATGAAATTG TTGACACAGC GATGAAGAAA
3301 CTGGAGGCTG AGGTTGGTCC TATATCTGGA GTTGCAAATA TGGGTCGTGG AATTGTGAGC
3361 CGGCTTGCTG TTGGTGCTGA AGTTCAGAAA CTTTGTGCTC GAGCAATAGA AACCATGGAG
3421 TCTCTGTTTT GTGGATCTCC TTCTAACTTG
34 81 CGTTAGACCA CATACATACA AATAGTGTTG
3541 CACGGATGAT ACCATCAAAC TTCGTAAAGT
3601 TAGTTTTGGA TTTGGGTCCT ATACTTGCTC
3661 GAGTGGCAGC CACAGGCTCG TTCTCATCAA
3721 AAACGTTAGT GGTCACTCAA CTTGTGCCAG
37 81 TCAGTAACTA CAAGGAGTTT GGATCGTGGG
38 41 AAGTTGATCT GAAGGGTTTG ATGCCAGGTG 3901 CAAAGGCAAA CAGTGGTGGT CAGTCTGATC 3961 ACACTGCGGT GTATGCTGAT CTCAATAAAT 4 021 ATCCTGAGAT ACTTGATTCA GACAAAGCAA 4 081 CACAGAGTAT GCCGATGGTC GTAGCTAGGG 4141 CTGGACTCTC AGCATCAGCT TTGGACGAGG 4201 TTAGAGAATC CTCAAATTCA ATGGAGCAGA 4261 ATGCATCAAA TGCTCCTGCT GGAAATGAGG 4321 CTATTCCACC AACTGCACCT AGATATATGG 4 381 TGAAAGCAAA ACCTGGTGAT AACATCCTTC 4441 CAGGGAATTC TTCAAATAAA AGAACATCAG 4 5 01 GATGCCCAGA AGCATCTTAT GAGTACTGTG 4 561 GTTACATTGA GACCAACTTC AGAGTGAAGT 4 621 CTCATGACAG GAAGATAGTC AGCGTCTACG 4 681 TTTCTGGCCA GCTTGCTGAC ACTTTCTCTG 4741 TTCGCTCCGG TTTCTGCATG GAACTTTGGC
CAATTTCAAC GTAAGTTTCC ACGTGCTTCA AATTCTCATG CATATGTGCA TTTTCAGGTT TTGAAGCTAT AACCCAAACA TCTGTCACTG AAGATGTAAC ATGCTTTAAT GTATGGCACA GTCCAACTGG CATCATACTT GCACCATTAA CTACAAGCTA TATATTCAAG GTAGTTGCCT AAGCCAAAAT GAAGACAAGC TGTCAGAAGG GGTCTGGGCT AGACCAAAAC AATGGGAGCC CTTCTTCAGA AGGTGTGGAC TCAAATAATA CACCAGAAAG TGATTTTGAA TATTGTGAAA GTCATCACCC CAATGAACCT ACAAACAACT TTACGGAGGT ATCTGGATTG GAGGAAGCTC AGCCCAATTC AGCAGTTCAA ACACAATTAC ACCAGAGAAG CGAAGTTCCT GGATCACAGG TGGTGATTGT TCCACCTCGA TATTCTGGCT AAAATGGTAA GGATATCAGT GGGAGGAGCT AAAATGGCTC TTCCAAGCCT GAAAGGGAAC GTAAATGTGA GGAAATCGGC CACAAGGATG TTAAGGTGGT CAGGTGGCTG GAATGTGAGG TTCTGACTTG GTATAGCCTT CGTGCTACCC TAAACACTCT TATTGATGAT CCTGTTAGCC AGGCCATCTA CAGCAAAAGG CCACCTTCTG ATTAA
SEQIDNO: 2
1 Met Asp Pro Pro Tyr Ala Gly Val Pro工le Asp Pro Ala Lys Cys 16 Arg Leu Met Ser Val Asp Glu Lys Arg Glu Leu Val Arg Glu Leu 31 Ser Lys Arg Pro Glu Ser Ala Pro Asp Lys Leu Gin Ser Trp Ser 46 Arg Arg Glu工le Val Glu lie Leu Cys Ala Asp Leu Gly Arg Glu
