调控温光敏核不育的蛋白编码序列的制作方法

专利名称：：调控温光敏核不育的蛋白编码序列的制作方法
技术领域：
：本发明涉及的是一种基因工程
技术领域：
的蛋白编码序列，特别是一种调控温光敏核不育的蛋白编码序列。
背景技术：
：水稻是人类最主要的粮食作物之一，世界上约有一半的人口以稻米为主要粮食。中国稻作面积约占全世界的23%，稻谷产量占全世界的37%左右。中国的水稻播种面积占全国粮食作物播种面积的30%，而总产量却占粮食作物产量的42%以上，单位面积产量比整个粮食作物平均高出45.17%,其中一个重要的原因就是水稻雄性不育与杂种优势的广泛应用发挥了举足轻重的作用。水稻杂种优势现象由Jones(1926)提出。20世纪50年代以来，国内外相继开展籼粳稻杂交育种研究，印度、日本、美国、国际水稻研究所(IRRI)等的一些科学家开展了水稻杂种优势利用研究，但未能应用于生产。杨守仁等(1959，1962)的研究结果表明，籼粳稻杂交后代结实率可通过选择提高到正常水平。1970年，李必湖在海南岛崖县找到野生稻(O.rufipogon)雄性不育株(简称野败)，为培育杂交水稻打开了突破口。随后开展了以袁隆平为攻关主将的全国协作研究，于1973年实现三系配套，并相继选配出强优势籼型杂交水稻组合及攻克制种技术关，1976年杂交水稻开始大面积推广。杂交水稻的育成是水稻育种史上的一次重大突破，它打破了水稻等自花授粉作物没有杂种优势的传统观念，大大丰富了作物遗传育种的理论和实践，特别是这一重大成果的应用，给我国的水稻生产带来了一次飞跃，使水稻单产在矮秆良种的基础上提高20%左右，取得了巨大的社会、经济效益。而水稻雄性不育系资源的发掘及应用是有效利用杂种优势的前提和基础。目前在生产中广泛应用的水稻雄性不育系包括受核基因控制的温光敏核不育株系，以及受核质基因共同控制的一系列细胞质雄性不育株系(cytoplasmic腿lesterility,简称CMS)。世界人口增长与土地资源的有限性破使科学家们寻找新的提高水稻产量、质量的方法，两系法杂交水稻就是一种有效的方法。二系法利用水稻杂种优势是我国首创，大面积应用于上世纪九十年代，利用了光温敏不育系水稻为基本材料培育。这种水稻在夏季，长日照、高温下，表现为雄性不育，可以用来生产杂交种子；在秋季、短日照、低温下又变成了正常的水稻，可以繁殖自身种子。这种杂交水稻因为只有不育系(母本)、和恢复系(父本)、而不需要保持系(中间体)，所以称两系法杂交水稻。因为二系稻比三系稻的具有质量更好，品质更优，产量更高的特点。然而光温敏不育系的育性变化受光温条件特别是温度条件的影响，不育系不育光温临界值低，制种安全而繁种较困难，因而不育系的安全制种与良种繁种是一对矛盾。因此，水稻光温敏核不育新种质，特别是高温可育，低温不育的新型突变体的选育是实现二系法的关键，相应调控蛋白序列的克隆具有广阔的应用前景。而目前至今尚未发现与本发明主题有密切联系文献的报道。
发明内容本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种调控温光敏核不育的蛋白编码序列，并可以利用该蛋白产生新的水稻雄性不育系，用来生产杂交种子，开展轮回选择和创造基因库，在农业生产上具有十分重要的应用。本发明是通过以下技术方案实现的:本发明所提供的一种分离出的DNA分子，该分子包括编码具有水稻0sMS4蛋白质活性的多肽的核苷酸序列。所述的序列具有SEQIDNO.2所示的氨基酸序列的多肽。所述的序列具有SEQIDNO.l中从核苷酸第l-798位的核苷酸序列。本发明所分离出的调控水稻温光敏核不育的蛋白质活性的多肽，它包括具有SEQIDNO.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQIDNO.2序列的多肽。在本发明还提供了一种用上述载体转化的宿主细胞，它是真核细胞。在实例中该宿主细胞是水稻。在本发明中，"分离的"、"纯化的"DNA是指，该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来，还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组分分开，而且已经与在细胞中伴随其的蛋白质分开。