专利名称：带鱼多肽的制备方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体是指一种以带鱼为原料，通过酶水解带鱼蛋白质， 制备多肽的方法。
背景技术：
带鱼又名刀鱼，是我国沿海产量较高的一种经济鱼类，它不仅肉嫩体肥、味道鲜 美，并具有较高的药用、食疗价值。带鱼蛋白质是一种全价蛋白质，含有人体必需的八 种氨基酸；还含有钙、铁、磷、镁、锌、硒等微量元素以及多种维生素，营养丰富，深 受国内外消费者的青睐。
目前，带鱼的食用方法单一，主要是直接食用。由于带鱼蛋白质是大分子物质， 不能被人体直接吸收和利用，而低分子肽等活性物质没有完全游离出来，降低了带鱼的 保健功效。低分子肽通常只由2 — 10个氨基酸残基组成，较氨基酸更易为人体所吸收， 且具有某些特殊的生理活性如抗菌、抗氧化、抗肿瘤等。并且，随着捕捞强度的增大，
海洋捕捞的小带鱼产量呈逐年上升趋势；小带鱼由于体型小，直接食用的价值较低；现 在主要用来生产鱼粉等低值产品，更有作为废弃物直接丢弃，导致资源未得到充分利用， 经济效益低下，甚至污染环境。
经检索，国内已有人采用酶法水解鱼蛋白质制备多肽，如中国专利申请号为 00130823.8、发明名称为"一种海产小杂鱼提取物的制备方法"，它公开了以海产小杂 鱼为原料提取多肽混合物制品的方法。该方法使用一种酶(木瓜蛋白酶)进行海产小杂 鱼蛋白质的水解，其美中不足是，由于仅采用一种酶水解蛋白质，并且在水解过程中， 也没有采取措施保持酶解液的pH在该种酶的最适pH，而氨基酸中羧基的解离度远远 大于氨基的解离度，会引起酶解液的pH降低，从而影响酶的活性，导致蛋白质水解不 彻底，得到的多肽产品的分子量较大，即90%以上多肽的分子量在2000 Da ~8000 Da 之间，其多肽的营养保健效果不理想。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，提供一种能提高蛋白质的水解效率，所得低分子肽 含量高的带鱼多肽的制备方法。
本发明的方法包括以下步骤 (1)将带鱼洗净称重，加入1 3倍带鱼质量的水，绞碎成均匀的鱼肉浆；
(2) 将鱼肉浆放入酶解罐中，升温至45 65'C，调pH至5.5 8.5，以带鱼质量 计，添加1.0% 3.0%的内切蛋白酶，同时添加鱼肉浆质量0.02% 0.1%的天然抑菌剂 即乳酸链球菌素(Nisin)，搅拌水解16 24h;然后加入1.0% 5.0%的外切蛋白酶，调 节温度至45-60'C，调pH至5.0 8.0，继续搅拌水解3 6h;
(3) 搅拌水解结束后，升温至90 95。C，保持15 20分钟灭酶；
(4) 将上述反应完毕的水解液离心，4000rpm， 15 20分钟，取上清液；
(5) 将上清液减压浓縮至原体积的1/10 1/5,温度50'C，压力0.1Mpa真空干燥 24 48h，得到带鱼多肽产品。
在步骤(2)的酶解过程中，首先，根据添加的每种内切蛋白酶的最适温度和最适 pH，通过温度探头、pH探头和相关的控制仪器，用控制加热装置的开关和适当滴加酸 或碱的方法，自动控制温度和pH保持在每种内切蛋白酶的最适值；然后，根据添加的 每种外切蛋白酶的最适温度和最适pH，通过温度探头、pH探头和相关的控制仪器，用 控制加热装置的开关和适当滴加酸或碱的方法，自动控制温度和pH保持在每种外切蛋 白酶的最适值。
所述内切蛋白酶为木瓜蛋白酶、Neutrase或Alcalase;外切蛋白酶为Flavourzyme、
氨肽酶或羧肽酶。