61 Arg Lys Tyr Thr Gly Leu Ser Lys Gin Arg Met Leu Glu Tyr Leu
76 Phe Arg Val Val Thr Gly Lys Ser Ser Gly Gly Gly Val Val Glu
91 His Val Gin Glu Lys Glu Pro Thr Pro Glu Pro Asn Thr Ala Asn
106 His Gin Ser Pro Ala Lys Arg Gin Arg Lys Ser Asp Asn Pro Ser
121 Arg Leu Pro lie Val Ala Ser Ser Pro Thr Thr Glu工le Pro Arg
136 Pro Ala Ser Asn Ma Arg Phe Cys His Asn Leu Ala Cys Arg Ala
151 Thr Leu Asn Pro Glu Asp Lys Phe Cys Arg Arg Cys Ser Cys Cys
166 lie Cys Phe Lys Tyr Asp Asp Asn Lys Asp Pro Ser Leu Trp Leu
181 Phe Cys Ser Ser Asp Gin Pro Leu Gin Lys Asp Ser Cys Val Phe
196 Ser Cys His Leu Glu Cys Ala Leu Lys Asp Gly Arg Thr Gly工le
211 Met Gin Ser Gly Gin Cys Lys Lys Leu Asp Gly Gly Tyr Tyr Cys
226 Thr Arg Cys Arg Lys Gin Asn Asp Leu Leu Gly Ser Trp Lys Lys
241 Gin Leu Val lie Ala Lys Asp Ala Arg Arg Leu Asp Val Leu Cys
256 His Arg lie Phe Leu Ser His Lys lie Leu Val Ser Thr Glu Lys
271 Tyr Leu Val Leu His Glu lie Val Asp Thr Ala Met Lys Lys Leu
286 Glu Ala Glu Val Gly Pro lie Ser Gly Val Ala Asn Met Gly Arg
301 Gly lie Val Ser Arg Leu Ala Val Gly Ala Glu Val Gin Lys Leu
316 Cys Ala Arg Ala lie Glu Thr Met Glu Ser Leu Phe Cys Gly Ser
331 Pro Ser Asn Leu Gin Phe Gin Arg Ser Arg Met lie Pro Ser Asn
346 Phe Val Lys Phe Glu Ala lie Thr Gin Thr Ser Val Thr Val Val
361 Leu Asp Leu Gly Pro lie Leu Ala Gin Asp Val Thr Cys Phe Asn
376 Val Trp His Arg Val Ala Ala Thr Gly Ser Phe Ser Ser Ser Pro
391 Thr Gly lie lie Leu Ala Pro Leu Lys Thr Leu Val Val Thr Gin
406 Leu Val Pro Ala Thr Ser Tyr lie Phe Lys Val Val Ala Phe Ser
421 Asn Tyr Lys Glu Phe Gly Ser Trp Glu Ala Lys Met Lys Thr Ser
436 Cys Gin Lys Glu Val Asp Leu Lys Gly Leu Met Pro Gly Gly Ser
451 Gly Leu Asp G丄n Asn Asn Gly Ser Pro Lys Ala Asn Ser Gly Gly
466 Gin Ser Asp Pro Ser Ser Glu Gly Val Asp Ser Asn Asn Asn Thr
481 Ala Val Tyr Ala Asp Leu Asn Lys Ser Pro Glu Ser Asp Phe Glu
496 Tyr Cys Glu Asn Pro Glu工le Leu Asp Ser Asp Lys Ala Ser His