在本发明中，术语"调控水稻温光敏核不育的蛋白(或多肽)编码序列"指编码具有调控水稻温光敏核不育蛋白活性的多肽的核苷酸序列，如SEQIDNO.1中第1-798位核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指，位于SEQIDNO.1序列的编码框第1-798位核苷酸中，有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性，所以与SEQIDNO.1中第1-798位核苷酸序列同源性低至约70%的简并序列也能编码出SEQIDNO.1所述的序列。该术语还包括能在中度严紧条件下，更佳的在高度严紧条件下与SEQIDNO.1中从核苷酸第1-798位的核苷酸序列杂交的核苷酸序列。该术语还包括与SEQIDNO.1中从核苷酸第1-798位的核苷酸序列的同源性至少70%,较佳地至少80%，更佳地至少90%，最佳地至少95%的核苷酸序列。该术语还包括能编码具有与天然的调控水稻温光敏核不育的相同功能的蛋白的SEQIDNO.2中开放阅读框序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为1-90个，较佳地1-60个，更佳地1-20个，最佳地I-IO个)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5'和/或3'端添加数个(通常为60个以内，较佳地为30个以内，更佳地为10个以内，最佳地为5个以内)核苷酸。在本发明中，术语"调控水稻温光敏核不育蛋白或多肽"指具有调控水稻温光敏核不育蛋白活性的SEQIDNO.2序列的多肽。该术语还包括具有与天然调控水稻温光敏核不育蛋白相关相同功能的、SEQIDN0.4序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于)若干个(通常为l-50个，较佳地l-30个，更佳地1-20个，最佳地1-10个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括调控水稻温光敏核不育蛋白的活性片段和活性衍生物。本发明的调控水稻温光敏核不育蛋白的变异形式包括同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严紧条件下能与水稻温光敏不育发育相关DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用水稻温光敏不育相关多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。在本发明中，"调控水稻温光敏核不育蛋白保守性变异多肽"指与SEQIDNO.2的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。发明还包括调控水稻温光敏核不育蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然调控水稻温光敏核不育相关多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如e、Y-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。修饰(通常不改变一级结构)形式包括:体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的多肽。在本发明中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体，包括质粒，粘粒等。在生产本发明的水稻温光敏不育相关多肽时，可以将调控水稻温光敏核不育蛋白编码序列可操作地连于表达调控序列，从而形成调控水稻温光敏核不育相关蛋白表达载体。如本发明所用，"可操作地连于"指这样一种状况，即线性DNA序列的某些部分能够影响同一线性DNA序列其他部分的活性。例如，如果信号肽DNA作为前体表达并参与多肽的分泌，那么信号肽(分泌前导序列)DNA就是可操作地连于多肽DNA;如果启动子调控序列的转录，那么它是可操作地连于编码序列；如果核糖体结合位点被置于能使其翻译的位置时，那么它是可操作地连于编码序列。一般，"可操作地连于"意味着相邻，而对于分泌前导序列则意味着在阅读框中相邻。