在步骤(4)和步骤(5)之间可加入脱色步骤在上清液中加入1% 3%的活性碳 粉末，搅拌l 2h，过滤或抽滤。
本发明带鱼多肽的制备方法与现有技术相比，具有以下显著优点和有益效果
由于本发明先使用内切蛋白酶水解，再使用外切蛋白酶水解，并在水解过程中添 加乳酸链球菌素抑制水解液的变质，以及采用搅拌的方法有助于蛋白酶与底物的充分接 触和产物的扩散。内切蛋白酶先将蛋白质水解为分子量较大的多肽，然后再使用外切蛋 白酶进一步水解，由于内切蛋白酶和外切蛋白酶的作用位点不同，导致蛋白质水解更彻底，所得带鱼多肽的分子量范围保持在250Da 6000Da之间；其中分子量小于1000Da 的多肽含量高于50%，即低分子肽含量高，带鱼多肽营养保健效果比较理想。
又由于本发明在整个水解过程中，根据添加的每种内切蛋白酶和外切蛋白酶的最 适温度和最适pH，通过温度探头、pH探头和相关的控制仪器，用控制加热装置的开关 和适当滴加酸或碱的方法，自动控制温度、pH保持在最适值，最大限度发挥了蛋白酶 的活性，提高了蛋白质的水解效率，使蛋白质水解更加彻底，进一步保证了使带鱼多肽
的分子量范围保持在250Da 6000Da之间、分子量小于1000Da的多肽含量高于50% 的突出的技术效果。
本发明带鱼多肽的制备方法工艺简便，生产周期短。其带鱼多肽产品可广泛用于保 健食品、营养补充剂及化妆品等的功能配料，为带鱼深加工生产高附加值产品提供了一 条新的途径。
具体实施例方式
下面给出3个优选实施例，但本发明不仅局限于以下实施例。
实施例1
将带鱼洗净，称取1.0kg带鱼，加入2.0kg水，绞碎成均匀的鱼肉浆；将鱼肉浆放 入酶解罐中，升温至55°C，调pH至8.0，以带鱼质量计，添加1.0%的Alcalase和0.05% Nisin， 100rpm搅拌水解22h，然后加入1.5%氨肽酶，调节温度至60'C，保持pH在 8.0，继续水解3h，然后升温至95t:，保持15分钟灭酶。将水解液离心，4000rpm， 15 分钟，取上清液。在上清液中加入1%的活性碳粉末，搅拌lh，抽滤。将滤液减压浓縮 至原体积的1/10，温度50℃,压力O.lMpa真空干燥28h，得到带鱼多肽产品。采用 SphadexG-75凝胶过滤层析，测定带鱼多肽产品的相对分子质量带鱼多肽的分子量范 围为250Da 6000Da;其中分子量小于1000Da的低分子肽含量高于50%。
实施例2:
将带鱼洗净，称取0.5kg带鱼，加入1.5kg水，绞碎成均匀的鱼肉桨；将鱼肉浆放 入酶解罐中，升温至5CTC，调pH至7.0,以带鱼质量计，添加3.0%的Neutrase和0.04% Nisin， 100rpm搅拌水解18h，然后加入1.0%羧肽酶，调节温度至55'C，调pH至6.0, 继续水解5h，然后升温至90℃，保持18分钟灭酶。将水解液离心，4000ipm， 15分钟， 取上清液。在上清液中加入3%的活性碳粉末，搅拌1.5h，抽滤。将滤液减压浓縮至原 体积的1/9，温度50°C,压力O.lMpa真空干燥40h，得到带鱼多肽产品。采用SphadexG-75 凝胶过滤层析，测定带鱼多肽产品的相对分子质量带鱼多肽的分子量范围为 250Da 6000Da;其中分子量小于lOOODa的低分子肽含量高于50%。
实施例3:
将带鱼洗净，称取lkg带鱼，加入2.5kg水，绞碎成均匀的鱼肉浆；将鱼肉浆放入 酶解罐中，升温至60℃，调pH至6.0，以带鱼质量计，添加1.5%的木瓜蛋白酶和0.02% Nisin， 100rpm搅拌水解24h，然后加入5.0% Flavourzyme，调节温度至50℃，调pH至7.0，继续水解6h，然后升温至95'C，保持20分钟灭酶。将水解液离心，4000rpm， 15分钟，取上清液。在上清液中加入2%的活性碳粉末，搅拌2h，抽滤。将滤液减压浓 縮至原体积的1/8,温度50'C，压力0.1Mpa真空干燥48h，得到带鱼多肽产品。采用 SphadexG-75凝胶过滤层析，测定带鱼多肽产品的相对分子质量带鱼多肽的分子量范 围为250Da 6000Da;其中分子量小于1000Da的低分子肽含量高于50%。
权利要求
1、一种带鱼多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤(1)将带鱼洗净称重，加入1～3倍带鱼质量的水，绞碎成均匀的鱼肉浆；(2)将鱼肉浆放入酶解罐中，升温至45～65℃，调pH至5.5～8.5，以带鱼质量计，添加1.0％～3.0％的内切蛋白酶，同时添加鱼肉浆质量0.02％～0.1％的乳酸链球菌素，搅拌水解16～24h；然后加入1.0％～5.0％的外切蛋白酶，调节温度至45-60℃，调pH至5.0～8.0，继续搅拌水解3～6h；(3)搅拌水解结束后，升温至90～95℃，保持15～20分钟灭酶；(4)将上述反应完毕的水解液离心，4000rpm，15～20分钟，取上清液；(5)将上清液减压浓缩至原体积的1/10～1/5，温度50℃，压力0.1Mpa真空干燥24～48h，得到带鱼多肽产品。
2、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤(2)的酶解过程中，首先， 根据添加的每种内切蛋白酶的最适温度和最适pH,通过温度探头、pH探头和相关的控 制仪器，用控制加热装置的开关和适当滴加酸或碱的方法，自动控制温度和pH保持在 每种内切蛋白酶的最适值；然后，根据添加的每种外切蛋白酶的最适温度和最适pH， 通过温度探头、pH探头和相关的控制仪器，用控制加热装置的开关和适当滴加酸或碱 的方法，自动控制温度和pH保持在每种外切蛋白酶的最适值。
3、 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述内切蛋白酶为木瓜蛋白酶、 Neutrase或Alcalase;夕卜切蛋白酶为Flavourzyme、氨月太酶或羧月太酶。
4、 根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤(4)和步骤(5)之间可加 入脱色步骤在上清液中加入1% 3%的活性碳粉末，搅拌l 2h,过滤或抽滤。
全文摘要
本发明涉及一种带鱼多肽的制备方法，包括如下步骤(1)将带鱼加入1～3倍带鱼质量的水绞碎成均匀的鱼肉浆；(2)将鱼肉浆放入酶解罐中，升温至45～65℃，调pH至5.5～8.5，以带鱼质量计，添加1.0％～3.0％的内切蛋白酶，同时添加鱼肉浆质量0.02％～0.1％的乳酸链球菌素，搅拌水解16～24h；然后加入1.0％～5.0％的外切蛋白酶，调温至45-60℃，调pH至5.0～8.0，继续搅拌水解3～6h；(3)灭酶；(4)离心，取上清液；(5)将上清液减压浓缩真空干燥得带鱼多肽产品。该方法制得的带鱼多肽的分子量范围保持在250Da～6000Da之间；分子量小于1000Da的多肽含量高于50％。
文档编号C12P21/02GK101200751SQ20071016454
公开日2008年6月18日 申请日期2007年12月5日 优先权日2007年12月5日
发明者吴天星, 武玉学, 挺 靳 申请人:浙江大学宁波理工学院