511 His Pro Asn Glu Pro Thr Asn Asn Ser Gin Ser Met Pro Met Val
526 Val Ala Arg Val Thr Glu Val Ser Gly Leu Glu Glu Ala Pro Gly
541 Leu Ser Ala Ser Ala Leu Asp Glu Glu Pro Asn Ser Ala Val Gin
556 Thr Gin Leu Leu Arg Glu Ser Ser Asn Ser Met Glu Gin Asn Gin
571 Arg Ser Glu Val Pro Gly Ser Gin Asp Ala Ser Asn Ala Pro Ala
586 Gly Asn Glu Val Val工le Val Pro Pro Arg Tyr Ser Gly Ser lie
601 Pro Pro Thr Ala Pro Arg Tyr Met Glu Asn Gly Lys Asp工le Ser
616 Gly Arg Ser Leu Lys Ala Lys Pro Gly Asp Asn工le Leu Gin Asn
631 Gly Ser Ser Lys Pro Glu Arg Glu Pro Gly Asn Ser Ser Asn Lys
646 Arg Thr Ser Gly Lys Cys Glu Glu工le Gly.His Lys Asp Gly Cys
661 Pro Glu Ala Ser Tyr Glu Tyr Cys Val Lys Val Val Arg Trp Leu
676 Glu Cys Glu Gly Tyr lie Glu Thr Asn Phe Arg Val Lys Phe Leu
691 Thr Trp Tyr Ser Leu Arg Ala Thr Pro His Asp Arg Lys lie Val
706 Ser Val Tyr Val Asn Thr Leu工le Asp Asp Pro Val Ser Leu Ser
721 Gly Gin Leu Ala Asp Thr Phe Ser Glu Ala工le Tyr Ser Lys Arg
736 Pro Pro Ser Val Arg Ser Gly Phe Cys Met Glu Leu Trp His
权利要求
1、一种水稻叶形态建成调控基因RLAL1编码的蛋白质，其特征在于该蛋白质具有Seq IDNo2所示的氨基酸序列。
2、 根据权利要求1所述的水稻叶形态建成调控基因i Z^丄/编码的蛋白质，其特征在于 所述氨基酸序列还包括在Seq ID No: 2所示的氨基酸序列中添加、取代、插入或缺失一个或 多个氨基酸或其他物种的同源序列而生成的氨基酸序列或衍生物。
3、 一种编码权利要求1或2所述蛋白质的基因，其特征在于该基因具有SeqIDNo: l所示的核苷酸序列。
4、 根据权利要求3所述的基因，其特征在于所述核苷酸序列还包括在Seq ID No: 1 所示的核苷酸序列中添加、取代，插入或缺失一个或多个核苷酸而生成的突变体、等位基因 或衍生物。
5、 一种含有权利要求3或4所述基因的质粒。
6、 一种含有权利要求3或4所述基因的植物表达载体。
7、 一种宿主细胞，其特征在于该宿主细胞含有权利要求3或4所述的基因序列。
8、 根据权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于该细胞为大肠杆菌细胞、农杆菌细胞 或植物细胞。
9、 一种改良水稻叶片巻曲及叶倾角大小的方法，其特征在于包括用具有SeqIDNo: 1 所示的核苷酸序列的基因转化水稻细胞，再将转化后的水稻细胞培育成植株。
全文摘要
本发明公开了一种水稻叶形态建成调控基因RLAL1编码的蛋白质，其具有Seq ID No2所示的氨基酸序列。本发明还公开了编码上述蛋白质的基因，其具有Seq ID No1所示的核苷酸序列。本发明还公开了含有上述基因的质粒和含有上述基因的植物表达载体。本发明又公开了一种改良水稻叶片卷曲及叶倾角大小的方法包括用具有Seq ID No1所示的核苷酸序列的基因转化水稻细胞，再将转化后的水稻细胞培育成植株。采用本发明的方法能提高水稻产量。
文档编号C12N15/29GK101177683SQ20071015669
公开日2008年5月14日 申请日期2007年11月20日 优先权日2007年11月20日
发明者张光恒, 徐淑平, 曾大力, 江 胡, 董国军, 薛红卫, 赵淑青, 郭龙彪, 前 钱 申请人:中国水稻研究所