在本发明中，术语"宿主细胞"为真核细胞。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、水稻细胞和其它植物细胞。还可用Northern印迹法技术分析调控水稻温光敏核不育基因产物的表达，即分析调控水稻温光敏核不育的RNA转录物在细胞中的存在与否和数量。此外，本发明所述的的DNA分子是一种核酸分子，它包含所述的DNA分子中8-100个连续核苷酸。该分子可用作探针，通常具有调控水稻温光敏核不育基因的核苷酸编码序列的8-100个连续核苷酸，较佳地具有15-50个连续核苷酸。该探针可用于检测样品中是否存在编码调控水稻温光敏核不育相关的核酸分子。此外，根据本发明的调控水稻温光敏核不育基因的核苷酸序列和氨基酸序列，可以在核酸同源性或表达蛋白质的同源性基础上，筛选调控水稻温光敏核不育相关同源基因或同源蛋白。本发明的调控水稻温光敏核不育相关核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员己知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。除了用重组法产生之外，本发明蛋白的片段还可用固相技术，通过直接合成肽而加以生产。在体外合成蛋白质可以用手工或自动进行。可以分别化学合成本发明蛋白的各片段，然后用化学方法加以连接以产生全长的分子。本发明是利用Y射线对粳稻9522品系进行处理，种植后在F2代挑选花药发育异常的突变体，挑选分离比为3:1的隐性单基因突变体为研究对象。获得一新的水稻隐性雄性不育突变体osms4。通过遗传定位方法，首先将突变基因座位定位在水稻第l染色体InDel标记0S104和0S106之间。进一步精细定位，在0S104和0S106之间发展了8对有多态性InDel分子标记，将该基因座位定位在ZH134和ZH138之间，物理距离为23kb。对在这一范围内TIGR(http:〃www.tigr.org)，预测分析有2个基因，核酸测序结果表明，其中一个MYB基因的第一个外显子在突变体中发生了一个核苷酸的缺失和一个G到A的颠换，该MYB基因的突变造成了植株的雄性不育。已知的文献报道表明，MYB家族在植物中是一个很大的转录因子家族，它们在植物生长的许多方面，如参与对植物激素的应答，控制植物细胞的形态和模式建成，参与调节植物苯丙垸类次生代谢途径等等。除此之外，MYB基因家族成员也参与了植物雄性发育的过程，例如AtMYB32，AtMYB103，AtMYB26，OsGAMYB，HvGAMYB等，这些基因的突变都将导致雄性不育，本研究发现的MYB基因是新发现的在水稻中参与植物雄性发育过程的基因。将这个基因命名为0sMS4(0ryzasativaLMaleSterile4)基因。通过对花药不育突变体osms4花器官发育各时期进行组织切片、扫描电镜、染色体观察，发现该基因的突变会导致水稻小孢子发育停滞在双核早期；通过启动子加分子标记GUS分析表明0sMS4基因在花药、颖壳、心皮以及根等的维管束中特异表达；半定量RT-PCR也表明0sMS4基因在花、根中特异性表达，在茎、叶中均不表达；生理生化实验分析表明突变体成熟花粉粒内无淀粉积累；互补实验显示0sMS4基因可以恢复突变体的表型。说明该基因功能确实是影响到水稻的花粉发育，这种影响可能是通过调节花药组织中淀粉及其衍生物的运输来实现。本发明在发掘和利用水稻温光敏核不育方面具有明显的作用，可以产生新的水稻雄性不育系，用来生产杂交种子，开展轮回选择和创造基因库，在农业生产上具有十分重要的应用。图losms4突变体植株的形态学观察示意图其中A左边BDF为野生型9522，A右边CEG为osms4突变体。图2osms4突变体育性与温光环境的关系示意图。图30sMS4座位定位示意图。图40sMS4基因组序列示意图其中箭头表示突变位点。图5osms4突变体恢复表型及野生型9522RNAi的示意图其中A为9522，B为osms4，C为osms4互补转基因植株，D为反义转基因植株。图6osms4突变体和野生型9522花药组织切片示意图其中AB为野生型9522，CD为突变体osms4。图7osms4突变体和野生型9522糖运输差异示意图。具体实施例方式以下结合附图对本发明的实施例作详细说明本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆实验室手册(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例l:osms4突变体植株的获得和形态学的观察该突变体是本实验室用6°CoY射线诱变粳稻9522种子，处理剂量为280Gy。对诱变的F2代中一雄性不育突变体三代回交，获得隐性单基因调控的稳定遗传的突变体osms4。所有植物材料种植于上海市农业科学院试验基地。osms4突变体与粳稻9522回交，Fl代全部为可育，自交F2代中出现分离，其中正常植株为189，突变株为55，正常植株与突变植株比例接近3:l(x2二0.79口口>(°°5口3.84)，表明该雄性不育突变体表型由一个单核基因突变造成。对osms4突变体植株的形态学观察。如图1，野生型和突变型osms4的表型对比显示osms4突变型(右)比野生型(左)矮(A)，野生型(B，D)显示为黄色花药，突变型osms4(CE)显示白色花药。突变型osms4(G)的柱头比野生型(F)大。实施例2:osms4突变体育性与温光环境关系的研究一、大田实验通过2005至2007年连续三年对osms4的育性转换规律观察(上海农业科学院)，发现三年的不育期、可育期时间基本一致2005年，从8月20号见穗起到8月26号植株没有结实，表现为不育，8月27号一9月5号花粉粒可育率高，其中8月27-9月l号未套袋，结实率近100%，9月2号_9月5号套袋结实率最高达到60%，9月6号以后套袋没有结实。2006年，从8月20号见穗起到8月30号套袋不结实。8月3卜9月2号见穗花粉粒可育率高，套袋结实，9月3号以后套袋没有结实。2007年，从8月20号见穗起，至IJ8月28号套袋不结实，表现不育，8月29—9月l号花粉粒可育率高，套袋结实，表现可育，9月2号以后套袋没有结实，表现为不育。图2为2005至2007年8月1号一8月31号每天平均温度，从中可以看到从可育期(8月31号前后)向前12-20天平均温度高，其中向前12天左右以及20天左右3年中平均温度都高于30度。可见osms4突变体为新型反温光敏核不育材料，即高温短日照可育。2004至2006年连续三年在海南种植，12月份播种，次年3月份见穗，都表现为不育。二、控温条件下的育性表现2007年在国家杂交水稻工程技术研究中心进行了育性转换温度鉴定试验。初步结果表明osms4突变体可育条件为温度为27—37摄氏度，平均30.5度，光照12小时。以上数据表明，osms4突变体在高温，短日照的情况下育性发生转变，可以自交结实，是一种具有具大应用潜力的新型的可用于二系杂交水稻育种的材料。实施例3:0sMS4基因的定位和克隆(1)定位群体。将osms4与籼稻品系龙特甫B杂交，自交获得F2代，选择其中为雄性不育植株为定位群体。(2)水稻認A提取。采用改进的CTAB法。简单步骤如下取叶片O.1-0.2克(约半片)放到小研钵中，加入适量的液氮,立刻研磨至粉状，装入2ml离心管，加入700ul10(TC预热的1.5xCTAB溶液于离心管中，小心混匀后放入56'C水浴，20分钟后取出离心管，加入等体积氯仿/异戊醇，猛烈混匀，离心(13000rpm)10分钟，取上清于新管中，加入900ul无水乙醇混匀后一20。C放半小时以上。将析出的DNA离心，14000rpm(IO分钟)。去掉上清，将沉淀用lml70。/。乙醇清洗一次，离心干燥，溶于200ul1/10TE或水中，4。C冰箱保存。(3)InDel分子标记分析。InDel分子标记设计是根据比较粳稻日本晴籼稻9311两品系的已公布的核苷酸序列，对差异的部分设计引物，验证2个亲本粳稻9522和籼稻龙特甫B之间的多态性，PCR扩增程序为10ul体系中，lul模板，lul10pmol/ulPrimerl，lul10pmol/ulPrimer2，lul10XBuffer(Mg2+)，lul2mMdNTP，0.lulTaq，3.9ul水。通过6。/。的PAGE胶电泳，银染方法检测。(4)群体分离分析(bulkedsegregantanalysis)初定位方法。用132对标记进行扩增反应，发现l号染色体上的标记ZH104与0sMS4座位相联锁.选取附近的标记ZH106,在F2代分离群体进行进一步验证，都与0sMS4有连锁关系，并且初步将0sMS4定在ZH104和ZH106之间。为进一步定位0sMS4座位，扩大F2代群体到3000株，从中得到用于定为突变体750株.在ZH104和ZH106之间发展了8个InDel标记(表l)，最终将0sMS4座位定位在ZH134和ZH138之间(图3).通过在网上(http:〃www.tigr.org)下载的粳稻日本晴第2号染色体拼接的序列，分析ZH134和ZH138两标记别位于克隆AP00837上，物理距离为23kb(图3)。用分子标记对定位群体中的雄性不育单株进行基因型分析，利用M邻DrawV2.l构建目标基因区域的分子标记的连锁图谱。表l如下表lInDel分子标记及其核酸序列<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>(5)0sMS4基因的克隆。对23kb范围内的预测的MYB家族的基因测序，测序结果表明，突变体中在这个基因的第一个外显子上发生了一个核苷酸的缺失和一个G到A的颠换，从而造成突变(图4)。最终从克隆AK107461上(由RiceGenomeResourceCenter(RGRC)提供)分离到0sMS4基因全长cDNA(详见:0sMS4基因的全长cDNA序列)。PCR引物:0sMS4—lF:5，-ATGGCTCACGAGATGATGGGTGGC-3，;0sMS4-lR:5，-TCATGTCGCGCCGACGCCGAGG-3，。PCR反应程序94。C5min;l次；94。C30sec，55°C30sec;72°C30sec;34次，72°C5min，l次。实施例4:0sMS4基因的功能分析为了进一步验证这个基因的功能，构建了基因互补的载体，并转化突变体植株，观察突变体表型是否能够被恢复。所用引物为MYBF:5'-AGATCTGCTATGCACCTAGACGAGTGTTGTC-3，；MYBR:5'-GAATTCGTGACCACTGAGCAAGGAGTAGCTC-3'，以粳稻9522的基因组DNA为模板扩增一个4318bp的片断，其中包括0sMS4基因全长、启动子和终止子。将这个片断直接用PmaCI和BamHI双酶切后回收片断，连入相同酶切的pCAMBIA1301载体，测序验证正确，转化农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)EHA105，使用遗传手段转化到osms4突变体中，以观察是否会引起植株恢复野生型性状。图5显示osms4突变体恢复表型花药变成黄色，进一步用RNAi的方法将野生型中0sMS4基因沉默，转基因植株出现突变体的表型，花药变成白色。可见所克隆的0sMS4基因是引起osms4突变体表型的基因。通过对花药不育突变体osms4花器官发育各时期进行组织切片观察，发现0sMS4基因的突变会导致水稻在小孢子不能发育成正常的成花粉粒，没有淀粉积累(图6)。说明0sMS4基因是调控水稻雄性不育的基因，对花药组织中淀粉及其衍生物运输的调节是其可能的调控途径。实施例5:osms4突变体糖运输异常示意图将突变体与野生型花序浸泡在含有C-14标记蔗糖的水溶液中12小时左右，然后分别测定花药与颖壳分离中同位素的含量。结果表明从小孢子时期到成熟期，突变体花药、颖壳检测到的同位素含量都小于野生型。这说明突变体中糖的运输出现异常(见图7)。总之，本发明通过一新的水稻隐性雄性不育突变体osms4，通过遗传定位方法,分离到一个新的调控水稻温光敏核不育蛋白及其基因序列，该蛋白在调控水稻温光敏核不育方面具有明显的作用，可以利用该基因通过遗传工程的手段产生新的水稻雄性不育系，用来生产杂交种子，开展新型二系杂交水稻、轮回选择和创造基因库，在农业生产上具有十分重要的应用潜力。本发明涉及的序列及记号分列如下:(1)SEQIDNO.1的信息〈110>上海交通大学<120〉调控温光敏核不育的蛋白编码序列<130〉无〈160〉1〈170〉Patentlnversion3.3<210〉1〈211〉798〈212〉DNA<213>水稻(0ryzasativa)〈400〉1atggctcacg卿tgatgggtggcttcttcggccatccgccgccgccgcctgcgacggcg60gcggtgggtgaggagg鄉acg鄉tggtggagg卿cggaggagggtggccatggcgga120ggagttcagggg卿ctttgCgCg鄉gg3cactggcggcCggCgg鄉3cgccaagctc180aaggacctcgtcgcgcagtacggcccccagtcatcgccgagaagctcgac240ggc,tcaggg卿agctgcaggctgaggtggttcaaccagctggacccg3ggattaac300cgg兆ggcgttcacggaggagg3gg3ggagcggctcatggcggcgcaccgggCgt3CggC360咖aagtgggcgctcatcgcccgcctcttccccggccgcaccgacaacgccgtcaagaac420cactggcacgtcctcatggcgcgccgccaccgcgagcagtccggcgccttccgccgccgc480aagccttcctcctcctccgcctcccccgcccccgcccccgcgccgccgccgccgccgcag540cccgtcgtcgcgctccaccaCC3CC3CC3Ccggtactcgccgggtacagc600ggcgccgccg3gtCCg3CgElgtcggcctccacctgcaccaccgacctctccctcagctcc660ggcagcgccgcggccgccgccgccgccgccgcggcggcgsacatcccctgctgcttctac720c兆cgcggcggcgcccaagcC3CC3CCg3Ctccccttcttcgacttcctc780ggcgtcggcgcgacatga798(2)SEQIDNO.2的信息<110>上海交通大学〈120〉调控温光敏核不育的蛋白编码序列〈130〉无<160>1〈170〉Patentlnversion3.3〈210〉1<211〉265<212〉PRT〈213〉水稻(0ryzasativa)〈400〉1MAHEMMGGFFGHPPPPPATAAVGEEEDEVVKDLVAQYGPQ,LIAEKLDGRSGKSCRLRNKWALIARLFPGRTDNAVKNHWHVLMAR朋PVVALH腿HRYSQQYSGYSGAAESDESASQRGGAQATTDSHTIP卿FLGVGATEETEEGGHGGGVQGKLCARGHWRPAEDAKL60WFNQLDPRINRRAFTEEEEERLMAAHRAYG120REQSGAFRRRKPSSSSASPAPAPAPPPPPQ180TCTTDLSLSSGSAAAAAAAAAMNIPCCFY24026权利要求1、一种调控温光敏核不育的蛋白编码序列，其特征在于，所提供的一种分离出的DNA分子，该分子包括编码具有水稻OsMS4蛋白质活性的多肽的核苷酸序列。2、根据权利要求l所述的调控温光敏核不育的蛋白编码序列，其特征是，所述的序列具有SEQIDNO.2所示的氨基酸序列的多肽。3、根据权利要求1或2所述的调控温光敏核不育的蛋白编码序列，其特征是，所述的序列具有SEQIDNO.1中从核苷酸第1-798位的核苷酸序列。4、根据权利要求l所述的调控温光敏核不育的蛋白编码序列，其特征是，所分离出的调控水稻温光敏核不育的蛋白质活性的多肽，它包括具有SEQIDNO.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。5、根据权利要求l所述的调控温光敏核不育的蛋白编码序列，其特征是，所述的的DNA分子是一种核酸分子，它包含所述的DNA分子中8-100个连续核苷酸。全文摘要一种调控温光敏核不育的蛋白编码序列，属于基因工程领域。本发明所提供的一种分离出的DNA分子，该分子包括编码具有水稻OsMS4蛋白质活性的多肽的核苷酸序列，所述的序列具有SEQIDNO.2所示的氨基酸序列的多肽，所述的序列具有SEQIDNO.1中从核苷酸第1-798位的核苷酸序列。本发明在发掘和利用水稻温光敏核不育方面具有明显的作用，可以产生新的水稻雄性不育系，用来生产杂交种子，开展新型二系杂交水稻、轮回选择和创造基因库，在农业生产上具有十分重要的应用。文档编号C12N15/29GK101186919SQ20071017259公开日2008年5月28日申请日期2007年12月20日优先权日2007年12月20日发明者辉张,张大兵,梁婉琪,政袁申请人:上海交通大学